狂犬病病毒减毒株CTN-181的免疫原性
摘要：目的评价狂犬病病毒减毒株CTN-181的免疫原性。方法用不同病毒滴度的CTN-181株病毒对小鼠分别进行口腔或肌肉免疫,14 d后,分别用狂犬病病毒CVS株进行脑内或肌内攻毒,14 d后,计算小鼠的免疫保护力;同时于免疫后14、21和30 d,采用RFFIT法检测小鼠血清抗狂犬病病毒中和抗体水平。结果两种途径免疫的小鼠均产生了较强的保护作用和较高的中和抗体水平。口腔免疫后脑内和肌内攻毒的50%保护剂量分别为1.4×105和1.4×104PFU/ml;肌肉免疫后脑内和肌内攻毒的50%保护剂量分别为1.4×106和1.4×105PFU/ml。小鼠口腔免疫CTN-181病毒量≥1.4×105PFU/ml 14 d后,即可产生有效的保护,至30 d时,1.4×106和1.4×107PFU/ml剂量组中和抗体水平达20 IU/ml以上;肌内免疫产生的中和抗体水平较低。结论 CTN-181减毒株具有良好的免疫原性,以较低病毒量免疫小鼠即可产生高水平的中和抗体和保护作用。33株柯萨奇病毒A组16型分离株的全基因序列分析
摘要：目的对2008～2010年北京和青岛地区流行的33株柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie virus A16,CA16）分离株的全基因序列进行分析。方法收集2008～2010年北京和青岛地区CA16感染患者咽拭子标本,采用Vero细胞对病毒进行分离,并经噬斑纯化。提取病毒RNA,采用RT-PCR法分段扩增CA16全长基因,经序列测定和拼接后,利用DNAStar和MEGA5.10软件分析全基因序列。结果经病毒分离和噬斑纯化,共获得33株CA16分离株;33个分离株之间的核苷酸序列同源性大于90.9%,与CA16国际标准株G10各区段的核苷酸序列同源性为72.7%～89.0%,氨基酸序列同源性为79.3%～100.0%;与近年中国分离的CA16 SZ/HK08-7株同源性较高,全基因组同源性大于91.5%,各区段核苷酸序列同源性均大于83.7%;在基于VP1序列的种系进化树中,BJWG16、BJWG17、BJWG20等23个分离株属于C1亚型,其余10个分离株属于C3亚型。结论 2008～2010年北京和青岛地区流行的33株CA16分离株均为C基因型。本研究对我国CA16分子流行病学、毒力位点的研究以及疫苗株的选择具有重要意义。重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒型特异性遗传变异分析
摘要：目的分析重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV）的遗传多样性。方法采用RT-PCR法从重庆地区中蜂囊状幼虫病病死幼虫体内扩增CSBV的2段结构蛋白和1段非结构蛋白的编码序列,并克隆至pMD18-T载体进行双向序列测定,所得序列在NCBI上进行BLAST搜索,以进行同源性分析;应用ClustalW2软件进行多序列比对分析;应用SNAP软件计算同义替换率（Synonymous substitution rate,dS）、非同义替换率（Nonsynon-ymous substitution rate,dN）及其比值（dS/dN）;采用MEGA 4软件的邻接法（Neighbor-joining）中的最大可能性算法（Maximum likelihood method）构建系统进化树。结果 CSBV重庆分离株片段SB1-2、SB6-7和SB14-15的序列同源性高于99.06%,序列保守,3个片段序列均只发现少数点变异碱基,属于亚洲型,与东方蜜蜂广州分离株和韩国分离株的亲缘关系最近;CSBV重庆分离株存在特有的核苷酸和氨基酸位点,且与亚洲型分离株存在广泛的共有基序;亚洲型分离株的替换率高于欧洲型分离株。结论 CSBV分离株存在型特异的遗传变异规律。呼吸道合胞病毒F2蛋白与结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6蛋白的融合表达及纯化
摘要：目的在大肠杆菌中融合表达呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）F2蛋白与结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）早期分泌抗原靶6（Early secretory antigenic target-6,ESAT-6）蛋白,并进行纯化。方法分别从MTB标准菌株H37Rv及含F蛋白全长基因的pMD18-T-f质粒中扩增esat-6-f2基因,插入原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30a-esat-6-f2,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,经镍离子亲和层析柱纯化。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;重组融合蛋白ESAT-6-F2相对分子质量约为21 000,主要以包涵体形式表达,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的融合蛋白纯度可达90%以上。结论成功在大肠杆菌中表达并纯化了重组融合蛋白ESAT-6-F2,为进一步研究其免疫原性和免疫保护性奠定了基础。STAT3过度表达和激活对骨髓间充质干细胞瘤样转化的作用
