中国生物制品学杂志

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中国生物制品学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

Chinese Journal of Biologicals

  • 22-1197/Q 国内刊号
  • 1004-5503 国际刊号
  • 0.55 影响因子
  • 1-3个月下单 审稿周期
中国生物制品学是中华预防医学会;长春生物制品研究所主办的一本学术期刊,主要刊载该领域内的原创性研究论文、综述和评论等。杂志于1988年创刊,目前已被国家图书馆馆藏、CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)等知名数据库收录,是国家卫生健康委员会主管的国家重点学术期刊之一。中国生物制品学在学术界享有很高的声誉和影响力,该期刊发表的文章具有较高的学术水平和实践价值,为读者提供更多的实践案例和行业信息,得到了广大读者的广泛关注和引用。
栏目设置:疫苗研究、基础研究、治疗制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、综述、专题报道

中国生物制品学 2009年第02期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究
旋毛虫Serpin基因的体外表达及其特性鉴定105-110

摘要:目的体外表达旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpin)基因,并检测其在旋毛虫不同发育时期mRNA转录、蛋白表达与分子定位及反应原性情况,为以其作为候选诊断抗原基因提供实验依据。方法根据旋毛虫Serpin基因序列,以重组质粒pBlue-script—WM5为模板,利用PCR技术去除其全长cDNA的信号肽序列,采用原核表达载体pET-28a构建不含该基因信号肽的、融合蛋白不含组氨酸标签的重组表达质粒pET-28a—WM5,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,采用Western blot法检测反应原性。免疫组织化学技术检测Serpin蛋白在旋毛虫不同发育时期的表达及定位情况。采用RT—PCR和实时定量RT—PCR技术检测Serpin基因在旋毛虫不同发育时期的转录水平。结果重组质粒pET-28a—WM5经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,Serpin基因能够在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的51.1%。纯化后的重组蛋白纯度可达98%,与猪抗旋毛虫60d抗血清有较好的反应原性,与26d猪抗血清无明显反应信号;RT—PCR与实时定量RT—PCR结果显示,该基因在旋毛虫不同发育时期均有转录,但转录水平有明显差异,有2个转录高峰期(Ad2/Ad3和ML)以及1个转录水平明显下降期(Ad5);免疫组化鉴定表明,Serpin天然抗原在旋毛虫肌幼虫时期18d开始表达,且在感染35d后大量表达和分泌。结论已获得较高纯度的旋毛虫Serpin体外表达融合蛋白,其具有较好的反应原性。旋毛虫Serpin基因具有期特异性表达的特点,且在肌幼虫期具有高转录与高表达水平,可作为捕获旋毛虫肌幼虫期循环抗体的候选诊断抗原基因。

鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选111-114

摘要:目的构建鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法 用EHEC O157:H7 Stx2类毒素免疫BALB/C小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT—PCR分别扩增抗体轻、重链(K和Fd)基因,经双酶切依次克隆人噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157:H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHEC O157:H7 Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×10^7的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHEC O157:H7 Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础.

CTP-OD-HA融合蛋白的原核表达及其活性鉴定115-119

摘要:目的构建CTP—OD—HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a(+)质粒,构建重组原核表达质粒pCTP-OD—HA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的蛋白回收和FITC标记后,将FITC—CTP—OD—HA融合蛋白作用于K562细胞,观察其转导活性及细胞定位。结果重组原核表达质粒pCTP-OD-HA经酶切及测序鉴定,证明构建正确。37℃,1mmol/L IPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的35%,纯化后纯度达95%以上。FITC—CTP-OD—HA融合蛋白在K562细胞中具有高转导活性和显著的胞浆定位特性。结论已成功构建CTP—OD—HA融合基因原核表达质粒,并高效表达了目的蛋白,为进一步研究其在CML信号转导通路中的作用,阐明CML的发病机制及探讨蛋白肽在CML中的治疗策略奠定了基础。

