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中国生物制品学 2009年第12期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

抑制乳腺癌耐药蛋白基因逆转肝癌多药耐药的体内实验1161-1163

摘要：目的探讨小片段RNA干扰抑制乳腺癌耐药蛋白（BCRP）基因及其蛋白表达在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药（MDR）的可行性。方法建立裸鼠多药耐药肝细胞癌模型,随机分为A组和B组,A组（对照）注射生理盐水40μl＋Lipo-fectamine200010μl,B组注射BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP40μl＋Lipofectamine200010μl,两组均行瘤内注射1次。5d后,各组均经腹腔注射阿霉素5mg/kg化疗,每5d给药1次,共4次。彩色B超测量肿瘤体积;化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR及Westernblot法检测各组裸鼠肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平。结果B组每次化疗后肿瘤体积均明显缩小;除第1次化疗外,其余各次化疗后肿瘤体积均小于A组;化疗结束后,B组与A组相比,肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平和BCRP蛋白的表达水平均明显降低。结论BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP可有效降低裸鼠肝癌组织BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平,在一定程度上逆转MDR,为从基因水平逆转MDR提供了初步的实验依据。

生产用流感病毒H3N2型疫苗株血凝素蛋白HA1的基因分析1164-1168

摘要：目的分析生产用流感病毒H3N2型疫苗株血凝素蛋白HA1基因变异对病毒特性的影响。方法比较2005～2008年间上海生物制品研究所流感病毒H3N2型各疫苗株的生产数据,并对H3N2型各疫苗株的HA1基因序列数据进行分析。结果各疫苗株中,A/NewYork/55/2004（NYMCX-157）的血凝素得率最高,A/Brisbane/10/2007（IVR-147）最低;2006～2007年度疫苗候选株A/Wisconsin/67/2005（NYMCX-161B）的病毒复制能力优于A/Hiroshima/52/2005（IVR-142）;各疫苗株的氨基酸差异均未直接涉及到HA1蛋白二硫键组成位点,直接涉及到HA1蛋白抗原决定簇位点、HA1蛋白糖基化位点和HA蛋白受体结合位点的变异分别有3处（140、156和193位）、1处（165位）和1处（225位）。结论2005～2008年间各流感病毒疫苗株血凝素得率因株而异,HA1蛋白抗原决定簇位点变异属于正常的不同毒株间的差异;糖基化位点、二硫键组成位点和受体结合位点基本保守;还需进一步研究部分位点氨基酸变异是否与病毒复制能力密切相关,并探讨改善复制能力的可能性。

激活素A及其ⅡA型受体在ConA诱导小鼠急性肝损伤时的表达及其作用1169-1171

摘要：目的探讨激活素A（ActivinA）及其ⅡA型受体（ActRⅡA）在刀豆蛋白A（ConA）诱导小鼠急性肝损伤时的表达及其作用。方法尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,测定血清转氨酶水平判断肝脏组织损伤程度,实时定量RT-PCR检测ActivinA及ActRⅡAmRNA转录水平;应用抗ActivinA和ActRⅡA抗体进行阻断试验,测定血清转氨酶水平,HE染色观察肝组织病理学变化。结果ConA诱导的急性肝损伤模型小鼠血清转氨酶水平明显升高,ActivinA及ActRⅡAmRNA转录水平也明显高于对照组;体内应用抗ActivinA和ActRⅡA抗体阻断ActivinA和ActRⅡA的作用,均可不同程度减轻肝损伤。结论ActivinA是介导ConA诱导小鼠急性肝损伤的重要致病因子,阻断ActivinA的表达或其作用途径,可能成为治疗肝损伤疾病的有效靶点。

高效表达乙型肝炎表面抗原的CHO工程细胞株的构建1172-1175

摘要：目的构建高效表达乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的CHO工程细胞株。方法从pCIneo质粒出发,构建含有改造了稀有密码子的HBsAgS基因和启动子弱化的二氢叶酸还原酶（DHFR）转录单位的新型表达载体,利用脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经3轮氨甲喋呤（MTX）梯度加压筛选和单克隆筛选,获得高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,并对HBsAg的分泌动态进行检测。结果所构建的新型表达载体pCI-DS经PCR及酶切鉴定,证明构建正确,转染CHO/dhfr-细胞后,经筛选得到高效表达HBsAg的CHO工程细胞株3F9,表达量达9.21μg/106个细胞·48h。单层细胞培养动态表明,3F9株细胞能在40d内稳定高效表达HBsAg。结论已成功构建稳定高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,为提高HBsAg的产量创造了条件。

