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中国生物制品学 2009年第07期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

人源核糖体展示单链抗体库的构建633-638

摘要：目的构建人源核糖体展示单链抗体（scFV）库。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA，反转录为cDNA，以此为模板，设计多对具有简并性特点的引物，PCR扩增人免疫球蛋白重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因，在其两端加上核糖体展示所需元件，并通过重叠PcR法将VH和VL经（G1y45er），短肽连接成单链抗体，构建核糖体展示库。结果利用不同引物进行PCR时，绝大多数引物能扩增出300～400bp的VH和VL片段；通过大引物扩增成功加上了核糖体展示所需元件，重叠PCR体外连接成约900bp大小的scFv基因，大量扩增得到核糖体展示库。结论已成功构建了人源核糖体展示scFv库，为人源抗体药物的开发奠定了基础。

大鼠颅脑外伤后生长相关蛋白在中枢神经系统的表达643-646

摘要：目的观察大鼠颅脑外伤后生长相关蛋白（GAP－43）在中枢神经系统表达的变化，为探讨颅脑外伤后神经元再生和修复机制及临床应用药物治疗颅脑外伤提供理论依据。方法采用液压冲击法建立大鼠脑外伤模型，同时设正常对照组和假手术对照组。成模后取额皮质及海马部位，应用HE染色法观察额皮质区和海马CA1区的病理学改变，免疫组化法检测GAP-43的表达。结果轻、中、重度损伤组大鼠脑组织均出现明显的病理学改变，各损伤组大鼠创伤性颅脑外伤（TBI）后，额皮质区及海马CA1区均于12h开始m现GAP－43表达增强，3d后明显增强，1周达高峰，2周时开始降低。GAP-43的免疫反应产物的实际累积光密度值（CIOD）值在TBI12h后各时间点均明显高于同期的正常对照组和假手术对照组，中、重度损伤组CIOD值在TBI12h后明显高于同期轻度损伤组。结论大鼠TBI后，GAP-43的表达增强；TBI损伤越重，其GAP-43的表达越强。

人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化647-650

摘要：目的 原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε（hCD3ε）链。方法 以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板，采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因，并克隆人pCR-II载体，酶切鉴定及测序分析后，再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中，构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E.coli BL21（DE3）, IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化后，进行Western blot鉴定。结果 酶切分析及DNA测序证实，hCD3ε链基因被正确克隆人pGEX-4T-3载体，并能在原核系统中稳定表达。表达产物的相对分子质量为49500, 0.2mmol/L IPTG 25℃诱导表达4.5h,目的蛋白的表达量最高，占菌体总蛋白的29.3%，其中可溶性表达占12.8%。纯化的融合蛋白纯度可达86.1%，可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别。结论 已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白。

表皮葡萄球菌与血管内皮细胞的黏附作用及其机制651-653

摘要：目的探讨表皮葡萄球菌与人脐静脉血管内皮细胞ECV304的黏附作用及其机制。方法将表皮葡萄球菌临床分离株通过刚果红琼脂检测胞间多糖黏附素（PIA）；半定量生物被膜形成试验检测生物被膜表型；并在体外与ECV304细胞共同作用，在倒置显微镜下观察表皮葡萄球菌对ECV304细胞的黏附数。结果表皮葡萄球菌黏附ECV304细胞的数量随作用时间的延长而增加；PIA^＋／生物被膜表型＋菌株与ECV304细胞的黏附数多于PIA^＋／生物被膜表型-菌株和PIA^-／生物被膜表型-菌株，且差异有统计学意义，而PIA^＋／生物被膜表型菌株和PIA^-／生物被膜表型-菌株与细胞的黏附数差异无统计学意义。结论表皮葡萄球菌与血管内皮细胞的黏附有时间依赖性，能形成生物被膜的表皮葡萄球菌更易与血管内皮细胞黏附。

白藜芦醇诱导Raji细胞死亡的自噬途径654-658

摘要：目的探讨白藜芦醇对BurkittB淋巴瘤Raji细胞的增殖抑制作用及诱导死亡途径。方法用白藜芦醇处理Raji细胞，透射电镜及MDC染色检测细胞死亡；Western blot法检测Caspase－3、细胞色素C及Cathepsin D蛋白的表达。结果白藜芦醇可明显抑制Raji细胞增殖，电镜观察细胞内出现了大量的自噬小泡，MDC染色后细胞点块状荧光结构明显增加。Western blot分析显示，白藜芦醇可引起细胞色素c从线粒体释放，但释放量与Jurkat细胞相比明硅减少，且不能导致Caspase-3的活化。Cathepsin D活性成分32kD片段随白藜芦醇处理时间的延长而减少。结论白藜芦醇可抑制Raji细胞增殖，并通过Caspase非依赖途径诱导细胞白噬死亡。