中国生物制品学杂志消息
征稿119-119

中国生物制品学杂志基础研究
bcl-2基因过表达的中国仓鼠卵巢细胞株的建立120-123

摘要:目的建立bcl-2基因过表达的中国仓鼠卵巢细胞株。方法从CHO细胞中提取总RNA,以其为模板,采用RTPCR方法扩增bcl-2基因,克隆入pcDNA3.1载体中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-bcl-2。利用脂质体转染法转染CHO.dhfr-细胞,用硫酸新霉素筛选阳性克隆,命名为CHO-G6细胞。通过流式细胞术检测bcl-2基因的表达及细胞凋亡水平,MTT法检测细胞的增殖活力。结果CHO—G6细胞bcl-2基因表达阳性率(92.46%)明显高于CHO—dhfr-细胞(76.08%);CHO-G6细胞的凋亡率(1%)明显低于CHO—dhfr-细胞(19%);在无血清培养基中培养1~5d,CHO—G6细胞的增殖活力均明显高于CHO—dhfr-细胞。结论已成功构建了表达bcl-2基因并具有一定抗凋亡能力的重组CHO细胞株,为进一步应用该细胞株生产重组蛋白奠定了基础。

双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素基因真核表达质粒的构建及其在HeLa细胞中的表达124-127

摘要:目的构建双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素(HA)基因真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达。方法通过PCR分别改造流感病毒H1亚型HA1和H3亚型HA基因片段,在融合片段间引入(G4S),柔性linker和口蹄疫病毒2A蛋白linker。采用DNAstar结合生物信息学软件Insight Ⅱ分析后,对其空间构象进行模拟。将H1HA1-H3HA融合基因片段克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游。通过脂质体法转染HeLa细胞,RT—PCR法检测转染细胞中目的基因mRNA的转录,间接免疫荧光检测转染细胞中目的蛋白的表达。结果表达双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素基因的重组真核表达质粒pVAX1-H3HA-H1HA1经酶切和测序证明构建正确。转染重组质粒的HeLa细胞可检测到目的基因mRNA的转录和目的蛋白的表达。结论已成功构建了真核表达质粒pVAX1-H3HA—H1HA1,并可在HeLa细胞中正确转录与表达,为H3、H1亚型流感病毒双价核酸疫苗的研究奠定了基础。

结核分枝杆菌ESAT-6重组二聚体的表达、纯化及其在血清学诊断中的初步应用128-131

摘要:目的表达和纯化结核分枝杆菌早期分泌蛋白ESAT-6重组二聚体(rdESAT-6),并探讨其在结核病血清学诊断中的价值。方法以HG856A核酸疫苗质粒为模板,经PCR扩增获得2xesat-6基因,克隆至pET-28a质粒,构建原核表达质粒pET2E6;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;用Ni^2+柱亲和层析纯化重组蛋白,并用Westernblot鉴定其反应原性,EHSA检测其敏感性和特异性。结果ESAT-6重组二聚体以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的35%;纯化的rdESAT-6纯度可达95%,可与ESAT-6小鼠抗血清发生特异性反应;用于结核病血清学诊断的敏感性为30%,特异性为95.8%。结论已成功表达并纯化了rdESAT-6,可作为结核病血清学诊断或皮试检测用的抗原之一。

小鼠MIF基因的原核表达及纯化132-135

摘要:目的克隆小鼠巨噬细胞移动抑制凶子(MIF)基因,在原核系统中表达并进行初步纯化,为研究MIF的功能奠定基础。方法提取小鼠肺组织总RNA,采用RT—PCR技术扩增MIF基因,克隆人pMD18-T载体,酶切鉴定及测序后,再定向插入原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS—PAGE及Westernblot鉴定后,进行纯化。结果克隆得到的目的基凶片段大小与预期相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致。重组MIF蛋白相对分子质量约为15000,以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的40%,且具有良好的反应原性。经初步纯化后,纯度达95%以上。结论已成功克隆了小鼠M1F基因,并在原核系统中表达了重组蛋白,纯化的蛋白纯度较高,可用于后续试验。

脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的活化凋亡作用136-138

摘要:目的探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别用0.5、1.0、2.5μg/ml LPS刺激RAW264.7细胞24h,一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO水平;用1.0μg/ml LPS分别刺激细胞3d和6d,台盼蓝拒染法检测细胞增殖情况;用1.01μg/ml LPS刺激细胞6d,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果经LPS刺激后24h,RAW264.7细胞培养上清中NO含量明显增加,且具有剂量依赖性;LPS刺激3d和6d后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间依赖性;LPS刺激6d时,细胞周期被阻滞在S期,并出现明显的凋亡。结论LPS具有诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋广的作用。

中国生物制品学杂志消息
《实用药品正异名词典》(2007年版)征订启事138-138

中国生物制品学杂志基础研究
人幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因穿梭质粒的构建及表达139-142

摘要:目的构建人幽门螺朴菌尿素通道蛋白Urel基因的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒,并存耻垢分枝杆菌中进行表达。方法PCR扩增幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI编码基因全长片段,克隆入pET32a(+)质粒,鉴定正确后,冉亚克隆人大肠杆蔚-分枝杆菌穿梭质粒pJHSP70,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70-Urel,转化耻垢分枝杆菌,诱导表达后,进行SOS—PAGE和Western blot检测.结果从幽门螺杆菌基因组中扩增出585bp的Urel基因片段。重组质粒pJHSP70-UreI经酶切和PCR鉴定,与预期结果一致。目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的18.5%,且具有良好的反应原性。结论已成功构建了幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基凶大肠仟菌.分枝杆菌穿梭表达质粒,并存耻垢分枝杆菌中获得表达。

小鼠PARP-1基因RNAi表达质粒的构建与筛选143-146

摘要:目的构建并筛选小鼠聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)基凶的RNAi表达质粒,为肿瘤基因治疗探索新途径。方法根据GenBank中报道的PARP-1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体Lipokctanlinew 2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株。48h后,采用RT—PCR技术检测转染细胞中PARP-1基因mRNA的转录水平,筛选有效的PARP-1 RNAi质粒。结果4种重组PARP-1 RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确。转染后48h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo—PARP-1—1308和pGPU6/GFP/Neo—PARP-1—1837的Lewis细胞PARP-1基因mRNA的转录水平降低,转染pGPU6/GFP/Neo—PARP-1—1308组下降更明显,以其作为后续实验的有效质粒。结论已成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为PARP-1基因RNAi治疗肿瘤的研究奠定了基础。

Survivin启动子调控sea基因真核表达质粒的构建及其在肺癌细胞中的特异性表达147-149

摘要:目的构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达。方法以金黄葡萄球菌(ATCC25923)基因组为模板,PCR扩增sea基因。用sea基因替代以Survivin启动子为调控序列的pGL—S—RED质粒中的Red基因,构建真核表达质粒pGL—S—SEA。酶切及测序鉴定后,用脂质体转染A549细胞和MRC-5人胚肺成纤维细胞,RT—PCR检测两种细胞sea基因的转录情况。结果Survivin启动子调控的、以超抗原SEA编码序列CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-S—SEA构建正确,并在A549细胞中启动了sea基因的转录,其强度为内参基因(GAPDH)的65.96%,而在MRC-5细胞对照中未检测到sea基因的转录。结论已成功构建Survivin启动子调控的sea基因真核表达质粒,Survivin启动子可在转录水平特异性地调控sea基因在A549细胞内表达,为下一步以其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础。

KMB-17细胞株的遗传稳定性150-152

摘要:目的研究连续传代的KMB-17细胞株的遗传稳定性。方法将第23代KMB-17细胞连续传代至60代,按常规染色体分析方法,观察不同代次细胞的染色体数目和结构变化。选取核基因组和线粒体基因组中高突变的15个STR位点,经PCR扩增和电泳分析微卫星不稳定性。结果KMB-17细胞株经连续传代培养至56代仍未发生染色体数目和结构改变,微卫星位点也未发生突变。结论KMB-17细胞株连续传代培养后,仍能保持细胞生物学特征及遗传特征的稳定,40代以前的细胞作为疫苗生产基质是安全的。

