中国生物制品学杂志

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中国生物制品学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

Chinese Journal of Biologicals

  • 22-1197/Q 国内刊号
  • 1004-5503 国际刊号
  • 0.55 影响因子
  • 1-3个月下单 审稿周期
中国生物制品学是中华预防医学会;长春生物制品研究所主办的一本学术期刊,主要刊载该领域内的原创性研究论文、综述和评论等。杂志于1988年创刊,目前已被国家图书馆馆藏、CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)等知名数据库收录,是国家卫生健康委员会主管的国家重点学术期刊之一。中国生物制品学在学术界享有很高的声誉和影响力,该期刊发表的文章具有较高的学术水平和实践价值,为读者提供更多的实践案例和行业信息,得到了广大读者的广泛关注和引用。
栏目设置:疫苗研究、基础研究、治疗制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、综述、专题报道

中国生物制品学 2006年第01期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究
融合表达IL-2和EGFP逆转录病毒载体的构建1-4

摘要:目的构建融合表达IL-2和EGFP报告基因的逆转录病毒载体。方法设计载体pRevTet—On和pEGFP—Cl的接头序列,经酶切连接重组为过渡载体pRevEGFP-Cl,同时对质粒pBV220-IL-2和pEGFP—Cl进行酶切,连接重组为过渡载体pEGFP—Cl—IL-2。分别酶切质粒pRevEGFP-Cl和pEGFP—Cl—IL-2,琼脂糖凝胶电泳回收目的片段IL-2,并将其连接到pRevEGFP—Cl的多克隆位点(MCS)中,转化至Ecoli DH5α进行扩增,提取质粒DNA获得重组体pRevEGFP—Cl—IL-2。结果经分析鉴定,所构建的重组载体pRevEGFP—Cl—IL-2完全正确。结论已成功地构建了融合表达IL-2和EGFP的逆转录病毒载体pRevEGFP-Cl—IL-2。

问号钩端螺旋体鞭毛相关基因flhA、flhB2和fliR的克隆及原核表达系统的构建5-7

摘要:目的克隆问号钩端螺旋体鞭毛相关基因flhA、flhB:和fliR,并构建其原核表达载体。方法按常规苯酚-氯仿法提取问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601侏基因组DNA,高保真PCR扩增flhA、flhB:和fliR基因片段,T—A克隆后测序,构建原核表达载体,采用SDS-PAGE和免疫印迹法检测目的融合蛋白的表达。结果问号钩体56601株flhA、flhB,和fliR基因扩增片段的核苷酸序列与报道的相应序列同源性分别为100%、99.9%和99.9%,氨基酸序列同源性分别为100%、99.8%和100%。所构建的重组原核表达系统在IPTG的诱导下,能有效地表达目的融合蛋白Trx-FlhA、Trx—FlhB:和Trx—FliR,产量约为细菌总蛋白的10%。结论已成功构建了问号钩端螺旋体鞭毛相关基因flhA、flhB:和fliR原核表达系统。

狗心脏中Ito相关钾离子通道表达分析8-11

摘要:目的探讨钾离子通道Kv4.3和Kv1.4在正常与心衰的心肌组织中的表达差别,为进一步阐明心衰的发病机理奠定基础。方法建立狗的心衰模型,用Western blot方法对正常与心衰的狗心肌组织中Kv4.3、Kv1.4及辅助亚基Mink的表达进行分析。结果在心衰时,Kv4.3表达有明显下降;Kv1.4表达有所上升,在心肌组织的不同部位,即外层和内层Kv1.4的表达明显不同;同时Mink的表达在心肌外层也有明显下降。结论心衰时,心肌组织中形成,Ito的钾离子通道Kv4.3和Kv1.4以及辅助亚基Mink的蛋白表达变化之间可能存在着一些相关性。

