卡介苗生产用菌株的遗传稳定性研究
摘要：目的 观察我国生产用卡介苗上海D2PB302菌株（以下简称卡介苗上海D2株）的遗传稳定性。方法 提取卡介苗上海D2株工作种子批4、7、10、13、15代单批培养物基因组DNA,以其为模板,PCR扩增16S核糖体RNA（16S ribosomal RNA,16S rRNA）基因,并进行测序鉴定;对卡介苗上海D2株缺失区RD1、RD2、RD8、RD14、RD16及双组分系统操纵子SenX3-RegX3串联重复序列进行多重PCR检测;对卡介苗上海D2株缺失区RD1及Esat6基因进行多重PCR检测;并对基因座SenX3-RegX3进行序列分析。结果 卡介苗上海D2株工作种子批4、7、10、13、15代单批培养物的16S rRNA序列均未发生变异,与GenBank中登录的Pasteur1173P2株序列（AM408590.1）相似性为100%;卡介苗上海D2株工作种子批各代次特征性凝胶电泳图谱显示条带位置均相同,其基因座SenX3-RegX3有3个串联重复序列,每个串联重复序列均以ATG起始,TG结尾,且前后重叠连接在一起;卡介苗上海D2株工作种子批各代次中均缺少编码毒力的Esat6基因。结论 卡介苗上海D2株与国际常用卡介菌亚株相比具有其特征性的遗传学特性,在传代15代次以内,分子遗传学特性稳定。在《中国药典》三部（2010版）规定的12代次内制备疫苗,卡介苗遗传特性一致。2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会征文通知
摘要：由中华预防医学会生物制品分会和中国药学会生物药品与质量研究专业委员会共同主办，《中国新药杂志》和国药中生上海生物制品研究所有限责任公司联合承办的“2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会”定于2013年11月14。15日在上海召开。会议邀请国内外著名专家学者作专题报告，参会人员包括国内外从事疫苗、血液制品、重组蛋白药物、基因治疗药物、重组单抗药物、诊断试剂、生产和检定用细胞及实验动物等领域的产学研机构及质量标准研究和质量检验检测机构的科技工作者，相关政府部门领导专家和企业家等共计约800人。现面向国内外专业人士征集大会论文。希望大家踊跃投稿，积极参会交流。柯萨奇病毒A组16型免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析
摘要：目的 对柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie virus groups A type16,CoxA16）4个毒株进行免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析。方法 提取CoxA16G20、KM/M08、MY08和KM208病毒RNA,PCR扩增VP1基因,并进行测序;利用MEGA4.0软件中Bootstrap Test of phylogeny→Neighbor-joining方法对13株CoxA16基于VP1基因全序列构建CoxA16种系进化树并进行基因分型,使用DNAMAN软件对4个毒株VP1核苷酸序列的同源性及其蛋白质氨基酸序列差异位点进行分析。分别用纯化灭活后的4株CoxA16免疫BALB/c小鼠,于初次免疫和二次免疫后的第14、28天采血,分离血清,Western blot法检测G20毒株免疫的小鼠血清中抗体的的特异性;微量中和试验法检测血清中和抗体效价并进行交叉中和试验。结果 G20、MY08和KM208毒株属于B2b基因型,而KM/M08毒株属于B2a基因型;4个毒株间VP1基因核苷酸序列的同源性为91.8%～99.0%;MY08与其他3个毒株相比,在VP1的第102位（N→D）、241位（E→K）和248位（T→A）上存在3个差异氨基酸位点。G20毒株的抗血清可特异识别CoxA16的VP1和VP2蛋白,具有良好的免疫原性;各实验组二次免疫后第28天中和抗体效价均高于其他检测时期,其中MY08组中和抗体效价明显低于其他3组,差异有统计学意义（P﹤0.01）;G20、KM/M08、和KM208毒株间的交叉保护能力优于MY08毒株对G20、KM/M08和KM208毒株的交叉保护能力,但差异无统计学意义（P跃0.05）。结论 4株CoxA16灭活后均能诱导机体产生相应的中和抗体和交叉保护能力,其中G20、KM/M08和KM208毒株在灭活后,显示了更好的免疫原性和毒株间交叉保护能力。不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果
摘要：目的 研究不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果。方法 将重组LTB-VP1和BSA蛋白分别用氢氧化铝吸附后,制备成不同浓度的亚单位疫苗,以100、50、20、10、5和1μg/只的剂量免疫昆明小鼠,共免疫3次。于初次免疫后第14、28、42、56天断尾采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平和特异性IgG1/IgG2a比率,并采用尿素变性法检测小鼠血清中抗体相对亲合力指数（abidityindex,AI）。结果 LTB-VP1和BSA抗原激发的抗体水平随免疫次数的增加而不断升高,与抗原剂量呈非线性关系,不同抗原的合适使用剂量也不相同。LTB-VP1抗原以20μg/只剂量产生的抗体水平和抗体的AI值最高;IgG1/IgG2a平均值为1.04,各剂量组Th1/Th2型免疫反应处在一种平衡状态。BSA抗原在5和100μg/只剂量时激发的抗体水平相近,抗体的AI值差异有统计学意义（P约0.05）;IgG1/IgG2a平均值为2.4,各剂量组以Th2型免疫反应为主。结论 抗体水平不随抗原剂量的增加而增加,低剂量抗原即可产生较好的免疫效果,为兽用疫苗的临床使用提供了数据参考。一次性培养瓶在水痘减毒活疫苗生产中的应用