人Bid蛋白的原核表达及纯化1176-1178

摘要：目的克隆人Bid基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人Bid基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到588bp的DN段,重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid经双酶切鉴定和测序表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约48000,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度可达97%。结论已成功克隆并原核表达了人Bid基因,得到纯度较高的Bid蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其机制1179-1182

摘要：目的研究Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其可能的机制。方法采用半定量RT-PCR法和克隆形成试验比较Pten＋/＋MEFs与Pten-/-MEFs两种细胞中同源重组修复相关基因Rad51mRNA转录水平的差异,并比较两种细胞对辐射敏感性的差异和辐射后Rad51基因mRNA转录水平的差异及其可能的机制。结果与Pten＋/＋MEFs细胞相比,Pten-/-MEFs细胞中Rad51基因mRNA的转录水平和对辐射的敏感性显著降低;辐射后以及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY-294002作用后,Rad51基因mRNA的转录水平明显增高。结论Pten缺失后Rad51基因表达异常,Pten可能通过PI3K/AKT信号通路来调控Rad51基因的表达。

旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达的变化1183-1186

摘要：目的构建旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达变化的cDNA消减文库,探讨旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞基因表达的变化。方法复制MCF-7细胞小鼠模型,设对照组和旋毛虫感染组（实验组）,采用抑制性消减杂交技术构建旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,并利用反向Northernblot技术对所获得基因的特异性表达进行验证。结果成功构建了旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,克隆的目的基因片段大小分布在200～500bp之间,20个阳性克隆的测序结果经BLAST比对,获得差异表达的已知功能基因8个和未知功能基因4个,这些基因在小鼠乳腺癌细胞中均有表达,而在肌肉组织中无表达。结论旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞差异表达基因上调,其中RB基因可能与乳腺癌细胞的生长抑制密切相关,为在基因水平研究旋毛虫抗肿瘤机理奠定了基础。

人脐血造血干/祖细胞对裸鼠的致突变作用1187-1189

摘要：目的研究人脐血造血干/祖细胞（HS/PCs-HUCB）对裸鼠的致突变作用。方法取雄性BALB/c裸鼠,随机分为5组：HS/PCs-HUCB高、中、低剂量组及阴性、阳性对照组,HS/PCs-HUCB高、中、低剂量组分别经尾静脉注射1.25×109、3.75×10^8和1.25×10^8个细胞/kg,阴性对照组经尾静脉注射含1%人血白蛋白的0.9%NaCl注射液,50ml/kg,阳性对照组经腹腔注射环磷酰胺,50mg/kg,每d给药1次。微核试验连续给药2d,末次给药24h后取骨髓细胞涂片,Giemsa染色,每组裸鼠计数12000个骨髓嗜多染红细胞（PCE）中微核细胞数;精子畸形试验连续给药5d,首次给药后第35天取附睾,精子滴片,伊红染色,每组裸鼠计数1500个精子的形态。结果HS/PCs-HUCB各剂量组裸鼠的微核率和精子畸形率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义,各组间精子畸形类型构成比差异无统计学意义,畸形精子以无定形为主,其次为无钩、双头、双尾、双体、胖头等;而阳性对照组的微核率和精子畸形率均显著高于阴性对照组。结论HS/PCs-HUCB对裸鼠无致突变作用。

中国长春地区汉族人MMP-9C-1562T基因多态性与IgA肾病易感性的相关性1190-1192

摘要：目的探讨中国长春地区汉族人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）C-1562T基因多态性与IgA肾病易感性的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分别检测长春地区汉族88例IgA肾病患者和133例健康对照者的MMP-9C-1562T基因多态性,比较两组的基因型和等位基因的频率,分析其与IgA肾病易感性的相关性。结果IgA肾病患者MMP-9C-1562T基因型频率分布为：CC型65例（0.739）,CT型23例（0.261）,TT型无;健康人的频率分别为：CC型77例（0.579）,CT型53例（0.398）,TT型3例（0.023）,两组基因频率分布差异具有统计学意义。IgA肾病患者和健康人等位基因C频率分别为0.869和0.778,等位基因T频率分别为0.131和0.222,两组等位基因的分布频率差异也具有统计学意义。结论中国长春地区汉族人MMP-9C-1562T基因多态性可能与IgA肾病的易感性有关,C等位基因可能是其易感基因。

