中国生物制品学杂志社
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中国生物制品学杂志

《中国生物制品学杂志》在全国影响力巨大,创刊于1988年,公开发行的月刊杂志。创刊以来,办刊质量和水平不断提高,主要栏目设置有:基础研究、预防制品、治疗制品、诊断制品、临床观察等。
  • 主管单位:国家卫生健康委员会
  • 主办单位:中华预防医学会;长春生物制品研究所
  • 国际刊号:1004-5503
  • 国内刊号:22-1197/Q
  • 出版地方:吉林
  • 邮发代号:12-128
  • 创刊时间:1988
  • 发行周期:月刊
  • 期刊开本:A4
  • 复合影响因子:0.55
  • 综合影响因子:0.437
相关期刊
服务介绍

中国生物制品学 2012年第01期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志疫苗研究

肠道病毒71型灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫抗原表位的筛选

摘要:目的筛选肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)灭活疫苗免疫小鼠后诱导的细胞免疫抗原表位,探讨EV71疫苗诱导的细胞免疫应答机制。方法以EV71BJ08株(c4基因型)病毒结构蛋白氨基酸序列为模板,合成覆盖EV71VPl-VP3的256条合成肽(每条肽12个氨基酸),分别以其为刺激物(80txg/m1),采用ELISPOT法测定EV71灭活疫苗免疫小鼠脾单个核细胞(Mononuclearcell,MNC)诱导IFNy/分泌的斑点形成细胞数(Spot.formingcell,SFC),筛选细胞免疫抗原表位。从脾MNC中去除CD4+或CD8+T细胞及封闭MHCⅡ类分子或MHCI类分子,分析抗原提呈途径。结果通过对256条合成肽的筛选,获得3条可刺激小鼠脾MNC高水平分泌IFN'y的合成肽。以3条合成肽作为刺激物时,小鼠脾MNC分泌IFNvSFC均值(单针免疫组:22.3、12.8、17.4;两针免疫组:29.3、44.1、28.5)较乙肝表面抗原对照肽S。(单针:2.1;两针:5.2)显著升高(P〈0.01)。当MNC中去除CD4+T细胞或封闭MHClI类分子后,IFNvSFC均值显著下降(P〈0.05);而去除CD8’T细胞或封闭MHCI类分子时,IFNlSFC均值未见显著性差异(P〉0.05)。结论已成功筛选出3个EV71细胞免疫抗原表位,分别位于VPl、VP2和VP3区域.3条合成肽均属MHCⅡ类限制性多肽。
1-5

氢氧化锌对IPV-HBV联合疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的增强作用

摘要:目的探讨氢氧化锌[Zn(OH):]对IPV.HBV联合疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、IPV(I、Ⅱ、Ⅲ型各1X107pfu).HBV(2tzg)+Zn(OH)2(0.5mg)组、IPV(I、Ⅱ、Ⅲ型各1×107pfu)一HBV(2斗g)+AI(OH),(0.5mg)组和IPV.HBV组,经大腿肌肉内侧免疫2次,间隔4周。分别于初次免疫后第4、8、12、16、20和24周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中各抗原的特异性IgG抗体水平。结果各实验组相对于对照组,在初次免疫后4周时均产生针对各抗原的特异性IgG抗体;8周时达最高,并能持续较长时间。IPV(I、Ⅱ、Ⅲ型各1×107pfu)-HBV(2Ixg)+Zn(OH):组产生的特异性IgG抗体水平均显著高于其他各组(P〈0.05或P〈0.01)。结论Zn(OH)2能明显增强IPV.HBV联合疫苗诱导的小鼠体液免疫应答,其免疫佐剂效应优于A1(OH),佐剂。
6-8
中国生物制品学杂志基础研究