摘要：目的探讨在体外模拟的肿瘤微环境中,骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）中STAT3的过度表达和激活对其恶性转变的影响。方法通过MSCs分别与C6胶质瘤及星型胶质细胞间接共培养,模拟MSCs生长的肿瘤微环境,实验设实验组、阳性和阴性及空白对照组,MTT法检测各组细胞的增殖情况;RT-QPCR检测各组细胞中STAT3、CyclinD1及BCL-xl基因mRNA的表达水平;Western blot检测各组细胞中STAT3、P-STAT3、CyclinD及BCL-xl的蛋白表达水平;病理HE染色检测各组细胞注入裸鼠皮下成瘤情况。结果实验组MSCs生长接触抑制明显减弱,增殖活性增高;实验组STAT3、CyclinD1及BCL-xl基因mRNA的表达水平均明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,与阳性对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;实验组STAT3、P-STAT3、CyclinD1及BCL-xl的蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,与阳性对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;HE染色结果显示,实验组与阳性对照组细胞深染,聚集明显,排列不规则,细胞核大深染,瘤内有大量新生血管增生,可见组织坏死。结论 STAT3及P-STAT3的过度表达和激活,可能是造成MSCs在肿瘤微环中恶性转变的重要原因之一。重组人β-神经生长因子在昆虫细胞中的表达、纯化及其生物学活性
摘要：目的在昆虫细胞中表达重组人β-神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβ-NGF）,并对表达产物进行纯化和生物学活性鉴定。方法构建rhβ-NGF杆状病毒表达质粒Bacmid＋[rhβ-NGF],利用脂质体cellfectionⅡ将质粒转染至昆虫细胞Sf9中,用转染细胞的上清反复感染Sf9细胞,大量收获含目的蛋白的培养上清,利用离子交换层析和分子筛层析纯化rhβ-NGF,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过鸡胚背根神经节培养法检测rhβ-NGF的生物学活性。结果重组表达质粒Bacmid＋[rhβ-NGF]经测序证实构建正确;重组病毒感染的Sf9细胞可表达rhβ-NGF;纯化的rhβ-NGF蛋白经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约14 200的单一条带,纯度大于98%,能与兔抗人NGF单克隆抗体特异性结合,并能刺激神经节突起生长,其比活性约为600 000 AU/mg。结论成功在昆虫细胞中表达了有生物学活性的rhβ-NGF,为其大量制备奠定了基础。B细胞在MOG_（35-55）诱导的小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用
摘要：目的探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE）小鼠模型的可能机制。方法采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型;采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观察脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘状况,流式细胞术检测B细胞活化程度,免疫组化法检测脾组织生发中心的形成,ELISA法检测IgG1、IgG2a和IgG2b的分泌水平。结果成功建立了MOG35-55诱导的EAE小鼠模型,EAE组临床评分明显高于弗氏完全佐剂（Complete Freund adjuvant,CFA）组（P〈0.001）,EAE组小鼠脊髓可见明显的炎性细胞浸润和脱髓鞘斑块;在EAE组发病起始期（免疫后第5天和第8天）,外周免疫器官活化B细胞表达水平明显高于CFA组（P〈0.01）;在发病高峰期（免疫后第15天）EAE组小鼠脾中形成生发中心,而CFA组未见生发中心形成,且外周血抗MOG35-55抗体分泌水平明显高于CFA组（P〈0.005）。结论 MOG35-33肽段可以诱导B细胞活化,进而可能通过发挥体液免疫作用介导EAE疾病的发生。埃可病毒9型分离株MSH-KM812 VP1基因的遗传特征
摘要：目的分析2010年昆明市引起手足口病（Hand,foot and mouth disease,HFMD）的病原埃可病毒9型（Echovirus 9,E9）分离株MSH-KM812 VP1基因的遗传特征。方法分别采用RD细胞和Hep-2细胞对3份HFMD患儿粪便标本进行病毒分离,应用RT-PCR法分2段扩增病毒VP1基因,并进行序列测定。应用NCBI BLAST软件对所测定的节段序列进行比对;Omiga软件对所测定的节段序列的核苷酸及推导的氨基酸序列进行编辑、比对和拼接;应用Mega 5.05软件进行序列分析,并与15个E9参考株的VP1基因序列进行比较,构建基因系统进化树。结果从3份HFMD患儿粪便标本中分离到1株E9,命名为MSH-KM812,其VP1区的核苷酸长度为888 bp。MSH-KM812株与其他15个E9参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为78.6%～98.0%和87.5%～99.3%,与中国分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.7%～98.0%和97.0%～99.3%,其中与中国江苏分离株M10MF37 China2010核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为98.0%和99.3%,而与德国分离株Hill的核苷酸和氨基酸序列同源性最低,分别为78.6%和87.5%。基因进化树分析显示,MSH-KM812分离株与中国江苏分离株M10MF37 China 2010和中国山东分离株05189-SD-CHN-2005-E9属于同一个进化分枝。结论 MSH-KM812分离株为E9,与中国其他分离株同属一个进化分枝。重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合白细胞介素-2或干扰素γ诱导小鼠的脾淋巴细胞免疫应答