中国生物制品学杂志预防制品

甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品的研制1193-1195

摘要：目的研制甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品。方法收集甲型H1N1流感病毒及其他病毒培养物,用实时荧光PCR方法逐一进行验证。参考品通过协同标定,确定最低检出限范围,7家单位进行适用性检测。反复冻融观察其稳定性。结果所用的3株病毒经实时荧光PCR验证,特异性良好,经基因芯片进一步验证,均为甲型H1N1流感病毒,且无其他病毒核酸污染,经7家单位检测,符合国家参考品标准要求;反复冻融3次后,稳定性良好。结论建立了第1套甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品及相应的质量标准,并已被国家有关部门批准正式使用。

乙型脑炎减毒活疫苗（SA_（14-14-2））病毒原液及成品疫苗的稳定性观察1196-1198

摘要：目的观察乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗（SA14-14-2）病毒原液及成品疫苗的稳定性。方法取3批乙脑减毒活疫苗病毒原液,分别于20～25、2～8、-18～-22及-38～-42℃储存,间隔一定时间取样,检测病毒滴度;将2～8、-18～-22及-38～-42℃储存的在观察末期符合规定的病毒原液制备成品疫苗,观察其于2～8℃储存的稳定性。结果3批疫苗病毒原液在20～25℃储存16h、2～8℃储存12d、-18～22℃冻存3个月及-38～-42℃冻存6个月,病毒滴度均符合《中国药典》三部（2005版）的要求;由2～8℃储存12d、-18～-22℃冻存3个月、-38～-42℃冻存6个月的病毒原液所制备的成品疫苗2～8℃储存24个月,病毒滴度下降缓慢,且热稳定性良好,符合《中国药典》三部（2005版）的要求。结论乙脑减毒活疫苗病毒原液的稳定性随温度的变化而变化,温度越低,稳定性越好;所制备的相应成品疫苗,在观察期内稳定性良好。

乙型肝炎表面抗原联合rmIL-12诱导的小鼠细胞免疫应答1199-1202

摘要：目的探讨乙型肝炎表面抗原（HBsAg）联合重组鼠白介素-12（rmIL-12）对免疫小鼠诱导细胞免疫应答的影响。方法以不同给药方式、不同剂量的HBsAg联合rmIL-12免疫C57BL/6J小鼠,ELISA法检测小鼠血清及脾淋巴细胞中IFNγ及IL-4的水平。结果HBsAg＋rmIL-12高剂量组免疫的C57BL/6J小鼠,其脾淋巴细胞IFNγ水平明显高于BALB/c小鼠;3种不同给药方式均可诱导C57BL/6J小鼠血清和脾细胞IFNγ水平明显升高,三者之间差异无统计学意义;HBsAg＋rmIL-12高、中、低剂量组免疫C57BL/6J小鼠血清可诱导IFNγ水平明显升高,且呈剂量依赖性,脾细胞IFNγ水平在中、低剂量组均未产生效应,高剂量组明显升高,而对IL-4无明显影响。结论rmIL-12可显著增强HBsAg诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型,对于发展治疗性乙肝疫苗具有潜在的应用价值。

中国生物制品学杂志消息

第二届全国药物性损害与安全用药学术会议——抗感染药物不良反应与临床安全应用专题研讨会征文通知1202-1202

摘要：抗感染药物是临床使用最广泛、最重要的药物之一,但严重不良反应、不合理用药及微生物耐药性等问题引起的危害受到医药卫生工作者的密切关注。为了使临床重视抗感染药物的安全性,避免或减少其危害,维护患者安全,药物不良反应杂志社将继2009年首届“药物性损害与安全用药学术会议——神经精神疾病用药安全与药源性神经精神疾病防治学术会议”之后,定于2010年4月在北京召开第二届全国药物性损害与安全用药学术会议,主题为“抗感染药物不良反应与临床安全应用”。