摘要：目的 比较一次性培养瓶与方瓶培养人二倍体细胞2BS株的效果。方法 接种相同浓度的人二倍体细胞2BS株至一次性培养瓶和小方瓶中,（37±0.5）℃静置培养3d,于显微镜下观察细胞生长状态,并进行细胞计数。用0.025～0.05MOI水痘-带状疱疹病毒Oka株感染2BS细胞,（35±0.5）℃静置培养3d,待细胞病变达70%以上时,收获病变细胞,制备冻干水痘减毒活疫苗,并参考水痘减毒活疫苗注册标准及《中国药典》（三部）2010版,进行各项指标检定。结果 在接种2BS细胞浓度相同的情况下,与方瓶相比,一次性培养瓶可增加一定的细胞培养面积,细胞总数相对较高;一次性培养瓶培养的2BS细胞贴壁速度较快,呈梭形,密度高,方向性好,轮廓清晰,分布均匀,胞质饱满,而方瓶培养的2BS细胞贴壁速度较慢,生长不均匀;使用一次性培养瓶及方瓶培养2BS细胞生产的水痘减毒活疫苗,各项检定指标结果均符合《中国药典》（三部）2010版相关要求,在病毒滴度无明显差异的情况下,使用一次性培养瓶可使水痘疫苗产量大幅度增加。结论 使用一次性培养瓶培养人二倍体细胞2BS株生产的水痘减毒活疫苗疫苗产量较方瓶有较大幅度的提高。毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价
摘要：目的 构建毕赤酵母（Pichia pastoris）组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶（staphylococcus nuclease,SNase,NucA）,以评价其表达外源蛋白的能力。方法 从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP）片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经SacⅠ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性。结果 组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的 蛋白相对分子质量约为17000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显著的核酸酶活性。结论 成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础。TF—CTP—OD2-HA融合蛋白的原核表达及纯化
摘要：目的 构建pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白。方法 以前期构建的质粒p32a（＋）CTP-OD-HA为模板,PCR扩增寡聚化结构Ⅱ（Oligomerization domain,OD）中起关键作用的OD2基因序列,与胞浆转导肽（Cytoplasmic transduction peptide,CTP）和流感病毒血凝素抗原表位（Hemagglutinin,HA）连接后,克隆至pCold-TF-DNA质粒中,构建质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA,同时构建质粒pCold-TF-CTP-HA作为对照。将两种质粒分别转化E.coliBL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果 质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA和pCold-TF-CTP-HA经PCR、双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白TF-CTP-OD2-HA和TF-CTP-HA相对分子质量分别约为63000和58000,两种融合蛋白均主要存在于破菌上清中,表达量分别约占菌体总蛋白的32%和25%,破菌沉淀中有少量表达;纯化的融合蛋白纯度均达95%以上,均可与鼠抗HA-tag多克隆抗体特异性结合。结论 成功构建了pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了融合蛋白,为后续研究其在CML中的作用机制奠定了基础。枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因的克隆与表达
摘要：目的 克隆、表达枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因,并检测其酶学性质。方法 从枯草芽孢杆菌染色DNA中,PCR扩增枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因Sapr,插入载体pET-28a（＋）中,构建重组分泌型表达质粒pET-28a-Sapr,热激转化大肠埃希菌（E.coli）BL21（DE3）,25及37℃条件下,IPTG诱导重组蛋白表达,表达的重组蛋白经10%SDS-PAGE分析,并采用Folin法测定酶活性。结果 重组表达质粒经双酶切及PCR鉴定,证明构建正确,测序结果表明与GenBank中登录的序列同源性达100%;表达的重组蛋白相对分子质量约39600,最佳诱导温度为25℃,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的12%;重组菌发酵产物酶活性为322U/ml。结论 在大肠埃希菌中成功表达的特异蛋白具有生物学活性,为进一步研究改性分离蛋白的功能特性奠定了基础。结核分枝杆菌ATP依赖的丝氨酸蛋白酶调节亚基C2基因原核表达质粒的构建及表达
