中国生物制品学杂志

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中国生物制品学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

Chinese Journal of Biologicals

  • 22-1197/Q 国内刊号
  • 1004-5503 国际刊号
  • 0.55 影响因子
  • 1-3个月下单 审稿周期
中国生物制品学是中华预防医学会;长春生物制品研究所主办的一本学术期刊,主要刊载该领域内的原创性研究论文、综述和评论等。杂志于1988年创刊,目前已被国家图书馆馆藏、CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)等知名数据库收录,是国家卫生健康委员会主管的国家重点学术期刊之一。中国生物制品学在学术界享有很高的声誉和影响力,该期刊发表的文章具有较高的学术水平和实践价值,为读者提供更多的实践案例和行业信息,得到了广大读者的广泛关注和引用。
栏目设置:疫苗研究、基础研究、治疗制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、综述、专题报道

中国生物制品学 2011年第07期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志临床观察
自体干细胞治疗病毒性肝炎的疗效756-756

摘要:作者依据病毒性肝炎的特点,采用非特异性免疫治疗方法,采集自体干细胞,经体外培养,生物定向诱导,生成全新的免疫活性细胞,回植于患者体内,观察对病毒性肝炎的治疗效果,现将结果简要报道如下。

中国生物制品学杂志基础研究
麻风分枝杆菌热休克蛋白65的表达、纯化及其多克隆抗血清的制备757-760

摘要:目的原核表达、纯化麻风分枝杆菌热休克蛋白65(Heat shock protein 65,HSP65),并制备其多克隆抗血清。方法以含hsp65基因的真核表达质粒pCMV4.65为模板,PCR扩增hsp65基因,克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-hsp65,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pET-28a-hsp65经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度约为1.0 mg/ml;制备的HSP65多克隆抗血清效价可达1∶12 800;重组蛋白具有良好的反应原性。结论已成功表达、纯化了麻风分枝杆菌重组HSP65蛋白,并制备了HSP65多克隆抗体,为进一步研究以HSP65为基础的亚单位疫苗和核酸疫苗奠定了基础。

酿酒酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其酶学性质761-765

摘要:目的克隆酿酒酵母甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase,FDH)基因,在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白,并进行酶学性质分析。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,采用温度梯度PCR法扩增fdh基因,重叠PCR技术校正fdh中的移码突变,构建重组表达质粒pET-28a-fdh,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,分别采用37℃IPTG诱导、15℃IPTG诱导和37℃乳糖自诱导表达,镍金属螯合亲和层析纯化重组FDH蛋白,并分析重组FDH的酶学性质。结果成功克隆了1 100 bp的fdh基因,碱基突变纠正了基因缺失和置换引起的编码错误;表达的重组FDH相对分子质量约为43 000,37℃乳糖诱导表达的重组FDH主要以可溶形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白比活为7.69 U/mg;重组FDH的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,热稳定性较好,米氏常数分别为:KmNAD+=49μmol/L,Km甲酸=4.5 mmol/L。结论已在大肠杆菌中表达并纯化了重组FDH蛋白,为进一步研究酿酒酵母FDH,利用其构建NAD(P)H辅酶再生体系奠定了基础。

中国西南地区慢性乙型肝炎自然病程中HBV基因型和定量血清学标记物的特征分析766-770

摘要:目的分析我国西南地区慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)病毒感染者自然病程中HBV基因分型和定量血清学生物标记物的特征。方法收集我国西南地区140例CHB患者临床资料和全血标本,根据HBV感染自然病程(免疫耐受期、免疫清除期、低复制期和再活动期)分为4组,采用巢式PCR法进行HBV分子基因分型,化学发光微粒子免疫分析法定量检测HBV血清学标记物。结果 CHB患者的HBV基因型以B2和C2亚型为主,且B型患者病情更具进展性;血清HBsAg水平以免疫耐受期组最高,低复制期组最低(P〈0.01);相关性分析显示,HBsAg水平与HBV-DNA、HBeAg、患者年龄、ALT及AST水平显著相关。结论 HBV基因分型和定量血清学标记物分析可能有助于预测HBV相关疾病的远期进展。

牛边缘无浆体膜表面蛋白5的原核表达及其免疫原性771-774

摘要:目的原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)膜表面蛋白5(Membrane surface protein 5,MSP5),并分析其免疫原性。方法 pQE-MSP5/BL21(DE3)阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物经MagneHisTM蛋白纯化系统纯化后,进行SDS-PAGE分析。将纯化的MSP5蛋白免疫小鼠,以生理盐水免疫作为阴性对照,ELISA法检测血清抗体水平,淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群分类。结果表达的重组MSP5蛋白相对分子质量约为23 000;纯化蛋白的纯度为83.2%,浓度为1.087 mg/ml;纯化的MSP5蛋白可刺激小鼠产生特异性抗体;免疫组小鼠淋巴细胞增殖水平明显高于阴性对照组(P〈0.05);免疫组小鼠CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例高于阴性对照组,CD8+比例低于阴性对照组。结论已成功表达并纯化了牛边缘无浆体MSP5,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及建立准确可靠的诊断方法奠定了基础。

