1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼活化A群脑膜炎球菌多糖制备的结合疫苗的免疫原性及其工艺稳定性
摘要：目的分析1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼（1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP）活化A群脑膜炎球菌多糖（group A meningococcal polysaccharide,Men APS）制备的A群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫原性及其工艺稳定性。方法用CDAP活化多糖后,己二酰肼（adipic dihydrazide,ADH）衍化,制备多糖-酰肼基衍生物,在碳二亚胺[1-ethyl-3-（3-dimethylaminopmpyl）carbodiimide,EDAC]作用下,与TT偶联,制备A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液（Men APSCDAP-TT）,考察其免疫特性;将Men A PSCDAP-TT与C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液混合,制备A、C群脑膜炎球菌结合疫苗（Men ACPSCDAP-TT）,再与市售的采用溴化氰（CNBr）活化多糖制备的A、C群脑膜炎球菌结合疫苗（Men ACPSCNBr-TT）进行抗A群多糖Ig G抗体水平的比较。连续制备12批结合疫苗原液及9批结合疫苗,原液参考《中国药典》三部（2010版）进行各项检定,疫苗进行抗A群多糖Ig G抗体水平的检测。结果 Men APSCDAP-TT具有T细胞依赖性抗原特性;Men ACPSCDAP-TT免疫2次后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT明显高于市售疫苗免疫2次后水平,差异有统计学意义（P均〈0.01）,也高于或相似于市售疫苗免疫3次后水平,但差异无统计学意义（P均〉0.05）;免疫3次后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT仍高于或相似于市售疫苗,但差异无统计学意义（P〉0.05）。连续制备的12批结合疫苗原液,内毒素含量均低于10 EU/μg多糖,未检出游离蛋白,多糖/蛋白值、结合多糖含量、结合物分子大小分布、EDAC和ADH残留均符合A群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程（试行）YBS01112006的要求,主要检测指标及多糖回收率趋势分析基本在均数±2标准差内;9批Men ACPSCDAP-TT免疫后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT均在A群脑膜炎球菌多糖的60倍以上。结论经CDAP活化多糖后衍化再与载体蛋白结合制备的A群脑膜炎球菌结合疫苗具�重组戊型肝炎疫苗的生殖毒性试验
摘要：目的探讨重组戊型肝炎疫苗对大鼠的生殖毒性。方法将Wistar雌性大鼠分为4组：低剂量组（每只20μg HEV）、高剂量组（每只40μg HEV）、生理盐水对照组及佐剂对照组,每组30只。雌鼠于交配前给药2次,初次给药后2周进行2次给药,2次给药后1周,进行雌雄鼠合笼交配,于妊娠7和14 d进行3、4次给药。每天观察雌鼠一般临床症状;交配前每周称雌鼠体重1次,交配后每周称体重2次,每周定期测定1次摄食量;于妊娠21 d安乐死孕鼠,分离出胎仔,检测疫苗对雌鼠生殖能力、胎仔发育、胎仔骨化程度、胎仔内脏畸形的影响,取孕鼠和胎仔血液,分离血清,ELISA法检测抗HEV Ig G抗体水平。结果各组大鼠精神状态未见异常,皮毛光亮,灵敏,大小便色正成形,注射局部未见充血、肿胀、溃烂、硬结等;疫苗对孕鼠体重、摄食量均无明显影响（P〈0.05）;各剂量组窝平均着床数、窝平均黄体数、窝平均活胎数、受孕率、活胎率、吸收胎率、死胎率、畸胎率与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）;各剂量组胎仔身长、尾长、体重、胎盘重和性别比与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）;各剂量组胎仔上枕骨的骨化程度均在0级和Ⅰ级正常范围以内,胸骨骨化不全率与生理盐水及佐剂对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;各组胎仔内脏均未见畸形;孕鼠及胎仔血清中均检测到抗HEV Ig G抗体。结论重组戊型肝炎疫苗对孕鼠及胎仔安全、有效。人乳头瘤病毒31和33型L1蛋白类病毒颗粒的制备及其免疫原性