摘要：目的 构建结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）ATP±赖的丝氨酸蛋白酶调节亚基C2（ATP-de原pendent Clp regulatory subunit C2,ClpC2）基因的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白。方法 以MTBH37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增ClpC2基因,插入表达载体pET32a（＋）中,构建重组原核表达质粒pET32a（＋）-ClpC2,经双酶切及测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和West原ern blot进行鉴定。结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约46000,可与鼠抗组氨酸单克隆抗体特异性结合。结论 已成功构建了重组表达质粒pET32a（＋）-ClpC2,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpC2蛋白的生物学功能奠定了基础。绿脓杆菌外毒素A受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65融合蛋白的表达及纯化
摘要：目的 在大肠埃希菌中融合表达绿脓杆菌外毒素A（pseudomonas exotoxin A,PEA）受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65（heat shock protein65,HSP65）,并进行纯化。方法 从含PEA的质粒中扩增PEA受体结合区亚基PEAⅠ,克隆至pET-28a-HSP65质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-HSP65-PEAⅠ,转化大肠埃希菌（E.coil）BL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE分析;利用抗PEA受体结合区单抗杂交瘤细胞制备抗PEA受体结合亚基单抗,偶联免疫亲和层析介质,将表达的重组蛋白经DEAE Sepharose4FF阴离子交换层析、Phenyl Sepharose6FF疏水层析和免疫亲和层析进行纯化。结果 重组质粒经PCR鉴定及测序,证明构建正确;表达的重组HSP65-PEAⅠ蛋白相对分子质量约93000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上;抗PEA受体结合亚基单抗效价可达1：10000。纯化的重组HSP65-PEAⅠ蛋白纯度达90%以上。结论 已成功在大肠埃希菌中表达并纯化了重组融合蛋白HSP65-PEAⅠ,为防止PA感染后多器官衰竭综合征的免疫制剂的研究奠定了基础。重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及其纯化
摘要：目的 原核表达并纯化重组人脂蛋白相关磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2）,并初步确定其保存条件。方法 将重组表达菌pCold TF-LP-PLA2-BL21（DE3）和pET28-HRV3C-BL21（DE3）分别经IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后,经Ni-Sepharose6FF金属螯合层析粗提重组蛋白,经HRV3C蛋白酶酶切去除融合标签后,用Blue Sepharose6Fast Flow（蓝胶）染料亲和层析及HiPrep16/60Sephacryl S-100HR分子筛进行分离纯化;通过人LP-PLA2临床检测金标准ELISA试剂盒验证重组蛋白;将重组LP-PLA2置于含10mmol/L CHAPS和0.5mmol/L PMSF的PBS溶液中,分别于4℃、室温、37℃保存1周以及-20、-80℃冻存4个月后,确立重组蛋白的保存条件。结果 重组LP-PLA2相对分子质量约100000,以可溶性形式表达,包涵体无表达;纯化后的重组LP-PLA2蛋白含量为3.68mg/ml,蛋白回收率为21%,纯度可达95%,可被ELISA试剂盒识别,且具有良好的线性关系（R2=0.9964）;重组LP-PLA2于4℃保存1周,-20、-80℃冻存4个月,均无降解现象。结论 成功表达、纯化了重组LP-PLA2,并初步确定了其保存条件。重组质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70的构建及其表达