DNAzyme抑制H-ras基因表达的研究12-16

摘要:目的研究DNAzyme特异切割H—ras mRNA的效率。方法针对H—ras mRNA序列,设计并合成了7个10-23 DNAzyme,分别进行DNAzyme的细胞外酶切反应;通过荧光显微镜观察脂质体介导DNAzyme的转染效果,利用实时定量PCR、MTT法在细胞水平检测DNAzyme对H-ras基因表达的抑制。结果合成的7个10-23 DNAzyme均可以细胞外近生理条件下对H-ras mRNA进行有效切割。利用Lipofectamine^TM可将荧光标记的DNAzyme No.1转染Hep-2细胞。转染后DNAzyme在细胞核及细胞质内均存在,且在细胞质中多位于核周围。实时定量PCR检测,DNAzyme No.1在转染后24h及48h能显著降低Hep-2细胞中H-ras RNA的含量,从而抑制ras基因的表达。利用MTT检测到DNAzymeNo.1在转染Hep-2细胞24h及48h后对细胞增殖及分化均产生明显的抑制作用。结论DNAzyme在细胞内外均能够有效抑制H—ras基因的表达。

人脂联素球状结构域(gAd)基因的克隆、融合表达和纯化17-20

摘要:目的建立人脂联素球状结构域(gAd)融合组氨酸标签的原核高效表达体系,并分离纯化gAd。方法从淋巴细胞中提取人基因组DNA,PCR扩增出含有脂联素编码序列的片段,经T-A克隆入pMD18-T载体中,然后设计适当的引物,引入起始密码、C端连续6个组氨酸编码序列、终止密码以及相应的酶切位点,把脂联素球状结构域(gAd)基因亚克隆到表达载体pBV220,将序列鉴定正确的重组质粒转化人大肠杆菌DH5α中,用42℃温控诱导表达目的蛋白。结果在大肠杆菌中成功实现了gAd稳定高效表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量约占全菌蛋白的19%,用超声破菌,经金属离子(Ni^2+)配体亲和层析一步纯化得到了均一蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定得到了较高纯度的gAd。结论已成功表达了gAd融合蛋白,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础。

人内毒素结合肽基因的突变及突变体蛋白表达21-23

摘要:目的分析亲代人内毒索结合肽一级结构,选择可能影响其生物学活性的氨基酸对应碱基位点进行突变,克隆基因突变体mEBP基因并研究其蛋白表达。方法以亲代EBP基因为基础,结合DNASIS软件理化性质分析确定突变碱基,应用PCR定点诱变技术进行第5、18位谷氩酰胺→赖氩酸的定点突变。并将其克隆至原核融合表达载体pinpoint Xa-3,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS进行表达,经Westernblot鉴定。结果突变EBP基因13及52位核苷酸由C突变为A,构建的阳性重组子经酶切及测序鉴定证实与设计序列完全一致,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达生物素化的融合蛋白,Westernblot鉴定显示能与抗生物索单克隆抗体结合。结论已成功获得EBP基因突变体,并在大肠杆菌以融合蛋白的形式进行表达。

HCV复合多表位基因真核表达载体的构建及在真核细胞中的表达24-27

摘要:目的建立丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位基因的真核表达载体,并在COS7细胞中瞬时表达。方法用PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段;分别合成HCV E2区模拟表位和NS3-NS57个T或Th细胞表位基因;PCR方法将羧基端部分缺失的HCV核心区基因与合成的表位基因串联,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),并通过脂质体瞬时转染COS7细胞。结果所构建的真核表达载体pcDNA.3.1(-)-CtEm已成功转染COS7,间接免疫荧光和RT-PCR证实,pcDNA3.1(-)-CtEm可在COS7中表达复合多表位基因。结论已成功构建HCV复合多表位基因的真核表达载体,并在COS7细胞中瞬时表达,为进一步复合多表位的基因免疫奠定基础。

应用载体介导的RNAi技术抑制HBsAg在重组CHO细胞中的表达28-30

摘要:目的应用载体介导的RNA干扰技术,特异地干扰重组CHO细胞中乙型肝炎病毒s基因的表达。方法设计两段靶向HBVs基因的特异性siRNA,合成两对64nt寡核苷酸,插入载体H1启动子下游,构建表达干扰性发夹状RNA(Short hairpin RNA,shRNA)的载体pHs-9和pHs-170,转染重组CHO细胞(该CHO细胞整合了HBVs基因,可稳定表达s抗原),用ELISA法检测HBsAg的表达。结果pHs-9和pHs-170转染重组CHO细胞后24—120h,在细胞培养上清中检测到HBsAg表达降低,抑制率均达到70%左右。结论pHs-9和pHs-170已成功地表达了发夹状siRNA,并抑制了重组CHO细胞中HBsAg的表达。

