中国生物制品学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

中国生物制品学 2008年第05期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

复合通用CD4＋T辅助细胞表位基因克隆载体的构建及测序353-355

摘要：目的构建复合通用CD4^＋T辅助细胞表位基因克隆载体，并进行测序。方法由DNAwork2．0软件设计并人工合成20条55个碱基的寡核苷酸序列，利用套叠PCR技术人工合成全基因序列，并克隆至pUC19载体，转化大肠杆菌DH5a，提取质粒，酶切鉴定并进行测序。结果经PCR扩增出645bp的目的DN段。酶切鉴定筛选出8个阳性克隆，经测序获得一个序列完全正确的克隆。结论已成功构建了复合通用CD4^＋T辅助细胞表位基因克隆载体，为研究表位疫苗和细菌多糖结合疫苗提供了新的载体表位。

蚯蚓脱氧核糖核酸酶的底物特异性及降解产物的特性356-359

摘要：目的研究蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶（EwD）的底物特异性及降解产物的特性。方法采用ZOR-BAX-Oligo柱-HPIE、琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法等技术，分析EWD对环状质粒DNA、线状λ-DNA、大肠杆菌基因组的降解作用，及对真核鲱精DNAf、单链DNA等的降解中间产物和终产物的特性，并观察其对RNA的降解作用。结果EWD对这几种DNA均有降解作用，降解产物为较均一的、小于18bp的寡核苷酸。但EWD对RNA无降解作用。结论EWD为脱氧核糖核酸内切酶类。

重组口蹄疫鸡痘病毒vUTAL3CP1的构建及其遗传稳定性和免疫原性360-363

摘要：目的构建重组口蹄疫鸡痘病毒，并检测其遗传稳定性和免疫原性。方法将口蹄疫病毒（FMDV）的衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因插入到鸡痘病毒表达载体中，构建重组鸡痘病毒转移载体pUTAL3CPl，并与鸡痘病毒（FPV）282E4株共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），通过BrdU加压筛选获得重组鸡痘病毒vUTAL3CPl。重组病毒在CEF中连续传30代，分别进行毒力和基因检测，并免疫BALB／C小鼠，检测特异性抗体和中和抗体。结果重组鸡痘病毒经RT-PCR可扩增出目的基因；特异性荧光抗体反应呈阳性；在CEF中连续传30代，毒力稳定，基因未发生缺失和变异；免疫小鼠能产生较高水平的FMDV特异性抗体和中和抗体。结论已成功构建重组口蹄疫鸡痘病毒，且具有良好的遗传稳定性和免疫原性。

RhoC基因沉默对肝癌细胞增殖的影响364-366

摘要：目的构建靶向RhoC基因的RNA干扰（RNAi）载体，并研究RhoC基因沉默对肝癌细胞增殖的影响。方法将合成的寡核苷酸片段克隆入RNAi载体，并转染肝癌细胞，以沉默RhoC基因表达，RT-PCR检测基因抑制效果。绘制生长曲线，检测转染细胞的增殖情况，FCM检测细胞周期变化。结果构建的RNAi载体有效地抑制了肝癌细胞RhoC基因的表达，RhoC基因沉默显著地抑制肿瘤细胞增殖，增殖期细胞百分数显著下降，而静止期细胞百分数显著升高。结论RhoC基因沉默能够抑制肝癌细胞的增殖，为靶向RhoC的肿瘤基因治疗奠定了基础。