2009年中国云南昆明地区柯萨奇病毒A组16型遗传特性分析

摘要:目的对2009年中国云南昆明地区柯萨奇病毒A组16型(CoxsackievirusA16,CoxAl6)毒株的部分VPl区进行分析,了解CoxAl6的遗传特性。方法设计针对肠道病毒A群的通用引物,采用半巢式RT—PCR扩增目的片段,对PCR产物测序;使用Omiga和Mega4.1等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及病毒的系统进化分析。结果200份2009年昆明市儿童医院临床诊断为手足口病或并发脑炎疑似肠道病毒感染的患者粪便标本中有52份为CoxAl6感染,其中15份来自脑炎患者。52株CoxAl6病毒部分VPl区核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,核苷酸序列同源性为98.5%~100%,氨基酸序列同源性为98.8%~100%;与shzh00-2、shzh99—48和107/Toyama/1990相比较,核苷酸序列同源性为92.3%~93.8%,氨基酸序列同源性为95.3%~96.8%;与国际标准株G10相比较,核苷酸序列同源性为78.5%-80.3%,氨基酸序列同源性为93.2%~94.5%;与其他13个参考株的核苷酸序列同源性为96.6%~99.5%,氨基酸序列同源性为98.3%~100%。基因系统进化分析显示,52株CoxAl6均属于B基因型的一个分支。结论2009年中国云南昆明地区CoxAl6株属于B2亚型。
9-12

AP2α重组腺病毒质粒的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

摘要:目的构建转录因子AP2ct(Activatorprotein2α)重组腺病毒质粒,感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSCs),并检测其表达。方法从大鼠PCI2细胞总RNA中PCR扩增AP20t基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrace-TOX,构建重组质粒,与腺病毒骨架质粒pad.Easyl在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒pad-AP20α,转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad—AP2α,感染大鼠骨髓MSCs,荧光显微镜下观察RFP的表达;Real—timePCR及Westernblot检测AP2α的表达。结果pAdtrace—AP2cx质粒经PCR及双酶切鉴定,均可见约1400bp的目的基因条带,测序结果与GenBank报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中;重组腺病毒pAd-AP20L在HEK293细胞中包装,病毒滴度可达2.6×10。pfu/ml;感染MSCs48h可观察到60%以上的RFP阳性细胞,经Real—timePCR及Westemblot鉴定,感染后72h,MSCs中AP20t的表达显著增高(P〈0.01)。结论成功构建了携带转录因子AP20L的重组腺病毒质粒,其能有效感染MSCs,增强MSCs中AP2α的表达。
13-17

Skp2基因表达下调对HepG2细胞生物学特性及SP1和p27蛋白表达的影响

摘要:目的研究Skp2基因表达下调对HepG2细胞生物学特性及p27和SPl蛋白表达的影响。方法构建Skp2基因干扰慢病毒质粒,包装后感染HepG2细胞,48h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况;侵袭小室试验检测细胞侵袭能力;Westernblot检测Skp2基因下调后p27和SPl蛋白的表达情况。结果与正常HepG2细胞组相比,Skp2干扰慢病毒组细胞Skp2蛋白的表达明显下调,p27蛋白表达大幅增加,细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加近两倍,G。/G。期细胞增多;SPl蛋白表达减少,浸润、迁移的细胞数减少约50%(P〈0.05)。结论Skp2蛋白表达下调抑制了HepG2细胞的增殖,促进HepG2细胞的凋亡,造成细胞侵袭能力减弱。Skp2蛋白表达下调导致p27蛋白表达上调、SPl蛋白表达下调,在上述生物学特性变化中可能发挥了重要作用,为深入探讨肝癌的病理机制奠定了基础。
18-22

γ分泌酶抑制剂阻断Notch1信号通路对人结肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响

摘要:目的探讨应用y分泌酶抑制剂(Gamma—secretaseinhibitor,GSI)阻断Notchl信号通路后对人结肠癌耐药细胞株SW480/L—OHP化疗敏感性的影响。方法应用人结肠癌细胞系SW480,以反复诱导、逐渐递增奥沙利铂(L—OHP)浓度的方法,体外构建耐药细胞株SW480/L-OHP。采用CCK一8法检测细胞株对L-OHP的耐药指数,RT.PCR法检测survivin、notchl、hesl、cyclinDl基因mRNA的转录,Westernblot检测Notchl和Hesl蛋白的表达。将耐药细胞分成对照组、L—OHP组(3.Oμmol/L)、GSI组(10Ixmol/L)和GSI+L—OHP组,分别处理后,检测各组细胞的抑制率、凋亡率及survivin、notchl、hesl、cyclinDl基因mRNA的转录水平和Notchl、Nicd、Hesl蛋白的表达水平。结果与SW480亲本细胞相比,SW480/L—OHP细胞中survivin、notchl、hesl和cyclinDl基因mRNA转录水平及Notchl和Hesl蛋白表达水平均上调。GSI组耐药细胞的增殖受到抑制,GSI+L.OHP组抑制作用更明显;GSI组耐药细胞survivin、hesl、cyclinDl基因mRNA转录水平下调,Nicd和Hesl蛋白表达水平下调,GSI+L.OHP组下调更明显。结论GSI通过阻断Notchl胞内段Nicd的释放,影响下游Hesl基因和蛋白的表达,从而抑制SW480/L—OHP细胞增殖,提高其化疗敏感性;且与L-OHP联合使用具有协同作用。
23-28

