中国生物制品学杂志社
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中国生物制品学杂志

《中国生物制品学杂志》在全国影响力巨大,创刊于1988年,公开发行的月刊杂志。创刊以来,办刊质量和水平不断提高,主要栏目设置有:基础研究、预防制品、治疗制品、诊断制品、临床观察等。
  • 主管单位:国家卫生健康委员会
  • 主办单位:中华预防医学会;长春生物制品研究所
  • 国际刊号:1004-5503
  • 国内刊号:22-1197/Q
  • 出版地方:吉林
  • 邮发代号:12-128
  • 创刊时间:1988
  • 发行周期:月刊
  • 期刊开本:A4
  • 复合影响因子:0.55
  • 综合影响因子:0.437
相关期刊
服务介绍

中国生物制品学 2012年第03期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志疫苗研究

两株灭活轮状病毒疫苗的免疫效果

摘要:目的研究轮状病毒(Rotavirus,RV)P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗的免疫原性及不同血清型间的交叉识别作用。方法采用Vero细胞转瓶培养RV,经纯化灭活、佐剂吸附等工艺,制备RV P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗,分别经肌内免疫Wistar大鼠和猕猴,采用ELISA法和微量病毒中和试验检测大鼠和猕猴血清中RV特异性抗体效价和中和抗体效价,流式细胞术检测猕猴血液中CD4+和CD8+T细胞的数量。结果 P[8]G1和P[2]G3株疫苗样品的RV抗原含量分别为10 240和5 120 EU/ml;免疫2次后,P[8]G1和P[2]G3株疫苗诱导大鼠产生的血清IgG抗体GMT分别为(43 407.71±1 654.51)和(41 520.61±2 047.61),诱导猕猴产生的血清IgG抗体GMT分别为(13 654.45±3 125.27)和(10 350.68±997.83);单一血清型疫苗免疫后产生的中和抗体具有型间交叉识别作用;2株疫苗免疫猕猴后均能刺激其CD4+T淋巴细胞增殖,CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论 2株RV灭活疫苗均具有良好的免疫原性及型间交叉识别作用。
262-265

斯氏艾美耳球虫兰州株Rhomboid基因的克隆及原核表达

摘要:目的克隆并原核表达斯氏艾美耳球虫(Eimeriastiedai,Estiedai)兰州株Rhomboid基因。方法通过分析基因保守区设计引物,采用RT.PCR方法与3’RACE技术相结合,扩增获得兔斯氏艾美耳球虫Rhomboid基因cDNA全序列,并对其进行序列分析;将获得的Rhomboid基因克隆至原核表达载体pET.28a中,转化E.coliRosetta(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS.PAGE及Westernblot分析。结果Rhomboid基因开放阅读框全长774bp,编码257个氨基酸残基,预测蛋白质相对分子质量和等电点分别为28120和8.64,与鸡柔嫩艾美耳球虫(Etellan)Rhomboid蛋白氨基酸序列的同源性为84.44%;构建的重组原核表达质粒pET.Rhomboid经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29000,并可与兔抗Estiedai阳性血清发生特异性反应。结论成功克隆并表达了Rhomboid基因,为其生物学功能及以其作为斯氏艾美耳球虫疫苗候选基因的研究奠定了基础。
266-269

气单胞菌二联灭活疫苗生产工艺的初步建立

摘要:目的初步建立嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和温和气单胞菌(Aeromonas sobria)二联灭活疫苗的生产工艺。方法用50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,确定发酵培养时间、甲醛灭活浓度及与佐剂乳化比例,对制备的疫苗进行质量检测,并分析佐剂与无佐剂二联灭活疫苗的免疫效果。结果 50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌菌株10~12 h时,A650值达峰值;0.3%的甲醛于37℃灭活24 h,可完全灭活菌液;以灭活菌液与佐剂1∶1.5比例混合较合适;制备的佐剂二联灭活疫苗各项质量指标均合格,免疫保护效果优于无佐剂二联灭活疫苗。结论已初步建立嗜水气单胞菌和温和气单胞菌二联灭活疫苗的生产工艺。
270-272
中国生物制品学杂志消息