摘要：目的采用汉逊酵母系统表达人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）31和33型L1蛋白类病毒颗粒（virus-like particles,VLPs）,纯化后检测其免疫原性。方法将表达HPV31和HPV33 L1蛋白的重组汉逊酵母工程菌经高密度发酵,收集菌体,进行高压均质破碎后,采用亲和层析法纯化HPV31和HPV33 L1 VLPs,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,透射电镜观察VLPs形态,动态光散射仪分析VLPs粒径大小及分布情况。将BALB/c小鼠随机分为3组：HPV31 L1 VLP组（蛋白含量0.5μg,铝含量0.24 mg）、HPV33 L1 VLP组（蛋白含量0.5μg,铝含量0.24 mg）和佐剂对照组（铝含量0.24 mg）,分别于0、1、3周经腹腔注射免疫小鼠,于每次免疫后1周经眼球采血,分离血清,采用假病毒中和试验检测血清中和抗体滴度。结果纯化的HPV31和HPV33 L1重组蛋白相对分子质量约为56 000,可与HPV L1通用型单克隆抗体发生特异性结合。经透射电镜及动态光散射观察,可见VLPs形成,但部分L1蛋白以五聚体的壳粒形式存在,未包装成颗粒。HPV31和33 L1 VLPs初次免疫后1周,即能诱导BALB/c小鼠产生较高滴度的血清中和抗体,且明显高于佐剂对照组（P〈0.05）,随着免疫次数的增加,HPV31 L1 VLP组和HPV33 L1 VLP组免疫小鼠血清中和抗体滴度也相应增加。结论应用汉逊酵母可高效表达HPV31和HPV33 L1重组蛋白,并形成VLPs。用含铝佐剂的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,具有较好的免疫原性,可作为多价重组HPV疫苗的组分抗原。乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性分析
摘要：目的分析乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性。方法按照《中国药典》三部（2010版）及武汉生物制品研究所有限责任公司《乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠返祖传代试验及小鼠脑内致病力试验SOP》,对随机抽取的28批乙型脑炎减毒活疫苗进行乳鼠返祖传代试验的脑内致病力检测,同时测定发病乳鼠脑组织悬液的病毒滴度,并应用SPSS 13.0软件对28批疫苗病毒滴度、发病乳鼠脑组织上清病毒滴度及发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力检测结果进行Kendall相关性分析。结果 28批乙脑减毒活疫苗病毒滴度为6.0-7.1 Lg PFU/ml,发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力（LD50）均低于3.0 Lg LD50/0.03 ml,发病乳鼠脑组织上清病毒滴度为5.8-7.0 Lg PFU/ml。发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力与疫苗滴度及发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间不存在相关性,而疫苗滴度与发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间低度相关。结论乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定,乳鼠传代返祖试验及其判定标准科学严谨,用于疫苗的质量控制是可行的,进一步表明SA14-14-2株遗传稳定性良好。插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫治疗分析
摘要：目的分析插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫治疗,开发用于结核病治疗用的新制剂。方法将结核分枝杆菌H37Rv株直接接种至9只中国恒河猴的肺脏,建立猴感染模型,随机分为3组,其中2组经猴背部脊柱周围皮内分别注射重组MVA-Ag85a（A组）和MVA-Ag85a-ESAT6（AE组）进行治疗,另1组作为未免疫对照组。经过20周定期观察,计算生存率,检测病变组织病理评分和细菌载量;采集猴外周血,分离血清,进行抗原特异性IFNγ分泌水平检测及临床症状监测。结果在实验终点,未免疫组仅存活1只猴,而A和AE组存活率为100%,与未免疫组相比具有明显的治疗作用。AE组组织病理总评分和细菌载量与未免疫组相比,显示较低的水平（P〉0.05）,而A组未表现出同样的优势。抗原特异性IFNγ分泌水平变化复杂,但差异无统计学意义（P〉0.05）。食欲、咳嗽、体重等指征以及炎症反应蛋白、血沉的变化与抗结核免疫治疗之间无显著的相关性。结论用重组MVA-Ag85a和MVA-Ag85a-ESAT6对结核分枝杆菌感染猴模型进行免疫治疗,取得一定的治疗效果,重组MVAAg85a和MVA-Ag85a-ESAT6或可作为结核感染的免疫治疗用候选分子。登革病毒1型E蛋白第三结构域的原核表达及其免疫原性