TGF-β RⅡ真核表达载体及其RNA干扰质粒的构建及鉴定367-370

摘要：目的构建含有TGF-βⅡ型受体（TCF-βRⅡ）的真核表达载体及针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒，并观察RNA干扰对TGF-βRⅡ表达的抑制作用。方法PCR方法扩增TGF-βRⅡ的cDNA序列，将全长的TGF-βRⅡcDNA插入pcDNA3．1中，构建TGF-βRⅡ的真核表达载体pcDNA3，1-TGF-βRⅡ，并检测其在293T细胞中的表达。根据TGF-βRⅡ的基因序列，设计针对TGF-βRⅡ的干扰RNA，构建针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ。脂质体介导质粒pSUPER-TGF-βRⅡ和pcDNA3．1-TGF-βRⅡ共转染293T细胞，Westernblot法检测RNA干扰质粒的生物活性。结果真核表达载体pcDNA3．1-TGF-βRⅡ和RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ经酶切鉴定构建正确，测序结果显示未发生基因突变。间接免疫荧光检测pcDNA3，1-TGF-βRⅡ转染的293T细胞，可见绿色荧光。针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-βRⅡ的表达。结论已成功构建了TGF-βRⅡ的真核表达载体及针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒，为进一步研究针对TGF-βRⅡ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用奠定了基础。

中国生物制品学杂志消息

欢迎订阅《中国生物制品学杂志》370-370

中国生物制品学杂志基础研究

Asia1型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因真核表达质粒的构建及鉴定371-373

摘要：目的构建Asial型口蹄疫病毒（FMDV）P1-2A-3C基因真核表达质粒。方法采集疫区牛的水疱液及水疱皮，经RT-PCR法扩增出AsiaⅠ型FMDV的前体蛋白基因P1-2段和蛋白酶基因3C片段，分别克隆至pMD18-T载体上，通过酶切、连接，获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。经酶切获得P1-2A-3C片段，插入真核表达载体pVAXIpCMV启动子下游，构建pVAXI-P1-2A-3C真核表达载体，用脂质体法转染HeLa细胞，进行IFA检测。结果Asial型FMDV真核表达载体pVAXlPI-2A-3C，经酶切鉴定证明构建正确，转染HeLa细胞后，可见明显的黄绿色荧光，表明P1-2A-3C基因得到了表达。结论pVAXI-P1-2A-3C可作为Asial型FMD核酸疫苗的候选疫苗。

人Cu，Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性374-377

摘要：目的构建人Cu，Zn-SOD基因的真核表达载体，转化毕赤酵母，并检测表达产物的稳定性。方法根据酵母密码子偏好性，合成人Cu，Zn-SOD基因，克隆至真核表达载体pPICgk中，转化毕赤酵母GS115。甲醇进行诱导表达，SDS-PAGE和Westernblot鉴定表达产物。优化表达条件，并检测粗酶液的稳定性。结果经SDS-PAGE和Westernblot检测，表达的目的蛋白相对分子质量为18000左右；最佳表达条件为pH6．0，甲醇浓度1．5％，持续培养96h；目的蛋白占分泌蛋白总量的27％，最高表达量为91mg／L；最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U／ml，粗酶对氯仿和乙醇稳定，对H202不稳定，对温度有一定的耐受性，pH在6和8时较稳定。结论在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu，Zn-SOD基因。

不同型别正常人红细胞膜蛋白质组的双向凝胶电泳分析381-384

摘要：目的以双向凝胶电泳（2-DE）方法分析不同型别正常人红细胞及细胞膜的蛋白质组图谱。方法提取不同型别的正常人红细胞全细胞蛋白和膜蛋白，以2．DE进行蛋白质的分离，银染显示电泳分离结果，ImageScanner扫描仪扫描并获得图像，以图像分析软件ImageMaster2DPlatinum进行结果分析和比较。结果在不同型别红细胞的全细胞蛋白谱中，有5个蛋白斑点出现表达差异。蛋白硫脲细胞膜处理法与SDS细胞膜处理法获得的红细胞膜蛋白2-DE图谱比较，前者获得的蛋白斑点数增多。结论2-DE有助于分析红细胞膜蛋白质组的表达差异。采用去除膜脂类的样品处理方法，可以提高红细胞2-DE图谱的分辨率。