我国狂犬病疫苗生产用毒株糖蛋白氨基酸序列及其抗原位点分析31-33

摘要:目的分析我国狂犬病疫苗生产用毒株aG(PG)株和CTN株糖蛋白结构及抗原位点的差异。方法登录GenBank搜寻aG株和CTN株糖蛋白的氢基酸序列,用Vector NTI Suite8软件分析两毒株糖蛋白的同源性;用DNAStar5分析两毒株糖蛋白的二级结构和潜在的抗原位点。结果aG株和CTN株的糖蛋白氨基酸序列的同源性为88.2%,特征性二级结构的位置与数量相似,主要的抗原位点均为13个。结论两毒株的糖蛋白氨基酸序列虽然存在一定的差异,但生产的狂犬病疫苗均能产生较好的保护效果,提示某些表位是产生中和抗体的关键。

人体β-防御素-3突变基因的克隆及在大肠杆菌中的表达34-37

摘要:目的对人体β-防御素-3基因进行定点突变,并在Ecoli中表达。方法从人正常皮肤组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码β-防御素-3成熟肽的cDNA,测序正确后,设计含突变位点的引物,用PCR重叠延伸法对β-防御素-3成熟肽cDNA进行定点突变,将突变产物克隆至pUC18,并在E.coil中融合表达。结果测序结果表明,经RT-PCR所得的β-防御素-3成熟肽序列与GenBank中报道的序列完全一致。经过突变,β-防御素-3成熟肽第29位谷氩酰胺密码子由CAG突变为精氨酸密码子CGA,其余核苷酸序列均未发生变化。将突变β-防御素-3基因在E.coll中诱导表达后,可见突变β-防御素-3蛋白表达。结论已成功克隆并表达了β-防御素-3突变体基因。

乙肝病毒前S1基因与截短C基因穿梭表达载体构建38-40

摘要:目的构建HBV前S1基因和截短C基因分泌型大肠杆菌和分枝杆菌穿梭质粒。方法以含HBV基因组质粒pCPl0序列为模板,PCR扩增前S1基因和C基因截短片段,依次克隆至分泌型穿梭表达载体pDE22,电穿孔转化法将重组质粒导入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选及PCR鉴定,阳性克隆热休克诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析。结果扩增到了预期长度的2个目的基因,构建了分泌型穿梭载体。SDS-PAGE分析可见相对分子质量约23000蛋白表达条带。结论已成功构建耻垢分枝杆菌分泌表达前S1基因和截短C基因的穿梭载体。为研究含前S基因和截短C基因的重组BCG疫苗奠定了基础。

重组降血压肽在大肠杆菌中的高效表达41-43

摘要:目的获得具有高活性的重组降血压多肽。方法人工合成高活性降血压肽单体,经酶切位点串联,克隆至表达载体,并转化宿主菌BL21进行诱导表达。结果经酶切、PCR和测序均证明,串联的基因ACEIP已成功克隆至pGEX-4T-2表达载体中,融合蛋白GST-ACEIP的表达水平达24.6%,表达产物的融合蛋白和多肽含量分别为1.1g,/L和0.14g/L,其抑制活性达85%。结论已成功制备出高活性的重组降血压多肽,为进一步开发降血压药物奠定基础。

中国生物制品学杂志预防制品
不同载体蛋白制备的A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性比较44-48