摘要：目的在大肠埃希菌中表达登革病毒（Dengue virus,DENV）1型（DENV-1）E蛋白第三结构域（EⅢ）,并分析重组蛋白的免疫原性。方法利用PCR技术从质粒p MD-D1pr M/E中扩增DENV-1的EⅢ序列,插入原核表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达质粒p ET-D1EⅢ,转化至E.coli Rosetta2（DE3）中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备多克隆抗体,采用Western blot法检测抗体的特异性,间接ELISA法检测抗体滴度,蚀斑减少中和试验（plaque reduction neutralization test,PRNT）检测中和抗体效价。用纯化的重组蛋白免疫经腹部皮下多点注射BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,用DENV-1（Hawaii株）经脑内攻击,分析重组蛋白对小鼠的免疫保护力。结果重组原核表达质粒p ET-D1EⅢ经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,主要以可溶性形式表达,占重组菌裂解上清蛋白量的52.37%;纯化的纯度可达90%以上,浓度达2 mg/ml;制备的多克隆抗体特异性强,效价高;重组蛋白能保护57.1%的小鼠免受致死剂量DENV的攻击。结论成功在E.coli Rossetta2（DE3）中高效表达了DENV-1 EⅢ蛋白,纯化的重组蛋白免疫家兔获得的多克隆抗体具有较强的特异性和较高的效价,且在小鼠免疫保护试验中显示出较好的保护力。本实验为进一步研究E蛋白的功能和登革新型疫苗的开发奠定了基础。乙型脑炎病毒在Vero细胞上的传代适应性及毒种库的建立
摘要：目的分析乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库。方法将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代（P3V1-P3V20）,采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度。优化JEV静置培养条件（维持液p H值、培养温度、MOI）及接种方式（单层接种法、混合接种法）,并进行培养规模的放大。采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析。建立JEV毒种库,并进行全面检定。结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lg LD50/ml。最适培养条件为：病毒维持液p H值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;最佳接种方式为：单层接种法。在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平。P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100%,传代稳定性良好。建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部（2010版）相关要求。结论已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础。6株金黄色葡萄球菌菌株的鉴定
摘要：目的对6株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus,简称金葡菌）菌株进行鉴定,为研制相关疫苗提供参考。方法将稀释的6株疫苗研制用备选金葡菌菌株49521、12602、49525、12605、55804、10832及质控菌株25923、12228菌悬液划线接种TSA平板及Columbia血平板,观察菌落形态,并涂片染色镜检;利用API Staph生化试剂盒、staphylase test血浆凝固酶检测试剂盒及30μg头孢西丁药敏纸片对菌株进行鉴定;利用PCR法鉴定菌株16S r RNA基因、荚膜基因型及mec A基因;用系列稀释的菌悬液经腹腔注射BALB/c小鼠,初步测定菌株毒力。结果6株金葡菌经平板培养,可见圆形、凸起、不透明、有光泽的菌落,Columbia血平板培养的菌落周围可见透明溶血环,镜检结果为革兰阳性球菌,呈单、双或葡萄串状排列。6株菌株的生化反应结果相同,且与质控菌株25923反应结果一致;6株菌株的凝固酶试验结果均为阳性,均对头孢西丁敏感,均未扩增出mec A基因片段,为甲氧西林敏感菌株（methicillin sensitive Staphylococcus aureus,MSSA）。6株菌株均扩增出1 544 bp的16S r RNA基因片段,与Gen Bank中的参考序列NR_075000.1的同源性均为99%;菌株49521、12605、55804、10832均扩增出340 bp的cap5基因片段,与Gen Bank中序列U81973.1的同源性为99%-100%;菌株12602、49525均扩增出171 bp的cap8基因片段,与Gen Bank中序列U73374.1的同源性均为100%。6株菌株的半数致死量（LD50）均在2.5×10^8-2.5×10^9 CFU之间。结论对6株疫苗研制用备选金葡菌进行了鉴定,为疫苗研制中菌株鉴定及不同荚膜型菌株的选择提供了参考。趋化因子CXCL12受体CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U87增殖及血管内皮生长因子、白细胞介素-8表达的影响