重组人白细胞介素-10的表达与纯化385-388

摘要：目的表达并纯化重组人白细胞介素-10蛋白，并进行活性检测。方法将重组质粒PCRqT7／NT-TOPO-IL-10转化大肠杆菌B121（DE3）pLyse细胞，IFrG诱导表达。采用Ni柱对表达产物进行亲和纯化，并检测其对外周血单核细胞分泌TNF-α的影响。结果IFrG诱导4h，目的蛋白表达量最高，可达45．02％，主要以包涵体形式表达。纯化后，所得目的产物的回收率为66．72％，纯度约为80．42％。纯化的IL-10对外周血单核细胞分泌TNF-α具有抑制作用。结论已成功表达并纯化了重组IL-10蛋白。

中国生物制品学杂志临床观察

儿童呼吸道感染军团菌抗体的检测388-388

摘要：目前已发现军团菌属有42个种，64个血清型，其中至少有19个种与人类疾病有关。与人类关系最密切的为嗜肺军团菌种（L．pneumophile，Lp），已发现有15个血清型。除印外，非嗜肺军团菌中与人类疾病关系最密切的为米克戴德军团菌（L．micdadei，Lm）。为了解本地区儿童呼吸道军团菌感染情况，应用血试管凝集试验（TAT）对77名住院呼吸道感染患儿进行军团菌印1．6型、Lm血清学检测，现将结果报道如下。

中国生物制品学杂志基础研究

1名Am亚型患者的血型血清学鉴定及输血策略389-390

摘要：目的对Am亚型患者的血型进行血清学鉴定，并为其输血选择适合的血液成分。方法对1名ABO正反定型不相符患者，用抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H单抗检测红细胞ABH抗原；A、B、O型红细胞与血浆反应检测ABO血型抗体及不规则抗体；吸收放散试验检测红细胞弱抗原；中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。根据患者血型血清学检测结果，选择相容血液成分进行输血。结果该患者符合Am亚型的血型血清学特征，输入O型少白细胞红细胞6U，A型单采血小板1治疗量后，均能达到预期疗效，无不良反应。输血后3个月的血型血清学检测结果与输血前完全一致。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型，可避免将Am亚型误定为O型，对Am亚型的准确鉴定有赖于多种血型血清学试验。Am亚型患者输血时可选择O型红细胞、A型血小板、A型或AB型血浆。

中国生物制品学杂志预防制品

结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答391-394

摘要：目的检测结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫和体液免疫应答水平。方法将BALB／c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水（Ns）组，分别进行免疫，免疫8周后处死小鼠，分离血清，EIJSA间接法测定血清特异性抗PPDISG抗体的水平，流式细胞分析仪检测脾脏T淋巴细胞亚群的变化。脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后，MTY法检测脾淋巴细胞的刺激指数，ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4的水平。结果H37Ra免疫小鼠血清中抗PPDIgG抗体、脾脏CD3^＋T细胞和CD4^＋T细胞的百分率、脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组，但与BCG组差异无显著意义。各组间脾脏CD8^＋T细胞、CD4^＋T／CD8^＋T比值差异均无显著意义。结论H37Ra免疫小鼠后，可以产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答，有望成为结核疫苗的候选抗原。

二乙烯亚胺灭活流感病毒的效果观察395-397

摘要：目的观察二乙烯亚胺（BEI）对流感病毒的灭活效果。方法分别使用甲醛和BEI对流感病毒进行灭活试验，通过血凝试验检测二者灭活效果，并确定各自最佳灭活时间。用灭活的病毒液免疫小鼠，检测其抗原性，并用RT-PCR方法分析灭活病毒基因组的完整性。以裂解剂Triton X-100裂解病毒后，分别加入甲醛和BEI灭活，采用单向免疫扩散法检测灭活不同时间病毒液的HA含量。结果BEI灭活36h可将病毒完全灭活；BEI灭活的病毒免疫小鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体；BEI灭活病毒液经RT-PCR，不能扩增出病毒基因；BEI灭活病毒的HA平均含量比甲醛灭活病毒的HA平均含量略高。结论BEI在灭活流感病毒感染性的同时，能够灭活病毒基因，并较好地保持病毒的抗原性。