摘要:目的比较不同载体蛋白(TT、DT和rEPA)制备的A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)结合物的免疫原性。方法采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)为连接剂,1-乙基-1-3-(3-二甲基氨基-丙基)-碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂,制各结合物并免疫小鼠,检测小鼠血清中抗GAMP与抗载体蛋白抗体及抗CAMP抗体的杀菌活性。结果多糖衍生物、多糖-蛋白质结合物均具有CAMP抗原特异性;结合物免疫小鼠可诱生较单独多糖更高水平的血清抗GAMP IgC抗体和更强的体外杀菌活性,并能产生免疫记忆。结论3种载体蛋白制备的结合物均能提高多糖抗原的免疫原性。

蛋白对HCV/HBVDNA疫苗的免疫增强作用49-51

摘要:目的探讨蛋白对HCV/HBVDNA疫苗的免疫增强作用。方法将构建的HCV/HBV真核表达载体pcDNA—PCXS和蛋白分别免疫BALB/c小鼠,用ELISA的方法检测抗-HBs和抗-HCV Ab;^3H—TdR掺入法检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖;^51Cr释放法检测免疫小鼠特异性CTLs杀伤作用。结果DNA-蛋白组抗-HBs和抗-HCV抗体均较DNA组出现早,且抗体水平明显高,DNA-蛋白组的CTL应答水平也明显高于DNA组。结论蛋白能提高DNA疫苗的特异性体液和细胞免疫功能。为DNA疫苗的实际应用提供了一种新的策略。

Vero细胞森林脑炎疫苗毒种的选育及其生物学特性检测52-53

摘要:目的选育Vero细胞森林脑炎疫苗适应毒种。方法将森林脑炎疫苗鼠脑病毒“森张”株在Vero细胞上连续传代适应,并对不同代次收获的病毒液的病毒滴度、免疫原性、稳定性等进行检测。结果“森张”株病毒在Vero细胞上传代适应后,病毒滴度达8.5LgLD50/ml;免疫血清中和抗体效价高于1:20,其它检测项目均符合疫苗生产用毒种的要求。结论Vero细胞适应的“森张”株毒种的初步特性显示可作为制备Vero细胞森林脑炎疫苗用毒种。

中国生物制品学杂志治疗制品
重组人抗HBs-Fab抗体的纯化及结构分析54-57

摘要:目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱。结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上。Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7.6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50494,比其理论值约多2579.35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上。胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确。结论已建立了重组人抗HBs—Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确。

重组人干扰素α2b栓剂的检定及其临床疗效58-59

摘要:目的对重组人干扰素α2b栓剂进行质量检定及临床疗效观察。方法连续试制3批样品,进行各项质控指标的检定及宫颈糜烂的临床疗效观察。结果本品各项检定指标均符合质量要求。治疗组宫颈糜烂的有效率为74.8%,对照组的有效率为60.0%。治疗组和对照组的副反应发生率分别为9.1%和8.3%。结论重组人干扰素α2b栓剂质量稳定,安全性好,疗效确切。

鸡卵黄乙肝病毒特异性转移因子的制备及鉴定60-63

摘要:目的制备鸡卵黄乙肝病毒特异性转移因子(EYHBV-TF),并检测其免疫活性。方法用乙肝疫苗免疫母鸡,收集鸡蛋,取卵黄进行透析,制备EYHBV-TF,参照药典要求,采用光谱法、高效液相色谱法(HPLC)、Lowry法等检测其理化性质。采用白细胞粘附抑制法(LAI)和迟发型皮肤超敏试验(DTH)检测特异免疫活性。结果EYHBV-TF是一种可透析、含有18种氨基酸、相对分子质量小于12000的小分子物质,其多肽含量为1.2mg/ml,核糖含量为152.94μg/ml,pH6.9±0.5,蛋白反应阴性,最大紫外吸收光谱在270nm处。该EYHBV-TF能明显抑制小鼠白细胞粘附(P〈0.01),并能诱导小鼠跖趾部皮肤的迟发型超敏反应(P〈0.01),与猪脾淋巴细胞制取的乙肝特异性转移因子(PSHBV-TF)检测结果接近(P〉0.05)。而正常卵黄提取液组、非特异性转移因子和甲肝抗原(HAAg)对照组均不能表现出这两种效应(P〉0.05)。结论EYHBV与PSHBV-TF主要理化性质和作用相类似,均具有乙肝抗原特异性细胞免疫活性。