中国生物制品学杂志预防制品

原核表达HPV16 L1蛋白的变性、纯化及复性效果评价1203-1205

摘要：目的探讨原核表达HPV16L1蛋白的变性、纯化及复性条件,并对复性效果进行评价。方法将重组质粒pET28a-L1转化E.coliBL21（DE3）,经放大培养诱导表达后,收集菌体,超声破碎后提取包涵体,并对其进行洗涤、变性,离子交换层析纯化,然后稀释复性。经电镜观察、红细胞凝集试验以及免疫原性分析,对复性效果进行评价。结果L1蛋白在8mol/L尿素中溶解不完全,SDS、硫脲和高pH值可提高其溶解度;纯化后的L1蛋白纯度可达90%;电镜可观察到VLP,并能凝集小鼠红细胞。免疫家兔后,可产生高滴度的抗体。结论复性的HPV16L1蛋白在体外可自我折叠形成具有正确空间构象的VLP,且具有较好的免疫原性,为进一步研制HPV16预防性疫苗及诊断试剂盒奠定了基础。

中国生物制品学杂志治疗制品

重组人干扰素β1b活性测定国家标准品的研制1206-1209

摘要：目的研制重组人干扰素β1b（rhIFNβ1b）生物学活性测定国家标准品。方法按《中国药典》三部（2005版）要求检测rhIFNβ1b标准品原液各项质量指标,以rhIFNβ1b国际标准品为标准进行协作标定,并检测其稳定性。结果rhIFNβ1b国家标准品经检测,外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%,分装精度为0.44%。该标准品经3家实验室协作标定24次,几何平均生物学活性为7.18×10^4IU/支,平均生物学活性的95%可信区间为6.87×10^4～7.52×10^4IU/支,单次测定的95%参考值范围为5.76×10^4～8.68×10^4IU/支,平均可信限率为4.36%。在温度为-20、4、25和37℃条件下放置12个月,其生物学活性保持稳定。结论该批rhIFNβ1b活性测定国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,生物学活性定为7.2×10^4IU/支,批号为08/01。

中国生物制品学杂志诊断制品

抗肠道病毒71型单克隆抗体的制备及鉴定1210-1212

摘要：目的制备肠道病毒71型（EV71）单克隆抗体,并进行初步鉴定。方法将RD细胞和Vero细胞培养的EV71原液通过氯化铯超速离心纯化,分别作为免疫抗原和检测抗原,制备单克隆抗体。通过Westernblot分析、间接免疫荧光试验和ELISA法鉴定单抗的特异性。采用间接ELISA法测定单抗的酶标效价,微量细胞培养中和试验测定单抗的中和效价。结果获得1株可稳定分泌抗EV71单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单抗可与EV71特异性结合,酶标效价为1∶204800,中和效价为1∶28。结论已成功筛选出1株分泌抗EV71的单抗细胞株,为建立EV71疫苗抗原含量测定方法奠定了基础。

抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段单克隆抗体的制备1213-1215

摘要：目的制备抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段（sTRAIL）的单克隆抗体。方法用重组sTRAIL免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,捕获ELISA筛选阳性克隆,制备腹水抗体。间接ELISA测定单抗效价,并进行单抗亚类、特异性鉴定及杂交瘤细胞染色体和单抗识别位点分析。将杂交瘤细胞体外连续培养3个月及冻存6个月后,检测细胞培养上清的效价。结果3株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgG1型,腹水单抗效价均高于10-6,杂交瘤细胞染色体数介于94～98条之间,均识别sTRAIL分子上线性表位。细胞体外连续培养3个月及冻存6个月后的上清效价保持稳定。结论已成功制备了3株可稳定分泌抗sTRAIL单克隆抗体的杂交瘤细胞,为TRAIL的定性定量检测及组织表达分析奠定了基础。

Vero细胞HCP试剂盒的稳定性观察1216-1218

摘要：目的观察Vero细胞HCP试剂盒的稳定性。方法将Vero细胞HCP试剂盒分别于2～8℃和37℃放置不同时间,检测试剂盒的灵敏度、特异性、准确性及精密性。结果试剂盒在2～8℃放置10个月的特异性及灵敏度均较好;检测参考品的回收率在91.7%～114.8%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。37℃放置7d,试剂盒的灵敏度仍可达12.5ng/ml;放置10d,检测参考品的回收率在85%～115%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。结论Vero细胞HCP试剂盒于2～8℃放置10个月及37℃放置7d的稳定性较好,仍可正常使用。