MafA基因真核表达质粒的构建及其在人肝癌细胞HePG-2中的表达和作用659-662

摘要：目的构建胰岛素启动子肌腱膜的纤维肉瘤肿瘤基因同系物A（MafA）基因的真核表达质粒，并观察MafA基因在人肝癌细胞HePG-2中的表达及其作用，为糖尿病基因治疗的研究奠定基础。方法提取小鼠胰腺组织总RNA，经RT—PCR扩增MafA基因片段，克隆至真核表达载体pEGFP—N2和pEGFP—C1中。用脂质体将重组表达质粒转染至人肝癌细胞HePG-2中，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，RT—PCR检测转染细胞中MafA和insulinⅡ基因的转录水平，Western blot检测融合蛋白EGFP—MafA的表达。结果重组表达质粒pEGFP—N2／MafA和pEGFP—C1／MafA经PCR、双酶切和测序证明构建正确；重组质粒转染的HePG-2细胞有绿色荧光蛋白表达；经RT—PCR可检测到MafA基凶表达，但未检测到insulin II基因表达；经Western blot检测，在相对分子质量约70000处可见特异性反应条带。结论已成功构建了MafA基因真核表达质粒pEGFP—N2／MafA和pEGFP—C1／MafA，以其转染的HePG-2细胞可表达MafA基因，并翻译成蛋白，但未表达insulin II基因。

Serratia marcescens非特异性核酸内切酶的原核表达及其应用667-670

摘要：目的在大肠杆菌中表达Serratia-marcescens非特异性核酸内切酶（SMNE），并进行纯化、活性检测及应用。方法合成smne基因，应用PCR技术在基因的5’端引入6个组氨酸标签序列，将其插入分泌表达载体pET-20b（＋）中，转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS，IPTG诱导表达。表达产物经镍离子螯合琼脂糖凝胶一步纯化后，检测其活性并计算比活。将纯化的SMNE用于重组腺病毒的制备，对外源性核酸进行降解，并采用Southern blot对外源性DNA残留量进行测定。结果重组表达质粒pET-20b—smne经PCR、双酶切和测序证明构建正确。重组蛋白的表达量为8．0mg／L，纯化后纯度达95％，比活达1．1×10^6U／mg。在重组腺病毒制备过程中使用后，成品中的外源性DNA残留量≤10ng／5．0×10^11VP。结论已成功地在大肠杆菌中表达了SMNE，纯化的SMNE活性高，有望应用于重组生物制品制备过程中外源性核酸的去除。

双歧啤酒对肥胖大鼠的减肥作用及其机制671-675

摘要：目的探讨双歧啤酒对肥胖大鼠的减肥作用及其机制。方法通过喂食高脂饲料，建立肥胖大鼠模型。将模型大鼠随机分成双歧啤酒组（饮用双歧啤酒）、市售啤酒组（饮川市售啤酒）、肥胖组（饮用纯净水）3组，另设正常对照组（饮用纯净水），每组10只。4组大鼠均喂食4周基础饲料后处死，检测各组体重、体脂、食物利用率（FE）、血葡萄糖（GLU）、血总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）、血瘦素（Leptin）和血胰岛素（Insulin）水平以及粪便双歧杆菌活菌的含量。结果与肥胖组相比，双歧啤酒组大鼠的腹膜后脂肪／体重、TG和GLU水平均明显下降，粪便双歧杆菌的含量明显增加，而市售啤酒组与肥胖组相比，上述指标均无显著性变化，儿双歧啤酒组大鼠的腹膜后脂肪／体重、GLU和胰岛素水平与正常组大鼠相比，差异无统计学意义。结论双歧啤酒能够促进大鼠肠道双歧杆菌的增长，调节脂肪贮存和糖、脂代谢。

中国生物制品学杂志消息

第四次全国现代免疫诊断暨疫苗学术研讨会征文通知675-675

摘要：为促进我国免疫诊断与疫苗技术的发展，加强有关学科的经验交流和沟通，中华医学会微生物学与免疫学分会和中华预防医学会生物制品分会决定于2009年10月在贵阳召开第四次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会。

