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中国生物制品学 2005年第04期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

中国人MBL基因编码区的克隆与原核表达273-276

摘要：目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达.方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上.诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性.结果克隆得到长747 bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上.重组MBL相对分子质量约为36 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上.ELISA检测显示重组MBL A490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性.结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性.

目前收录《中国生物制品学杂志》的数据库276-276

TRAIL与导向肽融合基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性277-280

摘要：目的获得具有生物学活性的与导向肽融合表达的重组TRAIL蛋白,提高TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用.方法构建TRAIL与导向多肽PEPHC1的融合基因,克隆入质粒pGEM-3zf(-)中进行测序,序列正确后,亚克隆人表达载体pBV220中,转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达.结果42℃诱导4 h,融合基因得到了表达,SDS-PAGE表明目的蛋白占菌体总蛋白的15%以上,以包涵体形式存在.经包涵体洗涤、变性、复性,并经离子交换层析柱纯化后可得到融合蛋白PE-TRAIL,经体外试验证明具有生物学活性.结论成功克隆并表达了具有生物学活性的与导向肽融合表达的重组TRAIL蛋白.

狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3区缺失转移表达载体的构建及表达281-283

摘要：目的构建狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3缺失转移表达载体,并在MDCK细胞系统中高效表达.方法将含狂犬病毒SRV9株糖蛋白(Rgp)cDNA的pGT载体,经双酶切后回收Rgp基因片段,与经双酶切的真核表达载体pIRES1neo连接,得到pIRES1Rgap,再经双酶切后回收2 623 bp片段,与E3缺失载体pBE3L连接,得到含狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3缺失转移表达载体pBE3LCRgp,再转染MDCK细胞.结果pBE3LCRgp转染的MDCK细胞,经间接ELISA和间接免疫荧光法在其培养上清中均能检出Rgp的高效表达.结论已成功构建狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3缺失转移表达载体,并在MDCK细胞中高效表达.

人甲状旁腺素N-端34肽基因的合成、克隆和融合表达284-287

摘要：目的构建重组人甲状旁腺素N-端34(PTH34)肽的大肠杆菌融合表达菌株,并对其表达产物进行检测.方法选用大肠杆菌偏爱密码子,设计优化的人甲状旁腺素N-端34肽基因序列,通过6个DN段分段合成、片段连接、PCR扩增,经TA克隆到pMD18载体中,经测序验证,构建GST融合表达载体.结果经SDS-PAGE检测PTH(1-34)肽与GST蛋白的融合表达,经Western blot分析具有免疫活性,通过GST亲和层析和Xa因子酶切,利用小分子蛋白电泳可检测到PTH(1-34)肽.结论已获得了能表达GST-PTH(1-34)融合蛋白的菌株.表达产物具有免疫活性,且能被Xa因子消化得到PTH(1-34)肽.

《免疫接种不良反应300例》征订启事287-287

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析288-290

摘要：目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性.方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性.结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Western blot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性.结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础.

人蛋白C转基因小鼠的建立及乳腺表达291-293

摘要：目的为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物.方法采用分步克隆的方法,构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC.将该质粒系统鉴定后,用PvuⅠ+SmaⅠ双酶切,回收4.6kb的片段(WAP-hPC-PolyA).通过显微注射技术,将其注入昆明小鼠受精卵雄原核内;共注受精卵810枚,存活640枚,移植给28只假孕母鼠,怀孕的18只母鼠共产仔81只.结果提取鼠尾基因组DNA进行PCR检测,34只阳性,再经Southern blot检测,其中20只整合阳性;将7只整合阳性母鼠传代,产仔7日后收集乳汁,进行ELJSA检测,结果均有表达.结论已成功建立了人蛋白C转基因鼠乳腺生物反应器,为hPC乳腺表达研究奠定了基础.

重组人蛋白C在HEK293细胞中的表达与鉴定294-296

摘要：目的获得转染人蛋白C cDNA的工程细胞株，实现重组蛋白C的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES—hPC用脂质体介导的方法转染HEK293细胞，经G418加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株，收集无血清培养上清，浓缩后进行鉴定。结果经G418筛选得到了21株克隆化细胞，SDS-PAGE和Western blot鉴定表明，表达产物含有人蛋白C，且具有抗凝活性。结论在哺乳动物细胞中已成功表达重组人蛋白C，为进一步深入研究及产业化奠定了基础。

重组人干扰素βSer^17的结构及活性分析297-299

摘要：目的分析大肠杆菌表达的重组人干扰素βSer17(rhIFN-Ser17)的分子结构及其生物学活性.方法通过Western blot、氨基酸末端测序、质谱及生物学活性分析等,对大肠杆菌表达的rhIFN-Ser17分子进行鉴定.结果大肠杆菌表达的rhIFN-βser17的N末端20个氨基酸及C端2个氨基酸序列与文献报道一致,产物的相对分子质量为19 877.9,比活性超过2×107 IU/mg蛋白.结论大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17分子结构与理论推测值完全一致.

