摘要:对重组酵母PP-NP^m-8的植酸酶phyA^m基因进行PCR介导的定点突变,即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸(F43Y),将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F),得到了2个突变体PP-NP^m-1(F43Y)及PP-NP^m-2(I354M,L358F)。含突变基因的重组表达载体pPIC9k-phyA^m-1,pPIC9k-phyA^m-2在毕赤酵母GS115中表达,对表达产物进行酶活性测定及热稳定性检测。结果表明:突变体PP-NP^m-1最适反应温度比未突变体PP-NP^m-8上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高15%,比活力提高11%;PP-NP^m-2最适反应温度未改变,热稳定性比PP-NP^m-8仅提高3%,比活力降低6.5%。对突变前后的植酸酶空间结构进行比较预测,发现突变氨基酸Tyr43与空间位置相邻的Asn416之间形成氢键,增强了酶的热稳定性。
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