氢氧化锌与低分子量透明质酸复合佐剂对甲肝乙肝联合抗原的体液免疫增强作用

摘要:目的探讨氢氧化锌与低分子量透明质酸(Lowmolecularweighthyaluronicacid,LHA)复合佐剂对甲肝乙肝联合抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法在甲肝乙肝联合抗原中加入不同配比的Zn(OH):与LHA复合佐剂,经皮下免疫ICR小鼠,并设铝佐剂组、生理盐水对照组和单纯抗原组。分别于免疫后4、8、12和16周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清抗一HAVIgG和抗一HBsAgIgG水平。结果除对照组小鼠血清检测不到抗.HAVIgG抗体外,其余各组小鼠血清抗一HAVIgG水平在12周时达峰值,抗一HBsAgIgG水平在8周时达峰值,以后逐渐下降;免疫后4、8、12和16周,多数复合佐剂组抗.HAVIgG和抗.HBsAgIgG水平与抗原组和铝佐剂组相比,显著增强(P〈0.05),且抗体水平持续时间较长。结论适当剂量配比的氢氧化锌与LHA复合佐剂能增强甲肝乙肝联合抗原诱导的体液免疫应答。
29-31

人FBP17基因重组真核表达质粒的构建及其在LO2细胞中的表达

摘要:目的构建人FBPl7基因重组真核表达质粒,并检测其在人正常肝细胞L02中的表达及对细胞存活率的影响。方法用EcoRI和BamHI双酶切pEGFP—C1一FBPl7质粒,胶回收FBPl7基因片段,与p3XFLAG—CMV一10载体连接,构建重组真核表达质粒p3XFLAG—CMV.10/FBPl7,LipofectamineTM法转染人正常肝细胞L02,RT.PCR和Westernblot法检测转染细胞中FBPl7基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,XTY法检测其对转染细胞增殖的影响。结果重组表达质粒p3XFLAG.CMV一10/FBPl7经双酶切及测序证实构建正确;转染该重组质粒的L02细胞FBPl7基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显增高,且该质粒转染对细胞存活率无影响。结论成功构建了FBPl7基因重组真核表达质粒,其可在L02细胞中表达,且对细胞的存活率无影响,为进一步研究FBPl7相互作用蛋白及其功能奠定了基础。
32-35

TRAF.6在人肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖能力的影响

摘要:目的探讨Toll样受体(T0ll—likereceptor,TLR)信号转导通路中关键节点蛋白在人肝癌细胞株QGY中的表达及其对QGY细胞增殖能力的影响。方法通过RT.PCR和Westernblot检测人正常肝细胞株L02和QGY细胞株中TLR信号转导通路关键节点mRNA和蛋白的表达水平;采用TRAF一6一siRNA沉默关键节点蛋白TRAF.6的表达,Westernblot检测沉默效果,MTr法检测TRAF一6基因沉默后QGY细胞的增殖情况。结果QGY细胞与L02细胞相比,MAL和TRAF.6基因表达水平明显升高(P〈0.05),TRAM和TRIF基因表达水平差异无统计学意义(P〉0.05);转染siRNA后QGY细胞TRAF一6蛋白的表达水平明显降低(P〈0.05),细胞存活率明显下降(P〈0.05)。结论TLR信号转导通路中关键节点蛋白MAL和TRAF.6在肝癌细胞中的表达水平高于在正常肝细胞中的表达水平;TRAF一6对肝癌细胞的增殖具有一定的促进作用,有望成为分子靶向治疗原发性肝癌新的作用靶点。
36-38

羊布氏菌外膜蛋白10基因的原核表达

摘要:目的原核表达并纯化羊布氏菌外膜蛋白10(Outermembraneprotein,OmplO)。方法利用PCR技术扩增羊布氏菌16M株OmplO基因,插入原核表达载体pET一28a(+),构建重组原核表达质粒pET一28a—OmplO,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组Ompl0经HisTrap^TM^FF纯化后,Westernblot分析表达产物的反应原性。结果重组原核表达质粒pET一28a—Ompl0经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组Ompl0相对分子质量约15000,能被羊布氏菌阳性血清所识别。结论已成功在大肠杆菌中表达了羊布氏菌Ompl0,为羊布氏菌病血清学诊断方法的建立提供了材料。
39-42