超氧化物歧化酶的固定化及其酶学性质153-157

摘要:目的制备固定化超氧化物歧化酶(SOD),并分析其酶学性质。方法以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化超氧化物歧化酶。以邻苯三酚自氧化法分别测定溶液酶与固定化酶的活力,并计算回收率。对固定化酶的温度和pH稳定性、半衰期、重复使用的回收率及米氏常数(Km)进行测定。结果固定化超氧化物歧化酶活力为333U/g,酶活回收率为86.32%,半衰期为43.8d;固定化酶室温保存5d后,相对酶活力仍保持在80%以上,最适反应温度为45℃,使用一次后回收率为70.12%,重复使用两次后回收率为51.72%;固定化酶与溶液酶在pH6时活性最强,Km分别为0.18mmol/L和0.16mmol/L。结论该固定化酶较溶液酶的稳定性得到提高,便于贮存,在食品、药品、日用品等领域有良好的应用前景。

中国生物制品学杂志预防制品
CpG-ODN对伤寒Ty21a疫苗诱导的细胞免疫应答的作用162-164

摘要:目的探讨CpG—ODN对伤寒Ty21a疫苗诱导的细胞免疫应答的作用。方法分别用含10、30及50μg CpG-ODN的伤寒.Ty21a疫苗免疫小鼠,各剂量组分别于第0、14和28d灌胃免疫3次,末次免疫后1周,采集小鼠睥细胞。流式细胞仪检测脾细胞MHC—Ⅱ类分子和CD40分子的表达;培养脾细胞,用ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-10的水平。结果不同剂量CpG—ODN的疫苗免疫组脾细胞CD40和MHC-Ⅱ类分子的表达水平均高于阳性对照组,且随着CpG—ODN剂量的增加,表达增强。加入不同剂量CpG—ODN的疫苗免疫组脾细胞培养上清液中IFN-1和IL-10的水平均升高,且IL-10随着IFN-γ分泌水平的增加而降低。结论CpG—ODN可提高伤寒Ty21a疫苗诱导的Th1型免疫应答水平:

无细胞百日咳疫苗质量控制方法的建立165-167

摘要:目的建立我国无细胞百日咳疫苗组分含量和纯度的检测方法。方法应用ELISA方法对生产过程中组分含量(PT和FHA)进行分析,SDS—PAGE和PAGE方法对疫苗原液中盯和FHA的纯度进行测定。结果通过对生产过程中组分含量的测定,绘制出组分动态图,可以实时监控生产过程中有效组分的变化。检测疫苗原液中PT和FHA纯度的SDS—PAGE法的分辨率较高,但PAGE法条带少,易于分析。结论所建立的质量控制方法可用于我国无细胞百日咳疫苗的质量控制。

中国生物制品学杂志治疗制品
盐酸氨基葡萄糖及其与甲氨蝶呤联用对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用168-170

摘要:目的探讨盐酸氨基葡萄糖及其与甲氨蝶呤联用对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用。方法将佐剂性关节炎大鼠分为4组:模型对照组(AA组)、盐酸氨基葡萄糖组(GH组)、甲氨蝶呤组(MTX组)和联合用药组(GHM组),另设1组空白对照。自造模前1d至造模后22d,正常对照组和AA组每天给予蒸馏水灌胃,其他组以相应的药物灌胃。造模前及造模后不同时间,测量各组大鼠左、右后足体积,造模后22d,ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果与AA组比较,在继发反应期,GH、MTX及GHM各组的左、右后足体积和血清中TNF-α含量均有所下降,且差异均有统计学意义,除血清中TNF—α含量GHM组显著低于MTX组外,其他各项指标GHM组与GH组和MTX组比较,差异均无统计学意义。结论盐酸氨基葡萄糖可缓解大鼠佐剂性关节炎症状,具有抗炎作用和治疗类风湿性关节炎的潜力,其与MTX联用,有望降低MTX的用量。