摘要：目的探讨趋化因子CXCL12受体CXCR4 sh RNA对胶质瘤细胞U87增殖及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）表达的影响,为胶质瘤的基因治疗提供实验依据。方法用脂质体Lipofectimine^TM 2000分别将CXCR4 sh RNA载体p GPU6/GFP/Rac1-421和非特异质粒p GPU6/GFP/NC转染U87细胞,并设未转染组,转染后48 h,采用RT-PCR法检测各组细胞中CXCR4基因m RNA的转录水平;转染后24、48、72 h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF和IL-8的含量。结果转染p GPU6/GFP/Rac1-421可使U87细胞中CXCR4基因m RNA的转录水平、细胞体外增殖活力及细胞培养上清中VEGF和IL-8的含量均明显降低,与p GPU6/GFP/NC组和未转染组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CXCR4 sh RNA可下调U87细胞中CXCR4基因m RNA的转录,抑制细胞增殖,降低VEGF和IL-8的产生,提示CXCR4在胶质瘤发展过程中具有重要作用。NaHCO3缓冲体系的动态变化对培养法支原体检查的干扰作用
摘要：目的探讨NaHCO3缓冲体系的动态变化对培养法支原体检查的干扰作用,确保生产过程中支原体污染检查的准确性。方法用NaHCO3缓冲液和NaOH分别调整狂犬病病毒收获液及不含病毒样本的病毒稀释液p H至6.92、7.51、7.65、7.85、8.04和8.48,分别接种于支原体半流体培养基和精氨酸支原体肉汤培养基,进行培养法支原体检查,检测结果为阳性的样品分别用指示细胞法（DNA染色法）和实时荧光PCR法进行复检。结果用NaHCO3缓冲液调整狂犬病病毒收获液p H值至7.85以上时,培养法支原体检查结果为阳性,但指示细胞法（DNA染色法）和实时荧光PCR法复检结果均为阴性,排除样品污染支原体的可能性。结论用NaHCO3调整病毒培养物等生物样品p H值达7.85以上时,对培养法支原体检测结果产生干扰作用。抗人肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体在CHO细胞中的表达及鉴定
摘要：目的在CHO细胞中表达抗人肿瘤坏死因子（human tumor necrosis factor-alpha,h TNF-α）人源单克隆抗体,并对抗体纯化后进行鉴定。方法将含有编码抗h TNF-α人源单克隆抗体轻、重链可变区及恒定区基因的真核表达质粒p HL,利用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染CHODG44细胞,经氨甲喋呤（methotrexate,MTX）加压筛选和单克隆筛选,获得分泌表达抗h TNF-α人源单克隆抗体的CHO细胞株。应用Mab Select Su Re和Capto adhere两步层析纯化抗体后,分析抗体的纯度、N-末端序列、结合动力学平衡常数及中和活性。结果经两步层析后,抗h TNF-α人源单抗经SDS-PAGE分析,可见纯度较好的抗体重链、轻链和完整抗体条带,SEC-HPLC纯度为98.79%;抗体的轻、重链N-末端氨基酸序列与预期一致,其结合动力学平衡常数（KD）为1.34×10^-10 M,能拮抗TNF-α对L929细胞的杀伤作用,对TNF-α细胞毒的中和率达90%左右。结论在CHO细胞中成功表达了具有较好中和活性的抗h TNF-α人源单克隆抗体。腺苷A_（2B）受体激动剂Bay60-6583对脓毒症模型小鼠的治疗作用
