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中国生物制品学 2005年第01期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析1-4

摘要：目的从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子,并进行基因序列分析.方法采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原,对自建的4×105Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析.结果共挑选了60个单克隆菌株,其中噬菌体ELISA阳性有27个,阳性率为45%;PCR鉴定均为相应大小片段;限制性内切酶鉴定表明27个阳性克隆菌中有13个具有约1 500 bp的片段,其余均为约750 bp大小;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同;选取5个含约1 500 bp片段和2个含约750 bp片段的克隆菌株,经测序均为人免疫球蛋白基因,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族,轻链分别属于L5、L6、L8和012/02家族.结论从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子.表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性.

人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立5-8

摘要：目的构建人纤溶酶原饼环区5(hPK-5)蛋白原核表达载体,并进行表达和鉴定,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK-5蛋白奠定基础.方法以纤溶酶原cDNA为模板,PCR扩增hPK-5基因,经酶切后构建表达载体pBV220/hPK-5,转入大肠杆菌JM109进行温控诱导表达,表达产物经纯化、复性后,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的生物学活性.结果带有pBV220/hPK-5的大肠杆菌表达的目的蛋白占菌体总蛋白的34.8%,其表达蛋白具有His-tag抗原活性和野生活性.结论已成功构建了pBV220/hPK-5重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.

HIV-2 Gp105基因重组鸡痘病毒的构建及鉴定9-11

摘要：目的研制预防HIV-2的重组鸡痘病毒活载体疫苗.方法将HIV-2Gp105基因插入鸡痘病毒转移载体pUTA2复合启动子的下游,构建鸡痘病毒转移载体pUTA2-Gp105.将该重组质粒与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.通过3次BrdU加压筛选,以PCR、RT-PCR、IFA和Western blot鉴定重组病毒.结果从重组鸡痘病毒的基因组和总RNA中能扩增出大小为653 bp的目的基因;感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应;表达产物与人HIV-2血清发生阳性反应,目的蛋白相对分子质量约为105 000.结论成功获得1株重组鸡痘病毒,可正确表达HIV-2 Gp105基因.

弓形虫信号转导蛋白14-3-3的高效表达及免疫学诊断的初探12-15

摘要：目的构建弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的重组质粒,并在E.coli中高效表达,用于免疫学诊断.方法以限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGEM-T/Toxo-14-3-3,获得弓形虫信号转导蛋白14-3-3编码基因片段,插入载体pET28a,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,在非变性条件下纯化融合的表达产物,通过Westernblot和ELISA检测其特异的免疫反应性.结果所构建的弓形虫信号转导蛋白14-3-3(rToxo-14-3-3)在原核系统中的重组表达质粒,以6个His融合蛋白的形式得到高效表达,其表达量占细菌裂解液中总蛋白量的49.2%.该重组抗原经纯化能被弓形虫感染的人血清所识别.用rToxo-14-3-3作为抗原,ELISA检测弓形虫病具有高度的敏感性和特异性.结论rToxo-14-3-3在大肠杆菌中已得到高效表达,该重组抗原能有效检测弓形虫的感染,可用于弓形虫病诊断试剂盒的研制.

人乳头瘤病毒16型L1 N-端主要抗原基因的原核表达16-18

摘要：目的获得序列正确的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1 N-端主要抗原基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达.方法采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1 N-端主要基因重组表达质粒,转化E.coli DH5α,42℃诱导表达,Western blot分析表达产物.结果获得了序列正确的人乳头瘤病毒HPV16型L1 N-端主要基因,相对分子质量约为51 000.表达蛋白能与乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论已成功构建HPV16型L1 N-端主要基因表达载体,并获得有效表达.

重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测19-22

摘要：目的建立人肝细胞生长因子α链(rhHGFα)高效原核表达体系.方法以pRC/CMV-hHGF为模板,扩增hHGFα cDNA,继以XhoI酶切为386和954 bp 2个片段,亚克隆入pBSKS,DNA测序后,将上述两个片段与pBV220连接,构建重组质粒.转化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),筛选高效表达菌株.分离包涵体,8 mol/L尿素溶解,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白,经MTT法检测活性.结果所克隆的hHGFα基因序列正确,筛选出高效表达菌株BY,经SDS-PAGE显示在相对分子质量52 000处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的25%.表达产物以不溶性的包涵体(IBs)形式存在,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用.结论已成功表达了rhHGFα蛋白,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础.

中国生物制品学杂志实验技术

FQ-PCR试剂质量评估方法的建立及评价22-22

摘要：本文介绍一种简捷、实用的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂质检评估方法,具体方法是随机选择不同品牌HBV DNA的FQ-PCR试剂,分别将其编为a、b和c.

中国生物制品学杂志基础研究

神经细胞黏附分子样蛋白对小鼠NK细胞活性的影响23-25

摘要：目的研究神经细胞黏附分子样蛋白对小鼠NK细胞活性的影响.方法将神经细胞粘附分子样蛋白的编码基因连接在补体C3d基因的下游,构建融合基因,再将此融合基因克隆入真核细胞表达质粒.用此重组质粒免疫小鼠,检测小鼠体内的抗体和NK细胞的活性.结果小鼠体内产生了神经细胞粘附分子样蛋白的特异性抗体,而且小鼠脾细胞的NK活性增强.结论神经细胞粘附分子样蛋白可能具有抑制NK细胞的活性,在被特异性抗体识别和结合后,这种抑制作用减弱或消失.