康宁HYPERFlask多层细胞培养瓶大规模培养甲型流感病毒

摘要:传统甲型流感病毒的大规模生产是采用T-175培养瓶。为了提高病毒产量,需要一次性使用大量的组织培养瓶以达到要求的数量。康宁公司开发的HYPERFlash多层细胞培养瓶共有10层,在相同的体积内具有10倍于T-175培养瓶的生长面积,有利于甲型流感病毒的大规模培养,可大大提高培养效率。
272-272
中国生物制品学杂志基础研究

高尔基体囊泡转运蛋白P115基因沉默对胃癌细胞凋亡的影响及其机制

摘要:目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白P115基因沉默对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其可能的相关机制。方法将含p115基因的重组质粒p115 shRNA-1318转染BGC-823细胞,并设shNC(阴性对照)转染组和空白对照组,免疫荧光显微镜检测转染效果;RT-PCR法检测细胞中p115和巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因mRNA的转录水平;Western blot检测细胞中P115、MIF及核内肿瘤抑制蛋白质P53的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的分布。结果转染后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,表明转染成功;与对照组相比,p115 shRNA-1318组细胞中的p115和MIF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显降低(P〈0.05),细胞核内P53蛋白的表达水平明显增加(P〈0.05),细胞的增殖活力明显下降(P〈0.05),细胞凋亡数量明显增加(P〈0.05),G1/G2期细胞数量明显增多,S期细胞数量明显减少(P〈0.05)。结论沉默p115基因可促进胃癌细胞的凋亡,其调控机制可能是通过调控MIF因子来完成的。
276-280

旋毛虫新生幼虫期特异性T314基因真核表达质粒的构建及表达

摘要:目的构建旋毛虫(Trichinellaspirals)新生幼虫期特异性T314基因真核表达质粒,并在BHK细胞中进行表达。方法从旋毛虫新生幼虫RNA中通过RT-PCR技术扩增无信号肽T314全长基因,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1,脂质体法转染BHK细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,Westernblot检测T314融合蛋白的表达。结果重组真核表达质粒T314-pEGFP—N,经双酶切及测序证实构建正确;转染的BHK细胞48h转染效率最高;表达的T314融合蛋白可与旋毛虫感染的猪血清发生特异性反应。结论已成功构建了T314基因重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1,并在BttK细胞中融合表达,为进一步研究旋毛虫包囊形成机制奠定了基础。
281-284
中国生物制品学杂志消息

第14届上海国际生物技术和医药研讨会通知

摘要:为推动我国生物技术与医药的研发和产业化,及时了解国内外生物医药技术的最新动态和发展趋势,上海市现代生物与医药产业办公室将在2012年5月9~11日,在上海国际会议中心继续举办"第14届上海国际生物技术与医药研讨会(BIO-FORUM2012)"。
284-284
中国生物制品学杂志基础研究

超声微泡介导ABCB1a基因siRNA质粒转染的效率及对ABCB1a和P-gp表达的影响

摘要:目的研究超声微泡介导ABCB1a基因siRNA质粒转染L2RYC细胞的效率以及对ABCB1a水平和P-糖蛋白(P glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法制备脂质微泡;设计4对siABCB1a序列,并构建4种真核表达质粒pSES-siABCB1a;转染L2RYC细胞(单纯质粒组、质粒+微泡组、质粒+超声组、质粒+微泡+超声组),另设空白对照组。采用流式细胞术检测质粒的转染效率;实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后L2RYC细胞中ABCB1a基因及P-gp的表达。结果 4种pSES-siABCB1a质粒经PCR、双酶切及测序证实构建正确;质粒+微泡+超声组pSES-siABCB1a质粒可高效转染L2RYC细胞,可见荧光表达,转染效率为(49.35±5.89)%;转染后ABCB1a基因mRNA及P-gp的表达均明显降低(P〈0.05)。结论超声微泡可促进外源基因体外转染L2RYC细胞,siABCB1a能有效抑制ABCB1a基因和P-gp的表达。
285-289

戊型肝炎病毒RdRp基因真核表达质粒的构建及表达

摘要:目的构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据。方法利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体中,并在其3′端插入EGFP报告基因,构建融合表达质粒pcDNA3.0-RdRp-EGFP,脂质体法转染PLC/PRF/5、A549和HepG2细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-nPCR检测RdRp基因mRNA的转录情况,Westernblot检测RdRp蛋白的表达。结果重组表达质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确;RdRp基因和蛋白在A549和HepG2细胞中可高效、特异性表达。结论成功构建了RdRp基因真核表达质粒,并在A549和HepG2培养细胞中大量表达,为进一步研究RdRp在HEV复制过程中的功能奠定了基础。
290-293