脑缺血再灌注后大鼠脑实质生长抑制与DNA损伤修复相关基因β的表达

摘要:目的观察大鼠局灶脑缺血再灌注(Ischemia.repeffusion,I/R)后脑实质生长抑制与DNA损伤修复相关基因β(GrowtharrestandDNA.damageinduciblegeneB,Gadd45β)的表达变化,探讨其神经保护作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑I/R对照组和四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组,采用线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,假手术组和脑I/R对照组均在缺血再灌注后经腹腔注射生理盐水,PDTC组经腹腔注射等剂量的PDTC(100mg/kg)。采用ZeaLonga评分法对患肢运动功能进行评分,免疫组化法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达,RT.PCR法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45βmRNA的表达。结果脑I/R对照组和PDTC组大鼠在各时间点神经功能缺损评分呈相同变化趋势,PDTC组大鼠在72h神经功能缺损评分显著高于脑I/R对照组(P〈0.05)。脑I/R对照组大鼠缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达在缺血再灌注后6h开始增高,24h达高峰,之后开始下降,但仍高于假手术组(P〈0.05);PDTC组大鼠Gadd45β蛋白的表达在各个时间点均明显低于脑I/R对照组(P〈0.05);脑I/R对照组大鼠Gadd45β基因mRNA在12h的表达明显高于假手术组,24h达高峰,之后开始下降,但72h仍高于假手术组(P〈0.05);PDTC组大鼠Gadd45β基因mRNA的表达在各个时间点均明显低于脑I/R对照组(P〈0.05)。结论PDTC可抑制大鼠脑缺血灶周边脑组织中Gadd45β的表达,Gadd455可能具有神经保护作用。
43-46

人参总皂苷对PCI2细胞突起生长及GAP-43表达的影响

摘要:目的探讨人参总皂苷(T0talsaponinofpanaxginseng,TsPG)对神经细胞PCI2突起生长以及生长相关蛋白-43(Growth—associatedprotein-43,GAP-43)表达的影响。方法以0、10、20、40、80mg/LTSPG作用于体外培养的PCI2细胞,相差显微镜观察细胞的形态学改变,透射电镜观察细胞突触连接情况,显微镜测微尺测量突起长度,免疫组织化学和Westernblot法检测GAP-43的表达。结果与对照组相比,TSPG处理组分化的PCI2细胞直径明显增大,突起长度明显增长,并形成突触连接,GAP.43表达水平增加,以40mg/L组最为明显。结论TSPG可诱导PCI2细胞发生分化、突起生长延伸,并可上调GAP-43的表达水平。
47-49
中国生物制品学杂志治疗性制剂

靶向性抗肿瘤VEGF-α.Gal融合蛋白的原核表达、纯化及其体外活性

摘要:目的原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF.仪一Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应。方法从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF.d.Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30.~EGF一仅.Gal,转化至大肠杆菌M15中,IlYI'G诱导表达,SDS.PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Westernblot分析重组蛋白的反应原性。经Ni—AgaroseHis标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF.α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-GM模拟表位的体外抗肿瘤活性。结果重组表达质粒pQE30.VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18000,诱导5h表达量最高,约占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式表达;重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度约为90%,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-GaJ模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应。结论成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF—α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础。
56-60