呋喃唑酮抑制Wistar大鼠精子细胞生成的研究26-28

摘要：目的探讨呋喃唑酮(NFZ)对成年雄性大鼠生精细胞的抑制作用及其副作用.方法以Wistar大鼠为模型,灌胃法给药,采用组织切片及生物化学方法进行分析.结果一定剂量的NFZ可以特异性抑制成年大鼠的精子细胞生成,而对睾丸的基本结构无损害,对其它脏器无伤害.此种抑制生精作用为可逆性,停药后较短时间即可恢复正常生育,子育正常.结论呋喃唑酮有可能作为男性避孕药.

中国生物制品学杂志治疗制品

利用DNA改组筛选高活性抗凝血酶Ⅲ29-32

摘要：目的利用DNA改组技术大幅度提高抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的生物活性.方法采用RQ1 DNase Ⅰ不完全酶解ST-Ⅲ基因,产生长度为50～100 bp的随机片段,用低熔点胶回收.无引物PCR从小片段组装成大片段,通过有引物PCR得到正确大小的片段.线性化的质粒通过电转转入毕赤酵母GS115细胞.结果获得了5株高活性的克隆.结论探索了在毕赤酶母进行DNA改组和筛选的方法和路线,成功进行了AT-Ⅲ的改组,并为其它分子的改组提供借鉴.

人组织激肽释放酶成熟蛋白的纯化及活性分析33-35

摘要：目的制备纯化人组织激肽释放酶,并检测其生物活性,为中试放大及纯化工艺奠定基础.方法使用麦芽糖(MBP)融合分泌载体pMBP-P,构建并筛选出1株工程菌株,在6L培养基中经IPIG诱导表达人组织激肽释放酶融合蛋白.目的蛋白经亲和层析纯化及凝血酶切割后,采用电位滴度法测定其活力.结果筛选出的工程菌株表达相对分子质量约70000的激肽释放酶融合蛋白,大小与预计大小相符.纯化后共获得28 mg蛋白,并具有水解苯甲酰精胺酸乙酯(BAEE)的能力.结论成功进行了人组织激肽释放酶融合成熟蛋白的小量制备,经纯化后的产物具有生物活性,为中试放大、纯化工艺研究奠定了基础.

卡介菌基因组DNA制备工艺研究36-38

摘要：目的摸索制备高纯度卡介菌(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin,BCG)基因组DNA(BCG-DNA)的制备工艺.方法采用超声破碎结核杆菌,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白,进一步经蛋白酶消化,乙醇沉淀DNA组分,再经离子交换和凝胶过滤层析,去除残余菌体蛋白和多糖,精制DNA,并进行质量检测.结果所制备的BCG-DN段大小介于200～250 bp之间,纯度大于95%,蛋白含量占0.1%,多糖残留占3.5%.结论此方法制备的BCG-DNA纯度较高,且无有机溶剂残留,适用于BCG-DNA制备.

高效价特异性HER2ME抗体的制备及鉴定39-40

摘要：目的制备高特异性HER2ME(Multi-epitope of human epidermis growth factor receptor 2)抗体.方法将表达HER2ME基因的pcDNA3质粒与CpG混合免疫C57小鼠.结果得到了HER2ME蛋白特异性抗血清.该血清与普通蛋白抗原免疫产生的血清相比,抗体特异性极高.未经纯化进行免疫印迹实验,显示出高度特异性.结论表达质粒与CpG混合免疫可简单快速获得高特异性HER2ME抗体.

A、B、E、F型肉毒抗毒素的制备与检定41-44

《中国生物制品学杂志》广告征订44-44

中国生物制品学杂志预防制品

双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性45-47

摘要：目的研究双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性.方法将福氏2a O-SP-rEPA结合疫苗和宋内氏O-SP-rEPA结合疫苗混合制备成双价痢疾结合疫苗,对该双价结合疫苗的安全性及免疫原性与痢疾单价结合疫苗进行比较.结果双价痢疾结合疫苗安全可靠,在4℃放置0月、6月、12月与单价结合疫苗相比,小鼠血清抗体应答水平差异无显著性意义.结论混合后没有改变两个单价结合疫苗的特性,且稳定性良好,可预防福氏2a、宋内氏痢疾菌所引起的感染.

关于统计学符号规范化要求47-47

中国生物制品学杂志实验技术

聚乙二醇化重组人干扰素α2b的质量检测48-50

摘要：目的建立聚乙二醇化重组人干扰索α2b(PEG-rhIFNα2b)的质量检测方法.方法采用Wish细胞-VSV病毒系统,以CPE法测定干扰素的生物学活性,基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法测定相对分子质量,反向高效液相法(RP-HPLC)测定纯度,溴化氰裂解-SDS-PAGE法测定肽图,等电聚焦电泳法测定等电点,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱.结果聚乙二醇化重组人干扰素α2b的比活为6.0×106～10.0×106 IU/mg蛋白,相对分子质量约为62 600,等电点在5.20～6.55之间,紫外最大吸收峰约在278 nm波长处.结论所建立的检测方法可控制聚乙二醇化重组人干扰素α2b质量.