自噬在熊果酸抑制人脐静脉内皮细胞增殖中的作用

摘要:目的研究自噬在熊果酸(Ursolic acid,UA)抑制人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖中的作用,探讨UA抑制血管生长的机制。方法体外培养HUVECs,分别采用不同浓度的UA和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+UA联合处理,采用MTT法检测UA对HUVECs增殖的抑制作用及其联合3-MA对HUVECs存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构;微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3)免疫荧光和流式细胞术检测UA对HUVECs自噬表达水平的影响;RT-PCR检测自噬相关基因Beclin1和MAP1-LC3B转录水平的变化。结果 UA可抑制HUVECs增殖,且呈剂量依赖性;HUVECs经UA处理后,自噬泡数量明显增加;经UA处理后,可上调HUVECs中MAP1-LC3蛋白的表达水平,MAP1-LC3阳性细胞的荧光强度较对照组明显增强;UA处理HUVECs不同时间可上调MAP1-LC3B及Beclin1 mRNA的转录水平;而UA联合3-MA处理后,HUVECs的增殖抑制作用明显增强。结论UA抑制HUVECs增殖,并诱导其发生自噬,自噬在此过程中起保护性作用,抑制自噬可明显增强UA诱导的HUVECs死亡。
294-299
中国生物制品学杂志消息

赛多利斯(Sartorius)超滤产品问卷调查

摘要:尊敬的用户,赛多利斯(Sartofius)于2012年3月推出一款全新的用于浓缩生物大分子的离心超滤浓缩装置VivaspinTurbo15,有8种不同的截留分子量可供选择。更大面积的双排垂直膜使浓差极化和堵塞程度降至最低,确保最快的浓缩速度。光滑的内部设计确保在整个离心过程中保持最快的过滤速度,直至样品浓缩至100μl。它可以帮助生物学领域的科研人员快速、高效、安全的完成4—15ml生物样品的100倍浓缩。与市场上其他超滤浓缩装置不同,VivaspinTurbo15特有的尖角死体积收集器可以很好的保证浓缩样品的重现性以及浓缩样品的完全回收。
299-299
中国生物制品学杂志基础研究

与乳腺癌细胞MCF-7相关的旋毛虫TS498基因的克隆与表达

300-303

外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制

摘要:目的探讨外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法采用MTT、台盼蓝拒染、Hoechst、Westernblot、免疫细胞化学、免疫荧光和荧光素酶活性分析法检测S100A6对B16细胞增殖、凋亡、B.catenin的水平和分布、β-catenin/TCF4转录活性及经典Wnt信号途径(即Wnt/β-catenin信号)的下游靶基因c-myc表达的影响。结果GST-hS100A6可抑制B16细胞的增殖,且呈时间.剂量依赖性;GST—hS100A6作用72h后,B16细胞的凋亡率较GST对照组增加1.43倍;携带S100A6基因的重组腺病毒AdS100A6作用72h后,B16细胞中β-catenin的表达量较对照腺病毒AdGFP组增加43.9%;GST—hS100A6可使B16细胞中β-catenin的表达增加,且以胞核增加为主;GST.hSl00A6作用后,B16细胞的B。catenin/TCF4转录活性增至GST对照组的7.4倍,且该信号途径的靶基因之一c-myc的表达也增加70.4%。上述结果与GST对照组之间的差异均有统计学意义(P均〈0.05或0.01)。结论S100A6具有抑制黑色素瘤增殖、促进凋亡和上调其Wnt/β-catenin信号途径活性的作用,且上调Wnt/β-catenin信号途径活性可能是S100A6对黑色素瘤抑制性作用的机制之一。
304-308

恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的基因合成、原核表达及纯化

摘要:目的人工合成恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Macaca mulatta granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,mGM-CSF)基因,在大肠杆菌中高效表达并纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码子偏爱性优化设计并合成mGM-CSF基因,克隆至原核表达载体pET-43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,IPTG诱导表达。表达的重组mGM-CSF蛋白经Sephacryl S-200分子筛层析纯化,复性后,Western blot检测其反应原性,MTT法检测其生物学活性。结果重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度可达95%以上,并可与大鼠抗人GM-CSF单克隆抗体特异性结合,比活性为1.2×107IU/mg。结论在大肠杆菌中高效表达了重组mGM-CSF蛋白,纯化复性后的蛋白具有良好的生物学活性。
309-313