生物信息学方法筛选华支睾吸虫成虫功能基因——钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白300-302

摘要：目的本文通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库,筛选其功能基因.方法应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库,进行大量EST测序,然后应用生物信息学方法将EST序列与GenBank中登陆的序列进行同源性比对、序列拼接及基因完整性判断;并应用NCBI上的RPSBLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein分析、预测其功能域及二级结构.结果从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选的钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白(CsCBLP)基因,经同源性分析,CsCBLP与褐家鼠钙调神经磷酸酶(CaN)同源性为53%,与尾刺耐格里原虫CaN B同源性为40%,与新小杆线虫属结合蛋白的同源性为51%;保守域的比对及功能域、二级结构的预测显示所筛选的CsCBLP是钙调神经磷酸酶B亚基的的类似物,属于钙结合蛋白家族.结论应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因.

《免疫接种的反应和处理》征订启事302-302

抗人膀胱癌抗独特型抗体诱导特异性迟发过敏反应的研究303-304

摘要：目的研究对抗人膀胱癌抗独特型抗体(BC2)诱导的特异性迟发过敏反应(DTH).方法经过BC2免疫的小鼠,用膀胱癌细胞系进行脚掌注射攻击后,测定脚掌水肿厚度判定DTH反应强度,并进行病理学检查.结果BC2诱导的DTH平均水肿厚度为0.95mm,与膀胱癌组织抗原组比较差异无显著意义(P＞0.05);免疫鼠对胃癌细胞攻击呈阴性反应;BC2诱导的病变内可见大量炎性细胞,呈弥漫性浸润.结论BC2具有抗原模拟作用,可诱导特异性的DTH反应,可能成为膀胱癌防治的新途径.

中国生物制品学杂志预防制品

泌尿道致病性大肠埃希菌PapG重组蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用305-307

摘要：目的探讨泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用.方法纯化蛋白按一定程序免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫后第7天用UPEC临床分离株进行尿道上行攻击;攻击后第5天检测尿液和肾脏培养菌,同时测定血清抗体效价.结果经GST-PapG重组蛋白和GST纯化蛋白免疫的小鼠体内均产生了相应的抗体,而仅经重组蛋白免疫的小鼠具有一定的抵抗毒株上行感染的能力,表现为肾脏培养菌量均明显减少.结论 PapG粘附素与GST构成的重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染具有一定的免疫保护作用.

白细胞介素-2基因佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响308-310

摘要：目的研究白细胞介素-2基因佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响.方法利用分子生物学技术构建含IL-2基因的重组质粒pcDNA3.1/IL-2,经测序鉴定、碱裂解法大量提取及Sepharose 4FF柱层析纯化,得到重组质粒pcDNA3.1/IL-2和pcDNA3.1/S,免疫豚鼠后,经ELISA检测豚鼠血清中抗HBsAg滴度,CTLL-2细胞株/MTT法检测IL-2活性.结果序列测定和分析结果表明重组质粒pcDNA3.1/IL-2构建正确.血清中抗HBsAg抗体滴度:铝佐剂+HBsAg组为2 116 mIU;IL-2+HBsAg组为1 987 mIU;质粒pcDNA3.1/IL-2+HBsAg组为2 252 mIU;质粒pcDNA3.1+IL-2+pcDNA3.1/S组为67.19 mIU;质粒pcDNA3.1/S组为50.88 mIU.重组质粒pcDNA3.1/IL-2免疫1周后,IL-2表达水平达高峰,以后逐渐降低,但1个月后IL-2水平仍高于空白对照组.对抗HBsAg抗体滴度和IL-2活性的检测结果进行统计学分析表明,各组间差异有显著意义(P＜0.05).结论 IL-2基因佐剂可以增强乙肝重组疫苗和乙肝DNA疫苗的免疫效果.

小鼠接种重组乙型肝炎疫苗引起的细胞因子释放反应311-312

摘要：目的观察小鼠接种重组乙型肝炎疫苗(rHB)后,脾T淋巴细胞释放细胞因子的免疫反应.方法80只BALB/c小鼠随机分为4组,1组小鼠接种5 μg佐剂,2、3、4组小鼠分别腹腔接种0.65、1.25和5.0μg的rHB,其中一半小鼠2周后加强免疫1次.分别在初次免疫后4周和加强免疫后2周,分离小鼠脾T淋巴细胞,体外用rHB刺激,检测释放IL-2及IFN-γ的水平.结果单次免疫后和加强免疫后各组IL-2和IFN-γ均显著升高,且有随剂量增加而升高的趋势.结论小鼠接种rHB后,脾T淋巴细胞分泌IL-2及IFN-γ显著增加,并与接种剂量密切相关.

东北三省及内蒙古自治区第二届微生物学术研讨会会议通知312-312

中国生物制品学杂志治疗制品

利用HCV多表位复合抗原制备高效价抗体313-315

摘要：目的利用HCV多表位复合抗原免疫家兔制备高效价抗HCV多克隆抗体,为改进丙型肝炎病毒抗原的诊断试剂盒提供必要条件.方法HCV多表位复合抗原与完全弗氏佐剂混合免疫家兔,获得高效价抗血清,经硫酸铵沉淀及PrintA/G亲和层析纯化.结果已获得效价大于1:16 000的抗HCV多克隆抗血清,经纯化后达电泳纯.该抗体能与HCV NS3、NS5及C抗原特异性结合.结论HCV多表位复合抗原具有较好的免疫原性,可用于改进HCV病毒抗原诊断试剂.