融合蛋白GST-hS100A2对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用775-781

摘要:目的探讨GST-人S100A2融合蛋白(GST-hS100A2)对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用。方法将重组质粒pGST-moluc-hS100A2和pGST-moluc转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot鉴定后采用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠分离纯化。以制备的GST-hS100A2融合蛋白分别处理HCT116和SW480细胞,以GST处理的细胞和空白细胞作为对照,分别用MTT法检测细胞增殖活力,Hochest33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,划痕愈合法检测细胞迁移能力,Transwell小室试验检测细胞侵袭能力。结果融合蛋白GST-hS100A2能以剂量依赖和时间依赖的方式抑制HCT116和SW480细胞的增殖,并可明显促进两种细胞凋亡,阻滞HCT116细胞周期,抑制HCT116细胞迁移和两种细胞的侵袭能力。结论 GST-hS100A2对人结肠癌HCT116和SW480细胞具有一定的抑制作用,有可能成为结肠癌分子治疗的新靶标。

共表达羊布氏菌P39基因与增强型绿色荧光蛋白基因逆转录病毒质粒的构建782-784

摘要:目的构建共表达羊布氏菌胞质结合蛋白P39基因和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的逆转录病毒质粒。方法提取羊布氏菌全基因组DNA,PCR扩增P39基因,连接至pMD19-T载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,经克隆筛选并进行序列测定后,将P39基因连接至逆转录病毒载体pRevIRES-EGFP的多克隆位点上,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP,进行酶切鉴定。结果从羊布氏菌基因组中扩增出约1 400 bp的P39基因,与GenBank中登录的羊布氏菌16M菌株P39基因序列同源性达99%;重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP经双酶切鉴定构建正确。结论已成功构建了共表达羊布氏菌P39基因和EGFP基因的重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP,为后续研究奠定了基础。

整合素连接激酶基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力的影响及其机制785-790

摘要:目的构建整合素连接激酶(Integrin linked kinase,ILK)基因siRNA干扰质粒,探讨ILK基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力及糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,GSK3)、β-环连蛋白(β-catenin)表达的影响。方法构建针对人ILK基因的2个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在脂质体介导下转染膀胱癌BIU-87细胞,通过RT-PCR及Western blot检测ILK基因mRNA和蛋白的表达水平,筛选出1个干扰效果较强的质粒用于后续试验,Western blot检测细胞GSK3和β-catenin蛋白的表达,Am-blue法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期的分布。结果经酶切和测序证明重组干扰质粒构建正确;稳定转染pGenesil-1 siRNA1和pGenesil-1 siRNA2质粒的BIU-87细胞ILK基因mRNA和蛋白表达水平较BIU-87细胞组(未转染组)分别下降了69%、52%和70%、55%,选择pGenesil-1 siRNA1为最有效干扰序列;BIU-87siRNA1组GSK3的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别升高了41.87%和30.12%,β-catenin的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别降低了38.67%和48.05%;BIU-87 siRNA1组细胞增殖活力明显下降;BIU-87 siRNA1组G0-G1期细胞比例明显增加,S期减少。结论已成功构建ILK基因siRNA表达质粒,其可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,机制可能为ILK基因通过介导GSK3、β-catenin信号分子促进膀胱癌BIU-87细胞的增殖。

双酶协同水解木薯淀粉水解液对小球藻生物量和油脂积累的影响794-796

摘要:目的以木薯淀粉水解液替代葡萄糖异养培养小球藻,观察其对小球藻生物量和油脂积累的影响。方法采用双酶协同酶解法水解木薯淀粉,扫描电镜和X-射线衍射表征分析水解前后产物的物理特性;分别以精制葡萄糖和木薯淀粉水解液作为碳源,尿素作为氮源,采用异养模式培养小球藻;干重法测定藻细胞生物量,提取总脂,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析脂肪酸含量。结果双酶协同水解木薯淀粉的最佳工艺条件为:温度70℃,pH 4.0,时间3 h,酶添加量0.5%,底物浓度20 g/L,此时水解木薯淀粉转化成的葡萄糖含量为64.11%;表征分析显示,酶解发生在颗粒表面,整个淀粉颗粒仍能保持外形结构,酶水解作用未改变木薯淀粉的晶型;当培养基中葡萄糖浓度为40 g/L时,小球藻生物量和总脂产量分别为9.12和4.39 g/L;当培养基中木薯淀粉水解液的葡萄糖浓度为30 g/L时,小球藻生物量和总脂产量分别为9.50和4.51 g/L,比以葡萄糖为碳源时的生物量和总脂产量高4.17%和2.73%。结论木薯淀粉水解液作为碳源在异养培养提高微藻油脂产量和减少微藻生物柴油生产成本方面是一种比较理想的途径。