中国生物制品学杂志基础研究

太空诱变对链球菌菌体多糖分子表达的影响676-678

摘要：目的研究太空诱变对α-溶血性链球菌多糖分子表达的影响。方法采用改良的过碘酸钠法将辣根过氧化物酶（HRP）分别标记在刀豆凝集素（ConA）、麦胚凝集素（WGA）、接骨小凝集素（SNA）、蓖麻凝集素I（RCA—I）及植物血凝素（PHA）上，合成HRP－凝集索，检测普通型α－溶血性链球菌及太空型链球菌菌体内多糖分子的表达水平。结果太空型链球菌菌体内末端为ConA、SNA及RCA—I所识别的多糖分子含量较普通型α－溶血性链球菌高，且差异有统计学意义；末端为WGA及PHA所识别的多糖分子含量，普通型α－溶血性链球菌较太空型链球菌稍高，但差异无统计学意义。结论太空诱变对细菌的多糖分子表达具有调控作用，为细菌多糖制品的筛选及其性能和产量的提高提供了新的途径。

中国生物制品学杂志实验技术

油菜籽皮中原花青素提取工艺的优化678-678

摘要：原仡青素是植物体内一类在热酸处理下能产生红色花色素的多酚类化合物，是一种天然抗氧化剂，广泛分布于葡萄籽、松树皮、蚕豆皮中。日前，原化肯素已作为主要活性成分，添加于药品及食品营养补充剂中。利川葡萄籽、葡萄皮、茶叶、树皮、山楂皮等提取原花青素的报道较多，但利用油菜籽皮提取的报道较少。木实验以油菜籽皮为原料，采用多闪素分析方法提取原花青素，并分析提取剂种类、浓度、料液比、提取时间等闲素埘提取效果的影响。现将实验结果报道如下。

中国生物制品学杂志基础研究

柯萨奇B4病毒jlu06株基因序列及遗传进化分析679-681

摘要：目的对柯萨奇B4病毒（CVB4）jlu06株进行基因序列及遗传进化分析，并探讨其与致病相关的分子基础。方法Trizol法提取病毒RNA，RT—PCR扩增目的基因片段，测定基因组全序列，并进行序列同源性及遗传进化分析。结果CVB4jlu06株基闽组全长7395个核苷酸，编码2183个氨基酸，与其他CVB4株的同源性较高，且发生了10个氨基酸的变异，与HumanCB4和POLGCXB4亲缘关系较近，与CXB2亲缘关系较远；CVB4ilu06株与具有潜在致糖尿病性病毒株，在非结构蛋白3A区4个位点有共同的氨基酸，与非致病毒株不同。结论CVB4jlu06株具有典型的CVB4基因组特征，在非结构蛋白3A区发生的核苷酸和氨基酸变异可能与其致病性相关。

中国生物制品学杂志预防制品

弓形虫可溶性速殖子抗原联合IFNγ滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答682-685

摘要：目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）联合IFN7滴鼻免疫BALB／c小鼠诱导的免疫应答，为研制弓形虫黏膜疫苗提供实验依据。方法将BALB／c小鼠随机分为实验组和对照组，实验组以STAg（20μg／只）＋IFNγ（1000U／只）滴鼻，对照组以PBS滴鼻。免疫2次，间隔2周。分别于初次免疫后0、2、4、6、8、10、12周处死小鼠，分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞（IELs）并计数；分离血清，用ELISA法测定IgA和IgG含量。结果免疫后实验组小鼠IELs和脾淋巴细胞均有增生，IELs和脾淋巴细胞数量均于初次免疫后4周达峰值，IEL数量4、6周显著高于对照组；脾淋巴细胞数量2、4周显著高于对照组。实验组小鼠血清IgG和IgA水平均于初次免疫后4周达峰值，IgG水平2、4周显著高于对照组，至12周时仍高于对照组；IgA水平4、6周显著高于对照组。结论STAg联合IFNγ滴鼻免疫BALB／C小鼠，可有效诱导黏膜及系统免疫应答，且可持续较长时间。

中国生物制品学杂志消息

中华预防医学会关于第三届学术年会暨全球华人公共卫生协会第四届年会和世界公共卫生联盟西太区公共卫生大会的征文通知685-685

摘要：中华预防医学会拟于2009年11月初在北京召开第三届学术年会（以下简称学术年会）。“全球华人公共卫生协会第四届年会”和“世界公共卫生联盟西太区公共卫生大会”将同期召开。