摘要：目的观察重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2（Recombinant Toxoplasma gondii phosphoglycerate mutase 2,rTgPGAM2）联合白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）或干扰素γ（Interferonγ,IFNγ）滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨IL-2和IFNγ的佐剂效应。方法将48只BALB/c小鼠随机均分为6组：rTgPGAM2组（30μg）、IL-2组（500 IU）、IFNγ组（1 000 IU）、rTgPGAM2（30μg）＋IL-2（500 IU）组和rTgPGAM2（30μg）＋IFNγ（1 000 IU）组和对照组（20μl PBS）,免疫途径均为滴鼻免疫,共免疫3次。末次免疫后第14天,颈椎脱臼处死小鼠,CCK-8法检测各组小鼠脾淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4和IL-10水平。结果经rTgPGAM2刺激后,与对照组比较,各免疫组小鼠脾淋巴细胞刺激指数（Stimulation index,SI）均显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组（P〈0.01或P〈0.05）;经ConA刺激后,仅IL-2组SI显著高于对照组（P〈0.01）。各免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2和IFNγ含量均显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组（P〈0.01或P〈0.05）;rTgPGAM2组及其联合IL-2或IFNγ组IL-4含量显著高于对照组（P〈0.05）;而IL-10的含量,只有IFNγ组和rTgPGAM2＋IFNγ组显著高于对照组（P〈0.05）。结论 rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ鼻内免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答优于rTgPGAM2单独免疫,表明IL-2和IFNγ具有良好的佐剂效应,IL-2的佐剂效应更佳。PML（NLS~-）干扰对HL-60细胞增殖与凋亡的影响
摘要：目的探讨缺失核定位信号的PML,即PML（NLS-）干扰对急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法将靶向PML（NLS-）基因的3组干扰质粒pGpu6-PML（NLS-）shRNA和阴性对照质粒pGpu6-NCshRNA分别转染HL-60细胞,转染后48 h,G418筛选阳性克隆,分别命名为Si-1、Si-2、Si-3和NC组,并设空白对照组。采用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞中PML（NLS-）基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术分析细胞的细胞周期及凋亡情况。结果 Si-1和Si-2组HL-60细胞PML（NLS-）基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平与空白对照组相比明显减低（P〈0.05）,有干扰效果;Si-1组HL-60细胞的增殖水平与空白对照组相比明显降低（P〈0.05）,以转染后48 h降低最为显著（P〈0.01）;抑制PML（NLS-）表达可引起HL-60细胞S期比例增高,G1和G2期比例下降（P〈0.05）;Si-1组细胞凋亡率明显高于NC组和空白对照组（P〈0.05）。结论干扰PML（NLS-）的表达可促进HL-60细胞的凋亡,抑制其增殖。激活素A抑制脂多糖活化巨噬细胞的作用机制
摘要：目的探讨激活素A（Activin A）抑制脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）活化巨噬细胞的作用机制。方法取小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别添加Activin A（5 ng/ml）、LPS（1μg/ml）和Activin A（5 ng/ml）＋LPS（1μg/ml）,同时设以含单纯2.5%胎牛血清的DMEM培养液培养的细胞作为对照孔,培养24 h后,采用还原酶法检测细胞分泌一氧化氮（Nitric oxide,NO）的水平,流式细胞术分析TLR2和TLR4蛋白的表达水平,RT-PCR分析细胞ActRⅡA和ActRⅡB基因mRNA的转录水平。结果 Activin A和LPS单独作用均促进RAW264.7细胞分泌NO,但二者联合使用时,Activin A可抑制LPS刺激RAW264.7细胞的NO分泌;Activin A能抑制LPS上调RAW264.7细胞TLR4蛋白的表达,但对TLR2蛋白的表达无影响;LPS可促进RAW264.7细胞ActRⅡA基因mRNA的转录水平,但对ActRⅡB基因mRNA的转录水平无影响。结论 Activin A通过调控TLR4途径抑制LPS的作用,LPS可能通过促进ActRⅡA的表达进一步增强Activin A的负反馈调节作用。Arc基因表达及甲基化与幼龄鼠和成年鼠空间记忆形成的相关性