电穿孔法转染增强型绿色荧光蛋白基因对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响797-801

摘要:目的探讨电穿孔法转染增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因对人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)生物学特性的影响。方法采用密度梯度离心法分离健康人BM-SC,将pEGFP-N1质粒电穿孔转染hBMSCs,倒置显微镜下观察转染前后细胞的形态学变化,荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率;取第5代未转染及转染后24 h的hBMSCs,常规培养,绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测转染前后细胞亚型;对转染前后的hBMSCs进行成脂和成骨诱导分化培养,油红O和茜素红染色观察诱导分化结果。结果分离培养的hBMSCs形态均一,转染前后细胞形态无明显差异;转染24 h后荧光镜下观察到有绿色荧光出现,转染效率为(48.65±11.23)%,转染前后的细胞生长曲线无显著差异;流式细胞仪检测CD44及CD105阳性率均在99%以上,不表达CD45,符合BMSCs特征,转染后hBMSCs表型未见明显变化;转染前后分别定向诱导均可形成成脂细胞及成骨细胞。结论电穿孔法可使EGFP获得较高的转染效率,转染后的hBMSCs生物学特性未发生改变。

重组人Ⅵ型胶原蛋白多肽对长波紫外线辐射的人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用802-805

摘要:目的探讨重组人Ⅵ型胶原蛋白多肽(CP6)对长波紫外线(Ultraviolet A,UVA)辐射的人皮肤成纤维细胞(Humanskin fibroblast,HSF)损伤的保护作用。方法 MTT法检测不同剂量UVA辐射对HSF细胞活力的影响,并采用MTT法、An-nexin V/PI流式细胞术和TUNEL法分别检测CP6对UVA辐射的HSF损伤的保护作用。结果辐射强度为5和10 J/cm2的UVA可造成HSF活力降低;与UVA对照组相比,UVA+4 mg/ml CP6、UVA+6 mg/ml CP6和UVA+8 mg/ml CP6组A570值均升高(P〈0.05),细胞凋亡率显著下降(P〈0.05)。结论紫外线可造成体外培养的HSF损伤,一定浓度的CP6可提高辐射细胞的存活率,减少细胞凋亡,具有保护作用,其机制可能与其抗氧化、增强细胞活力有关。

HIFU联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶的超声微泡治疗对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响806-810

摘要:目的观察高强度聚焦超声(High-intensity focused ultrasound,HIFU)联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶(Herpessimplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)的超声微泡(Ultrasound microbubble)治疗对兔VX2肝移植瘤中缺氧诱导因子-1α(Hy-poxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达及微血管密度(Mi-crovascular density,MVD)的影响,并探讨其机制。方法复制兔VX2肝移植瘤模型,建模4周后,将荷瘤兔随机分为4组:对照组(A组),HIFU组(B组),超声辐照载基因微泡组(C组)和HIFU联合超声辐照载基因微泡组(D组)。治疗后两周观察肿瘤大小,免疫组化法检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达及MVD,Real-time PCR检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF基因mRNA的转录水平。结果治疗后2周,B、C、D组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,基因mRNA转录水平,MVD及肿瘤体积均明显低于A组(P〈0.05),且D组明显低于B组和C组(P〈0.05)。结论 HIFU联合包裹HSV-TK基因的超声微泡治疗可抑制肿瘤生长及肿瘤血管新生,降低残余瘤区HIF-1α和VEGF基因的表达,提高HIFU的疗效。

ERK1/2及PI3K-Akt途径在雌激素促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制811-814

摘要:目的探讨ERK1/2、PI3K-Akt途径在雌激素17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制。方法分别用E2、雌激素受体抑制剂ICI182780(ICI)、ERK1/2抑制剂PD98059(PD)和PI3K-Akt抑制剂LY294002(LY)单独或联合处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率,Western blot法检测细胞ERα、ERβ、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平。结果 E2可促进FRO细胞增殖及ERα、Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达;ICI可抑制Bcl-2蛋白的表达,对Bax蛋白的表达无明显影响;PD和LY可抑制E2对FRO细胞的上述作用。结论 E2可通过激活ERK1/2、PI3K-Akt通路,增加Bcl-2/Bax的比值,促进FRO细胞增殖。