摘要：目的研究腺苷A2B受体激动剂Bay60-6583对脓毒症模型小鼠的治疗作用。方法采用腹腔注射活金葡菌（10^8 CFU）制备小鼠脓毒症模型,观察Bay60-6583（2 mg/kg）、头孢曲松钠（25 mg/kg）单独或Bay60-6583与头孢曲松钠（2 mg/kg＋25 mg/kg）联合给药对脓毒症模型小鼠的治疗效果,设正常对照组和感染组。采用ELISA试剂盒检测给药后小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,并使用血球计数板计数小鼠腹腔灌洗液中白细胞数。结果 Bay60-6583和头孢曲松钠单独给药均降低脓毒症模型小鼠死亡率,但联合给药组几乎完全消除小鼠死亡,与感染组或单独给药组相比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;Bay60-6583单独或联合给药均明显降低小鼠血清中炎性细胞因子含量（P〈0.05）,但不改变小鼠腹腔灌洗液中白细胞数（P〉0.05）,而头孢曲松钠单独用药则略微降低血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量（P〉0.05）。结论 Bay60-6583通过抑制脓毒症小鼠炎性细胞因子表达发挥其治疗作用,与头孢曲松钠联合用药是合理的脓毒症治疗策略。人肺炎球菌参考血清09CS的制备及其中13个肺炎球菌结合疫苗血清型抗体的IgG含量和调理吞噬滴度
摘要：目的制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗（pneumococcal conjugate vaccine,PCV）血清型（1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型）的抗荚膜多糖抗体Ig G含量和调理吞噬滴度进行定值。方法用23价肺炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人,采集免疫后血浆,进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干,制备人肺炎球菌参考血清09CS。在WHO细菌性呼吸道病原参考实验室（University of Alabama at Birmingham,UAB）和兰州生物制品研究所有限责任公司（Lanzhou Institute of Biological Products,LIBP）实验室,采用WHO推荐的Pn PS ELISA法,以国际标准血清89SF为标准,对其中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量定值;以临时定值的09CS为标准,检测12份WHO校正血清、16份LIBP质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。同时以调理吞噬杀菌试验（opsonophagocytic killing assay,OPA）测定针对13个血清型的调理吞噬滴度。结果制备了5 000支（0.5 ml/支）冻干人肺炎球菌参考血清09CS,残留水分含量2.3%。确定了09CS中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的临时定值;以09CS为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系（r≈1.00,P〈0.05）;以09CS为标准检测的89SF的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差百分率的绝对值均〈20%。确立了09CS中13价PCV血清型调理吞噬滴度。结论 LIBP成功制备了人肺炎球菌参考血清09CS,完成了对其中的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的准确定值,并确定了调理吞噬滴度。人α1微球蛋白ELISA检测试剂盒的制备及初步应用
摘要：目的制备人α1微球蛋白（alpha 1-microglobulin,α1-MG）ELISA定量检测试剂盒,并初步应用于临床标本的检测。方法用重组人α1-MG蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,对单抗的特性进行鉴定后,采用双抗体夹心ELISA方法制备α1-MG试剂盒,并进行线性范围、灵敏度、准确性、精密性验证。应用制备的试剂盒检测100份健康人血清中的α1-MG含量,计算正常参考值;分别应用试剂盒及放射性免疫分析法（radioactive immunoassay,RIA）检测87份人血清标本,分析试剂盒与RIA法检测结果的相关性。结果经间接ELISA法筛选及克隆化培养,共获得4株稳定分泌抗α1-MG单抗的杂交瘤细胞株;制备的试剂盒最佳线性范围为0.5-60 mg/L,灵敏度为0.03 mg/L,检测不同浓度α1-MG的回收率在92.7%-97.1%之间,批内、批间变异系数（CV）分别为4.78%-8.57%和4.30%-6.84%;该试剂盒检测健康人血清样本中α1-MG含量正常参考值为15-32 mg/L,与RIA法的检测结果具有良好的相关性（r=0.958 6）。结论制备的人α1-MG ELISA检测试剂盒具有较高的准确性和灵敏度,且与RIA法具有良好的相关性,符合临床免疫分析的要求,适用于临床检测和科研应用。抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体的制备及鉴定