摘要：目的探讨Arc基因表达及甲基化与幼龄鼠和成年鼠空间记忆形成的相关性。方法应用Morris水迷宫对2月龄幼龄鼠和6月龄成年鼠进行定位航行训练,以判断其空间记忆形成情况。采用RT-PCR检测定位航行训练后大鼠海马组织Arc基因mRNA的转录水平,并对海马基因组DNA进行亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation specific polymerase chain reaction,MS-PCR）检测Arc基因的甲基化情况,并进行DNA甲基化序列分析。结果随着定位航行训练入水次序及训练天数的增加,幼龄鼠逃避潜伏期缩短（P〈0.05）;而成年鼠在训练当天随着入水次序的增加,逃避潜伏期缩短,但第2天逃避潜伏期不仅与入水次序有关,也随着放入点距离的增大,逃避潜伏期相对延长（P〈0.05）,至第3天逃避潜伏期与入水次序及距离均无关,形成稳定的记忆能力。成年鼠定位航行训练组海马组织Arc基因mRNA的转录水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,且高于幼龄鼠（P〈0.05）。与幼龄鼠正常对照组相比,幼龄鼠和成年鼠定位航行训练组第8和24位点均无甲基化,成年鼠定位航行训练组与正常对照组相比,甲基化位点无变化。结论幼龄鼠瞬时记忆能力接近成年鼠,但形成稳定记忆的能力弱于成年鼠。Arc启动子甲基化影响其mRNA的表达,而Arc基因mRNA的转录水平与大鼠空间记忆能力及年龄相关,进一步证实了甲基化参与调解学习和记忆。邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯诱导隐睾对SD幼鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响
摘要：目的探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯[D（i2-ethylhexy1）phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只。玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5～19.5天分别每日灌胃玉米油（2 ml）和DEHP（500 mg/kg）,正常对照组不给药。取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况。结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组（P〈0.000 1）,Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组（P〈0.01）;DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组（P〈0.000 1）。结论孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关。蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其分子机制
摘要：目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其可能的分子机制。方法经小鼠腋窝皮下注射结肠腺癌C26细胞,建立肿瘤恶病质模型,并设正常对照组（HC组）。将模型小鼠分为肿瘤恶病质组（CC组）和MG132治疗组（MG组）,待小鼠进入恶病质状态后,CC组小鼠经腹腔注射0.1 ml生理盐水,MG组小鼠经腹腔注射0.1 mg/kg的MG132,7 d后处死小鼠,称量小鼠肿瘤、左侧腓肠肌和附睾脂肪的重量,测量腓肠肌纤维横切面积,ELISA法检测血清中炎性因子TNF-α和IL-6的水平,RT-PCR及Western blot法检测腓肠肌中IKBa、P65、MuRF1和MAFbx基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果与CC组相比,MG组小鼠腓肠肌和附睾脂肪组织的重量分别增加了31.6%和39.5%（P〈0.05）,腓肠肌纤维横切面积增加了36.1%（P〈0.05）;血清中TNF-α和IL-6的水平分别降低了20.9%和42.0%（P〈0.05）;腓肠肌组织IKBa基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别升高了132.7%和56.5%（P〈0.05）,MuRF1基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了70.1%和42.6%（P〈0.05）,MAFbx基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了76.8%和47.3%（P〈0.05）,P65基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了59.1%和53.1%（P〈0.05）。结论 MG132改善肿瘤恶病质的分子机制可能与抑制NF-κB途径及MuRF1和MAFbx的表达、抑制炎症反应及肿瘤生长有关。冰点下降法测定注射用胸腺肽的渗透压