中国生物制品学杂志预防制品

CpG ODN对卡介苗免疫效应的影响686-688

摘要：目的观察cpGODN对卡介苗免疫效应的影响，为其临床应用奠定基础。方法以CpG ODN）为佐剂，与卡介苗通过皮下注射和黏膜途径免疫BALB／c小鼠，称量小鼠体重，检测迟发型变态反应及小鼠血清中抗结核菌素（PPD）IgG抗体效价和Th1型细胞因子IFNγ的含量。结果CpG可增强BALB／c小鼠的迟发型变态反应，提高血清中抗PPDIgG抗体效价和IFNγ的含量，且不会影响小鼠体重增长。皮下注射较黏膜免疫效果更好。结论CpG ODN可提高卡介苗的免疫效应，作为一种有效的佐剂，有望在新型结核疫苗的开发中发挥作用。

中国生物制品学杂志治疗制品

DC-Chol脂质体DNA复合物体外对HBV的抑制作用689-691

摘要：目的观察Dc—Chol脂质体DNA复合物（DLDC）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法制备DLDC．HepG2．2．15细胞经不同浓度的DLDC作用后，检测其对细胞的毒性作用；提取细胞质DNA，用化学发光Southern blot法检测DLDC对细胞内HBVDNA复制的抑制作用。结果DLDc可抑制HepG2．2．15细胞增殖，其TC。为78．13“g／ml，TC505rj421．86”g／ml；DLDC可抑制HepG2．2．15细胞HBVDNA复制，其IC50为45ng／ml，S1为9．37。结论DLDC对胞内HBvDNA的复制有明显的抑制作崩．

中国生物制品学杂志诊断制品

肺炎支原体P30黏附素基因的原核表达及初步应用692-695

摘要：目的构建肺炎支原体P30黏附素基斟原核表达质粒并进行表达；以纯化的rP30蛋白为抗原，建立间接斑点－ELISA（dolt—ELISA）法，J1j于评价rP30蛋白在肺炎支原体（MP）感染诊断中的价值。方法以MP基因组DNA为模板，PCR扩增P30基因，构建重组原核表达质粒pET－32a（＋）／P30，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达；Western blot检测表达产物的反应原性；以纯化复性后的rP30蛋白为抗原，建立间接dolt—ELISA法，对40份临床疑似肺炎支原体感染患儿血清进行检测。结果表达的rP30蛋h相对分子质量约为52000，表达量约占菌体总蛋白的13％，主要以包涵体形式存存，经Ni^2＋ -NTA树脂纯化后，纯度约为93％。Western blot证实，rP30蛋白可与阳性肺炎支原体感染患儿血清发生特异性反应。用rP30蛋白建立的间接dolt—ELISA法，其敏感性和特异性分别为95．45％和72．22％，准确性为85％。结论已成功地在大肠杆菌中表达了rP30蛋白，为MP感染的快速诊断提供了一种新的方法，也为进一步探讨P30蛋白的功能及其在MP感染发病机制中的作用奠定了基础。

病毒类疫苗Veto细胞宿主蛋白残留量检测试剂盒的适用性验证696-698

摘要：目的对病毒类疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量检测试剂盒进行适用性验证。方法将不同细胞基质制备的乙型脑炎灭活疫苗、人用狂犬病病毒疫苗共16批编盲后，每批疫苗均质等量分为44份，分别分发给3个实验室，用同批ELISA-Vero细胞宿主蛋白检测试剂盒进行检测，对试剂盒进行适用性验证，考核试剂盒的专属性、精密性、线性和范围等指标。结果3个实验室检测每批样品44次，原代地鼠肾细胞和鸡胚细胞为基质的疫苗检测结果均为阴性，以Vero细胞为基质的疫苗检测结果均为阳性。16份样本44次检测结果的变异系数在7．34％～14．77％之间，均低于15％；相对线性范围在12．5—400ng／ml之间。16份疫苗中6批Vero细胞乙脑疫苗和5批人用狂犬病病毒疫苗检出的细胞宿主蛋白残留量分别在153．3—5850．9ng／ml和1895．7～40625．1ng／ml之间。结论疫苗中Vero细胞宿主蛋白残留量检测试剂盒具有较好的专属性、精密性和线性，可用于Vero细胞为基质的病毒类疫苗宿主蛋白残留量的检测。