摘要：目的 构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70,并筛选稳定表达Her2蛋白的细胞株。方法 采用RT-PCR法扩增人乳腺癌SKBR-3细胞中Her2和hsp70基因,插入质粒pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70,经双酶切后,回收hsp70基因,连接入质粒pcDNA3.1-Her2的N-末端,构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70。将质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1-Her2-hsp70分别转染小鼠乳腺癌4T-1细胞,采用Westernblot法检测Her2蛋白的表达。结果 重组表达质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70及pcDNA3.1-Her2-hsp70经双酶切鉴定,证明构建;转染质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70的4T-1细胞中可见相对分子质量约65000的Her2蛋白的表达。结论 已成功构建了重组质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70及pcDNA3.1-Her2-hsp70,并获得了稳定表达Her2蛋白的小鼠乳腺癌4T-1细胞,为进一步探讨佐剂辅助异种抗原产生的抗肿瘤免疫效应奠定了基础。SCAP-SREBP-1c-ACC1在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用
摘要：目的 探讨SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用。方法 以人肝细胞L02及人肝肿瘤细胞HepG2为研究对象,利用1μmol/L毒胡萝卜素（Thapsigargin）诱导肝细胞建立内质网应激模型,设未处理细胞作为对照;采用酶比色法检测细胞内甘油三酯含量,Real-time PCR法检测固醇调节元件结合蛋白-1c裂解激活蛋白[sterol regulatory element binding protein-1c（SREBP-1c）cleavage-activating protein,SCAP]基因mRNA水平,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白-78（glucose-regulated protein-78,GRP-78）、SCAP、SREBP-1c、乙酰辅酶A羧化酶1（acetyl-CoA carboxylase1,ACC1）蛋白的表达水平。结果 在内质网应激状态下,实验组两种细胞中甘油三酯水平、SCAP基因mRNA水平以及GRP-78、SCAP、SREBP-1c、ACC1蛋白的表达水平较对照组均明显增加（P均〈0.01）。结论 已成功建立内质网应激脂肪变性细胞模型。SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路可能介导内质网应激状态下肝细胞脂肪变性。征稿
摘要：《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管，中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办，是中华预防医学会系列杂志之一，月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域，如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。优先报道基金项目及各种基金赞助课题的文章，并适当照顾边远地区和基层单位。钙调神经磷酸酶对金黄色葡萄球菌肠毒素C2超抗原活性的作用
摘要：目的 探讨钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）对金黄色葡萄球菌肠毒素C2（staphylococcal enterotoxin C2,SEC2）发挥超抗原活性的作用。方法 以终浓度为0.5、1、2、3和4μg/ml的重组野生型rSEC2及其增强型突变体蛋白mSEC2（T20L/G22E/H118A/H122A）刺激SD大鼠脾淋巴细胞,MTT法检测大鼠脾淋巴细胞增殖水平;检测终浓度为1μg/ml的rSEC2和mSEC2在诱导大鼠脾淋巴细胞增殖过程中CaN活性的变化、终浓度为0.1、0.5、1、2和3μg/ml的CaN特异性抑制剂环孢菌素A（cyclosporine A,CsA）对该过程的影响,以及CaN3个亚基CaN Aα、CaN Aβ、CaN B在mRNA水平上的变化。结果 在低浓度rSEC2和mSEC2刺激下,大鼠脾淋巴细胞增殖指数（proliferation index,PI）与给药浓度成正比,高浓度刺激下,可明显抑制大鼠脾淋巴细胞的增殖,1μg/ml浓度增殖效果最好;CsA对大鼠脾淋巴细胞增殖具有较强的抑制作用,呈明显的剂量±赖性,当CsA浓度为0.5～1μg/ml时,rSEC2和mSEC2的刺激作用即被完全抑制;CaN的活性及其相关亚基（CaN Aβ和CaN B）mRNA水平与其超抗原的刺激增殖活性具有明显相关性。结论 CaN对SEC2发挥超抗原活性具有重要作用,为提高SEC2的临床应用价值及规避毒副作用奠定了理论基础。血管紧张素转换酶2过表达对大鼠急性心肌梗死后心室重构的影响及其分子机制