重组半乳糖苷凝集素AAL的抗病毒活性分析815-817

摘要:目的分析重组半乳糖苷凝集素AAL抑制烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的侵染活性及与TMV衣壳蛋白(CP)的体外结合活性,为进一步明确AAL的生物学功能提供理论依据。方法将含AAL基因的重组表达质粒pET-22b-aal转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析纯化重组AAL。采用半叶法分析重组AAL抑制TMV的侵染活性;凝胶复性覆盖法分析重组AAL与TMV-CP的体外结合活性。结果表达及纯化的重组AAL相对分子质量约为18 000;重组AAL具有与从杨树菇子实体中提取的AAL相近的抑制TMV侵染的活性,并可与TMV-CP体外结合。结论重组AAL具有抗TMV的活性,其机理可能是通过与TMV-CP的互作抑制病毒侵染。

中国生物制品学杂志治疗制品
干扰素对ICR乳鼠感染肠道病毒71型的保护作用824-827

摘要:目的探讨干扰素(Interferon,IFN)对ICR乳鼠感染肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的保护作用。方法将FY23-EV71感染经重组人IFNα1b和IFNλ1预处理的Vero和KMB17细胞,微量滴定法检测病毒滴度;取ICR乳鼠分为PBS对照组、EV71对照组和IFN保护组,临床观察2周,取乳鼠组织,观察病理学变化,并检测病毒含量。结果两种IFN对KMB17细胞和Vero细胞感染EV71均有保护作用,且IFNα1b的保护作用优于IFNλ1;IFN保护组乳鼠较EV71对照组乳鼠在临床表现、体重、病理变化和组织病毒含量等方面均表现出对EV71感染的保护作用。结论 IFN能抑制EV71的增殖,并对病毒致病性和组织嗜性有一定的影响。

中国生物制品学杂志诊断制品
不同HBsAg酶联免疫检测试剂的血清型灵敏度832-834

摘要:目的比较不同HBsAg酶联免疫检测试剂(国产试剂:1号~4号,进口试剂:5号和6号)的分析灵敏度差异。方法收集乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者血清,提取病毒核酸,PCR扩增HBV的S基因,测序后,根据其氨基酸序列确定血清型。应用雅培HBsAg检测试剂对各血清型样品进行定量检测,根据定量结果稀释至1~4 IU/ml,将各样品以1∶2系列稀释至4个稀释度,分别利用6种HBsAg酶联免疫检测试剂双孔检测。将各试剂的cut-off值代入各样品,检测A值和浓度值的双对数曲线,计算各血清型样品的分析灵敏度,比较各试剂间与各血清型间的分析灵敏度差异。结果不同血清型间的分析灵敏度差异无统计学意义(P〉0.05),不同试剂间的检测结果差异均有统计学意义(P〈0.01)。国产4号试剂与进口5号和6号试剂间的分析灵敏度差异无统计学意义(P〉0.05),国产4号、进口5号和6号试剂的分析灵敏度高于国产1号和3号试剂,低于国产2号试剂。各试剂对不同血清型样品的分析灵敏度差异无统计学意义(P〉0.05)。结论各血清型间HBsAg检测的分析灵敏度无差别,但不同试剂间的分析灵敏度有差别,应对其临床意义进一步研究。

中国生物制品学杂志临床观察
可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白A表达水平与妇科恶性肿瘤的相关性839-841

摘要:目的分析血清中可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白A(Soluble major histocompatibility complexclass I chain-related protein A,sMICA)与妇科恶性肿瘤的相关性。方法应用ELISA法检测59例确诊为妇科恶性肿瘤患者和98名健康对照者血清中sMICA的水平,应用ROC曲线对检测结果进行分析与评价。结果病例组患者血清中sMICA平均水平[(1.04±1.33)ng/ml]明显高于健康对照组[(0.29±0.30)ng/ml)],且差异有统计学意义(P〈0.000 1)。ROC曲线下面积为0.816,sMICA的临床诊断界点为0.302 ng/ml。结论血清中sMICA水平与妇科恶性肿瘤的发生密切相关,有望作为临床妇科肿瘤诊断的一种新型肿瘤标志物。

中国生物制品学杂志消息
中国微生物学会第十次全国会员代表大会征文通知841-841

摘要:由中国微生物学会主办,福建省农业科学院、福建省微生物学会共同承办,福建省微生物研究所、福建省疾病预防控制中心、福建农林大学生命科学院、福州大学生物科学与工程学院协办的“2011年中国微生物学会学术年会暨中国微生物学会第十次全国会员代表大会”,定于2011年10月21~25日在福建省福州市举行。