Y-盒结合蛋白-1基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响

摘要:目的观察Y-盒结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组质粒pGSi2和阴性对照质粒HK转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中YB-1、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖活力、细胞周期及凋亡的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果 pGSi2组MDA-MB-231细胞较HK组细胞YB-1 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P〈0.01);沉默YB-1表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,且细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达也较HK组明显下降(P均〈0.05)。结论YB-1 shRNA可以沉默MDA-MB-231细胞中YB-1的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并抑制细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达。
314-317

代谢性胰岛素抵抗对肥胖大鼠心肌缺血/再灌注耐受性的影响

摘要:目的探讨代谢性胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)对肥胖大鼠心肌缺血/再灌注(Myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)耐受性的影响。方法将Wistar大鼠随机分为对照组(Cont组)、罗格列酮组(Rosi组)和肥胖组(Obes组),Rosi组给予高脂饲料喂养的同时灌胃罗格列酮,Obes组给予高脂饲料喂养,并灌胃相同剂量的生理盐水。检测各组大鼠血浆中各项生化指标、心肌组织总甘油三酯(Triglyceride,TG)的含量及胰岛素敏感性。制备大鼠MI/R模型,并取Obes组和Rosi组大鼠,输注磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素,分别记为Obwt组和Wort组,检测各组大鼠心脏血流动力学指标的变化;伊文蓝染色测定大鼠心肌缺血面积,2,3,5一氯化三苯四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积;原位末端标记凋亡细胞(TUNEL)法分析心肌细胞凋亡;Western blot法检测心肌中PKB/Akt和GluT-4蛋白的表达水平。结果 MI/R前,与Cont组相比,Obes组大鼠心肌TG及血浆中游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)、TG和空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)水平均显著升高(P〈0.05或P〈0.01),葡萄糖输注率(Glucose infusion rate,GIR)显著降低(P〈0.01);而Rosi组大鼠血浆中TG、FFA和FINS水平较Obes组显著降低(P〈0.01),GIR显著升高(P〈0.01)。与Cont组相比,Obes组大鼠MI/R后,心功能恢复差,梗死面积扩大,心肌细胞凋亡增多,并伴PKB/Akt和GluT-4表达水平下降;Rosi组与Obes组比,MI/R恢复能力增强,梗死面积缩小,细胞凋亡减少,PKB/Akt和GluT-4表达水平增加。Wort组大鼠可逆转Rosi组的抗凋亡作用,下调PKB/Akt和GluT-4的表达水平;而Obwt组大鼠MI/R后,心功能、心肌细胞凋亡数及PKB/Akt和GluT-4表达水平与Obes组相比,差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论肥胖大鼠心肌IR增加了MI/R时的易损性,与PI3K-PKB-GluT-4信号通路下调、心肌细胞凋亡增加及心功能恶化密切相关。
318-323
中国生物制品学杂志治疗性制剂

重组免疫毒素EBI3-Luffin P1原核表达质粒的构建、表达及其生物学活性

摘要:目的构建重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性。方法从质粒pET-32a-EBI3中扩增EBI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白经亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性,体外试验初步鉴定其生物学活性。结果重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白相对分子质量约为50 000,主要以包涵体形式存在,诱导8 h表达量可达菌体总蛋白的44%;纯化的重组蛋白纯度约为98%,可与EBI3蛋白免疫小鼠血清发生特异性反应,并可显著抑制小鼠脾脏细胞分泌IFNγ。结论成功构建了重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为进一步研究其在缓解、治疗免疫性疾病及红白血病中的作用奠定了基础。
324-328

重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白质控方法和质量标准的建立

摘要:目的建立重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(TACI-Fc)的质控方法和质量标准。方法采用以B淋巴细胞刺激因子作为配体的受体结合法测定TACI-Fc的生物学活性;反向液相色谱(RP-HPLC)法测定蛋白含量及纯度;ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;胰蛋白酶酶切后分析肽图;其余检测项目均按《中国药典》三部(2010版)规定进行。结果用建立的方法对重组人TACI-Fc原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。
329-332