弓形虫STAg不同接种途径免疫小鼠诱导的免疫应答398-400

摘要：目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）经滴鼻、灌胃和皮下注射3种途径免疫小鼠诱导的免疫应答。方法5-6周龄BALB／c小鼠32只，随机分为4组，分别以20μgSTAg滴鼻、灌胃或皮下注射免疫小鼠2次，间隔2周，对照组不作处理。末次免疫后14d脱颈椎处死小鼠，分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞（IELs）并计数，ELISA法测定血清、肠冲洗液中的弓形虫特异性抗体。结果滴鼻组和皮下注射组的脾淋巴细胞数量高于灌胃组和对照组，灌胃组与对照组相近。滴鼻组的IELs数量高于皮下注射组、灌胃组和对照组，皮下注射组和灌胃组与对照组一致。皮下注射组的血清IgG水平高于滴鼻组、灌胃组和对照组，滴鼻组略高于灌胃组和对照组，但差异无显著意义。滴鼻组的小肠冲洗液sIgA水平高于皮下注射组、灌胃组和对照组，皮下注射注射组和灌胃组略高于对照组，差异无显著意义。结论20腭STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答优于灌胃和皮下注射；皮下注射免疫小鼠诱导的血清IgG抗体水平高于滴鼻和灌胃，但其未能诱导黏膜免疫应答。

HBsAg与GM-CSF基因双表达载体的构建及其免疫效果401-404

摘要：目的构建乙型肝炎表面抗原基因（HBsAg）与GM-CSF基因的双表达载体，提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点（IRES）基因克隆到质粒pVAXI多克隆位点，再将HBsAg基因和GM-CSF基因依次克隆到IRKS的上、下游多克隆位点处，构建双表达载体pHIG。将pHIG转染到COS-7细胞中，检测瞬时表达情况，并用双表达质粒pHIG免疫BALB／c小鼠，检测免疫后小鼠血清中抗-HBs及其脾脏T细胞表面CD4^＋、CD8^＋分子的数量。结果在转染pHIG质粒的COS-7细胞上清液中有HBsAg的表达，pHIG双表达质粒组比pVAX／HBs组抗体产生时间提前2周，抗体阳转率提高2倍，小鼠脾脏T细胞表面CD4^＋分子数量及CD4^＋／CD8^＋值均高于pVAX／HBs组。结论HBsAg与GM-CSF基因双表达质粒能引起小鼠特异性免疫应答，并可提高免疫效果。

中国生物制品学杂志消息

本刊被评为吉林省“全省双十佳期刊”404-404

中国生物制品学杂志治疗制品

抗人ICAM-1单链抗体表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达405-409

摘要：目的构建抗人细胞间黏附分子-1（ICAM-1）单链抗体（ScFv）的表达载体，并在大肠肝菌中表达。方法从分泌ICAM-1单抗的杂交瘤细胞中提取RNA，用RT-PCR扩增抗体VH和VL基因，重叠延伸PCR扩增人ICAM-1-ScFv基因，将其连接到pET-22b（＋）载体上，转化大肠杆菌BL2（DE3），IFIG诱导表达，表达产物纯化及复性后，检测特异性及活性。结果序列分析表明抗ICAM-1 ScFv基因全长为744bp，编码247个氨基酸，其中含357bp的vH基因片段和342bp的VL基因片段。表达蛋白以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的32％。经变性和复性后，纯度达80％以上，复性率达25％。Western blot和ELISA检测，ScFv均可与ICAM-1抗原特异性结合。细胞黏附试验表明ScFv能抑制ICAM-1与HSB2细胞间的黏附，其作用稍弱于亲本mAb。结论已成功构建了抗人ICAM-1的ScFv表达载体，其表达产物具有抗体特异性和活性。