摘要：目的制备抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体,并进行鉴定。方法用重组蛋白p GEX-MIC6作为抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,对融合后的杂交瘤细胞进行筛选后,经腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水,鉴定单抗的亚类。采用辛酸-硫酸铵法结合蛋白亲和层析柱纯化腹水,SDS-PAGE分析抗体的相对分子质量,间接ELISA法检测抗体效价及特异性,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定抗体浓度。结果最终获得两株能稳定分泌新孢子虫MIC6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A1和1H11,分泌的抗体分别属于Ig G1和Ig G2b亚类。纯化后的腹水经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约为50 000的重链和25 000的轻链条带,纯化效果较好;1A1和1H11的腹水效价分别为5.12×10^4和1.024×10^5,浓度分别为0.935和2.010 mg/ml,两株单抗均能特异性识别新孢子虫,与弓形虫无交叉反应。结论制备的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体特异性较强,为进一步研究新孢子虫MIC6的生物学功能及建立特异敏感的新孢子虫检测方法奠定了基础。国产冻干人用狂犬病纯化疫苗（Vero细胞微载体）的接种反应和免疫原性
摘要：目的观察国产冻干人用狂犬病纯化疫苗（Vero细胞微载体）的接种反应和免疫原性。方法在山东省高密市按临床方案的入选标准选取年龄在10-60岁,身体健康,无犬伤史、狂犬病疫苗接种史及该疫苗接种禁忌证的志愿者,分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期进行临床试验,按照免疫程序,接种国产冻干人用狂犬病疫苗,Ⅱ期临床试验以进口同类疫苗作为对照,进行接种反应和免疫原性观察。结果试验组疫苗接种后,不良反应发生率低,以人数计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期不良反应发生率分别为6.1%、7.8%和7.7%,未见中、强反应,反应均为注射部位疼痛,不伴有局部红肿和硬结,为局部弱反应,未出现体温升高等全身反应,72 h时疼痛消失。Ⅱ、Ⅲ期临床免疫后,血清抗体阳转率14和45 d均为100%。试验组与对照组不良反应发生率和免疫后血清抗体阳转率差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论国产冻干人用狂犬病纯化疫苗（Vero细胞微载体）接种反应轻微,且具有良好的免疫原性。征稿
摘要：《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。 本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。荧光定量PCR方法在脊髓灰质炎病毒突变分析中的应用
摘要：目的建立检测脊髓灰质炎病毒突变比例的荧光定量PCR方法,并进行验证及初步应用。方法分别建立检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法,并进行特异性、重复性和灵敏度验证。通过Ct值计算样品的突变比例（revertant proportion,RP）,并进行准确性和重复性验证。采用建立的荧光定量PCR方法检测脊髓灰质炎病毒减毒株的突变比例。结果建立的检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法能够特异性扩增相应基因片段;重复性试验Ct值的变异系数（CV）为0.085%-5.564%;灵敏度为1×10^-7-1×10^-6ng,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型非突变荧光定量PCR可分别检测到含量约0.084 3、0.029 2和0.266 7 CCID50的病毒。荧光定量PCR测定RP的方法经验证发现,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型混合质粒对照的RP检测值与理论值的差异较小,分别为0.040 9±0.037 4、0.008 8±0.034 3和-0.029 6±0.026 8。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎减毒株的RP分别为0.001 0、0.002 0和0.001 7。结论荧光定量PCR分析脊髓灰质炎病毒突变比例的方法,特异性、重复性及准确性均较好,并具有较高的灵敏度,可用于实验室内部对脊髓灰质炎病毒的突变比例测定,并可能成为脊髓灰质炎病毒体内或体外神经毒力评价的替代方法。