摘要：目的 探讨血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme2,ACE2）过表达对大鼠急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）后心室重构的影响及其可能的分子机制。方法 采用开胸结扎冠状动脉法建立SD大鼠AMI模型,将模型大鼠随机分为MI、MI＋（NS）、MI＋AdEGFP、MI＋AdACE2组,另设SHAM（假手术）组,每组15只,MI＋NS、MI＋AdEGFP和MI＋AdACE2组沿心肌梗死周边区选取5个点,通过直接心肌内注射方式分别注射NS、AdEGFP和AdACE2,SHAM和MI组不注射。术后4周末,采用Western blot法检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中ACE2、α-SMA、MKP-1、ERK1/2、p-ERK1/2、P38、TGF-β1蛋白的表达;HE染色后于普通显微镜下观察心肌组织结构及细胞炎症变化,天狼猩红-饱和苦味酸染色后于普通显微镜及偏振光显微镜下分别观察心肌胶原表达分布情况;SP免疫组化染色法检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中AngⅡ、Ang（1-7）、α-SMA蛋白的表达,同时采用ELISA法检测Ang（1-7）蛋白的表达;使用羟脯氨酸试剂盒检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中羟脯氨酸含量。结果 术后4周末,MI＋AdACE2组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中ACE2蛋白的表达量显著高于其他各组,同时Ang（1-7）蛋白的表达量也显著升高（P〈0.05）;与SHAM组相比,MI、MI＋NS、MI＋AdEGFP组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中AngⅡ、Ang（1-7）、α-SMA蛋白的表达量显著升高（P〈0.05）,MI＋AdACE2组与MI、MI＋NS、MI＋AdEGFP组相比,AngⅡ、α-SMA蛋白表达水平降低,Ang（1-7）蛋白表达水平升高更显著;与MI、MI＋NS、MI＋AdEGFP各组相比,MI＋AdACE2组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中MKP-1蛋白的表达水平明显增加（P〈0.05）,p-ERK、P38、TGF-β1蛋白的表达水平降低,羟脯氨酸含量显著降低（P〈0.05）;HE染色和天狼猩红-饱和苦味酸染色证实,ACE2对AMI后梗死周边区的炎症反应和胶原重塑均有明显的改善作重组人锰超氧化物歧化酶的胃蛋白酶酶解特性及其稳定性
摘要：目的 探讨重组人锰超氧化物歧化酶（rhMn-SOD）的胃蛋白酶酶解特性及其稳定性。方法 在37℃条件下,用模拟胃液（0.084mol/LHCl,35mmol/LNaCl,pH2.0,4000U胃蛋白酶）处理rhMn-SOD不同时间,SDS-PAGE分析酶解效果;使用总SOD测定试剂盒检测rhMn-SOD在不同温度（25、37、45、55、65、75℃）下保存不同时间（10、20、30、40、50、60min）、不同pH（4.0～10.0）、不同化合物（氯仿、甘油、DMSO、10%SDS、β-巯基乙醇、苯酚、30%H2O2）处理后及日光和紫外照射后的相对活力。结果 rhMn-SOD在模拟胃液中处理2min即可完全酶解。在25～55℃范围内,rhMn-SOD具有较好的热稳定性,在65～75℃范围内,rhMn-SOD的热稳定性较差;在pH6.0～8.0范围内,rhMn-SOD具有较好的稳定性;rhMn-SOD对甘油和氯仿不敏感,经DMSO、SDS处理后,活力大幅下降,经β-巯基乙醇、苯酚、30%H2O2处理后,基本失活;rhMn-SOD经日光和紫外照射3h,活力基本不变。结论 分析了rhMn-SOD的胃蛋白酶酶解特性、热稳定性、pH稳定性、对不同化合物的敏感性以及光稳定性,为其广泛应用于化妆品、药品、食品添加剂等领Ⅱ奠定了基础。肝X受体激动剂对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的保护作用
摘要：目的 观察肝X受体（liver X receptor,LXR）激动剂GW3965预处理对大鼠肝移植缺血再灌注损伤（ischemia-reperfution injury,IRI）的影响及其对肝功能的保护作用。方法 将雄性SD大鼠随机分为2组,GW3965预处理组于供体大鼠尾静脉注射LXR激动剂GW3965,0.3mg/kg;对照组于相同部位注射相同剂量的生理盐水。参照改进的Kamada两袖套法建立大鼠原位肝移植模型,分别于肝移植术后3、6、24h,采用全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）含量,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）含量,Western blot法测定移植肝脏组织中白细胞介素-1受体相关激酶-4（interleukin-1receptor-associated kinase-4,IRAK-4）、干扰素调节因子3（interferon-regulator3,IRF3）蛋白的表达,凝胶迁移试验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）测定核因子-kappa B（nuclear factor-资B,NF-资B）的相对活性度,并观察肝脏组织的病理学变化。结果 与对照组比较,GW3965预处理组血清中ALT、TNF-α含量在各时间点均明显降低（P〈0.05）,肝脏组织中IRAK-4、IRF3蛋白的表达以及NF-资B相对活性度也明显降低（P〈0.05）;GW3965预处理组各时间点肝组织的损伤均较对照组明显减轻。结论 LXR激动剂GW3965可抑制TLR4信号通路中的IRAK-4、IRF3蛋白的表达水平和NF-资B的活化,从而减轻肝移植IRI,在肝脏移植IRI中起到保护作用。