西洋参皂甙的抗氧化功能及其对小鼠遗传损伤的保护作用

摘要:目的探讨西洋参皂甙的抗氧化功能及其对环磷酰胺(Cyclophosphamide,CP)所致小鼠遗传损伤的保护作用。方法应用总抗氧化能力(TotalAntioxidantCapacity,TAC)和抑制超氧阴离子(o2-)活力试剂盒检测西洋参皂甙的TAC和抑制02-的活力;水杨酸比色法检测羟自由基(OH-)的清除能力;邻苯三酚自氧化法检测o2-自由基的清除能力。给昆明小鼠每天灌胃不同浓度(10、50、200mg/kg)的西洋参皂甙,第6天起按25mg/kg以cP染毒,连续5d,用试剂盒检测血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的水平;常规Giemsa染色观察小鼠骨髓细胞微核的形成并计算微核形成率;构建小鼠遗传损伤模型,常规Giemsa染色观察小鼠精子畸变程度并计算精子畸变率。结果西洋参皂甙在体外模拟系统中的TAC和抑制02_生成活力较高,分别达80和160U/ml,对OH一和02-的清除率达70%一80%,且呈剂量效应关系;西洋参皂甙干预可显著提高CP染毒小鼠血清中GSH—Px和SOD的活性(P〈0.01),降低MDA的水平(P〈0.05),拮抗CP对精子和骨髓细胞的损伤作用,西洋参皂甙各剂量组小鼠的精子畸变率和微核形成率与模型组相比,均明显下降(P〈0.01)。结论西洋参皂甙具有较强的体内外抗氧化活性,对CP所致小鼠遗传损伤具有明显的保护作用,其机制可能与提高机体的抗氧化能力和增强小鼠的抗诱变能力有关。
61-64

雪胆甲素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用

摘要:目的探讨雪胆甲素(Cucurbitacin Ⅱ a)对人非小细胞肺癌(Non—smallcell lungcancer,NSCLC)A549细胞增殖的影响。方法以不同浓度的雪胆甲素作用于A549细胞和小鼠原代培养的脾细胞,采用MTr法检测雪胆甲素对两种细胞增殖的影响;流式细胞术及AnnexinV—PE细胞凋亡试剂盒检测雪胆甲素对A549细胞细胞周期及凋亡的影响。结果雪胆甲素对A549细胞和小鼠原代脾细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性,25~100Ixmol/L的雪胆甲素对A549细胞的增殖抑制率明显高于脾细胞;雪胆甲素可将大部分A549细胞阻滞于G0/G1和S期,少部分细胞阻于G2和M期,并可促进细胞凋亡。结论雪胆甲素可明显抑制A549细胞增殖,在NSCLC高效低毒的治疗药物的开发中具有重要价值。
69-71

乌司他丁和泰索帝对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭及细胞因子IGF-1R、PDGFA和PAFR表达的影响

摘要:目的探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭及胰岛素样生长因子受体1(Insulin.1ikegrowthfactor1receptor,IGF-1R)、血小板衍生因子A(Platelet-derivedgrowthfactorA,PDGFA)和血小板活化因子受体(Platelet.activatingfactorreceptor,PAFR)表达的影响。方法将原代培养的乳腺癌细胞分为4组:UTl组(800IU/m1)、TXT组(3.7μg/m1)、UTI+TXT组和培养液对照组,MTT法检测细胞的增殖活力;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT.PCR和Westernblot检测细胞中IGF.1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果UTI和TXT均可显著抑制人原代乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,下调细胞中IGF一1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且UTI与TXT联合使用时效果更为明显。结论ulrI能够增强TXT对人原代乳腺癌细胞的抑制作用,二者具有协同效应,这种机制可能与UTI影响IGF-1R、PDGFA和PAFR的表达有关。
72-77

中国首个“生命科学产品外贸公共服务平台’’通过国家认证

摘要:为了推进外贸发展方式转变和结构调整,进一步提升我国对外贸易发展质量和水平,财政部会同商务部出台了建设外贸公共服务平台的政策,安排专项资金,支持有实力的企业加快外贸公共服务平台建设。2011年,中原公司的“生命科学产品外贸公共服务平台”在各方面的支持下,顺利通过了国家的审评和认定。
77-77

姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

摘要:目的观察姜黄素(Curcumin)对人骨肉瘤MG63细胞增殖及细胞内Wnt/p-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨姜黄素抑制MG63细胞生长的机制。方法体外培养MG63细胞,用不同浓度的姜黄素处理细胞不同时间,MTY法检测MG63细胞的增殖活力;RT—PCR法检测细胞内B.catenin和CyclinDl基因mRNA的转录水平;Westernblot检测B—catenin和CyclinDl蛋白的表达。结果姜黄素可抑制MG63细胞的增殖,其抑制作用呈剂量.时间依赖性,当姜黄素浓度为20.00Ixmol/L时,对细胞增殖的抑制作用最明显;姜黄素可显著降低细胞内β-catenin和CyclinDl基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量一时间依赖性。结论姜黄素可抑制MG63细胞增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性实现的,这将为临床治疗骨肉瘤提供新的思路。
78-81