摘要：目的采用冰点下降法测定注射用胸腺肽的渗透压,并观察其稳定性。方法用制备的0.9%NaCl和5%葡萄糖标准溶液对渗透压摩尔测定仪进行标定后,连续测定5次注射用胸腺肽的渗透压,计算变异系数（CV）,验证该方法的精密度;取20批注射用胸腺肽,每瓶分别用500 ml和125 ml 0.9%NaCl溶液及5%葡萄糖溶液稀释,测定其渗透压;将注射用胸腺肽分别置（6±2）℃放置12个月,（25±2）℃放置6个月,分别于不同时间取样,稀释后测定渗透压,观察其长期和加速稳定性。结果 5次测得的注射用胸腺肽渗透压的变异系数为0.401%。20批注射用胸腺肽的渗透压在287～347 mOsmol/kg之间,以不同体积的0.9%NaCl和5%葡萄糖稀释样品后测得的渗透压的变异系数均较小,表明样品的渗透压批间差异较小;在稀释液量相同的条件下,5%葡萄糖试验组的渗透压显著高于0.9%NaCl组（P均〈0.001）。注射用胸腺肽分别于（6±2）℃下放置12个月和（25±2）℃、相对湿度（60±10）%的条件下放置6个月,其渗透压均无显著变化。结论冰点下降法操作简便、快速,精密度高,可用于注射用胸腺肽渗透压的检测。苏尼替尼对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶表达和活性的影响
摘要：目的探讨苏尼替尼（Sutent）对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydro-genase,GAPDH）表达和活性的影响。方法用不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖活力的影响;Western blot检测HeLa细胞中GAPDH蛋白表达的变化;GENMED细胞GAPDH活性终点比色法定量检测了GAPDH的活力。结果经Sutent处理24 h后,HeLa细胞的增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性,半数抑制浓度（IC50）为10.283μmol/L;Sutent可明显降低HeLa细胞中GAPDH蛋白的表达量,并能直接抑制GAPDH的活力。结论 Sutent可抑制HeLa细胞的增殖,降低GAPDH蛋白的表达量及活力,显示了其作为多靶点药物的重要研究价值。辛二酰苯胺氧肟酸对人脐静脉内皮细胞增殖及血管形成的影响
摘要：目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone deacetylases inhibitor,HDACi）辛二酰苯胺氧肟酸（Suberoy-lanilide hydroxamic acid,SAHA）对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖及血管形成能力的影响。方法收集处于对数生长期的HUVEC,以不同浓度的SAHA分别处理24和48 h,另设不加SAHA的对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,并计算增殖抑制率和半数抑制浓度（IC50）。采用流式细胞术检测经15μmol/L SAHA处理48 h的HUVEC凋亡和细胞周期,基质胶体外血管生成试验检测HUVEC的体外成管能力,Western blot法检测HUVEC细胞周期及凋亡相关蛋白的表达水平。结果随着SAHA浓度的增加及作用时间的延长,其对HUVEC增殖的抑制作用增强,SAHA浓度高于80μmol/L时,抑制率增加不明显,24和48 h的IC50值分别为60.53和30.49μmol/L;经15μmol/L SAHA处理48 h,与对照组相比,HUVEC的凋亡率明显增加（P〈0.001）,S期细胞比例明显升高（P〈0.001）,G0/G1期比例明显降低（P〈0.001）,体外成管能力明显下降,P21、caspase-3激活型、caspase-9酶原和激活型蛋白的表达水平均明显升高（P〈0.001）。结论 SAHA能够抑制HUVEC增殖及体外血管形成能力,并使P21、caspase-3和caspase-9蛋白水平上调,为肿瘤的治疗提供了一种新的思路。抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠的制备及初步应用
摘要：目的制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,并进行初步应用。方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗荧光素单克隆抗体;制备腹水,经50%硫酸铵粗提后,再经阴离子交换树脂DE52进一步纯化单克隆抗体;采用氧化共沉淀法制备纳米磁性粒子;乳液聚合法制备羧基磁性微球;用碳二亚胺将抗荧光素单克隆抗体共价偶联于磁性微球表面,制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠。用制备的免疫磁珠检测乙肝表面抗原,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果共获得5株杂交瘤细胞株,其中1F12细胞株分泌的抗体效价、相对亲和力较高,特异性较好;纯化的1F12株单抗的纯度达95%,蛋白含量为2.4 mg/ml,ELISA效价为106,相对亲和力为0.2 mg/L,与FITC标记的BSA可特异性结合;纳米磁性粒子的平均粒径为150 nm,铁含量为71.63%;羧基磁性微球的平均粒径为210 nm,羧基含量约为2.15 mmol/g;每克羧基磁性微球可结合抗荧光素单克隆抗体约12 mg,制备的免疫磁珠可有效结合荧光素标记的蛋白。应用抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度高于ELISA试剂,检测限达0.1 ng/ml。结论成功制备了抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,其具有应用于免疫检测分析的价值。
