F43Y及I354M,L358F定点突变对植酸酶热稳定性及酶活性的改善

作者:陈惠; 王红宁; 杨婉身; 赵海霞; 吴琦; 单志

摘要:对重组酵母PP-NP^m-8的植酸酶phyA^m基因进行PCR介导的定点突变,即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸(F43Y),将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F),得到了2个突变体PP-NP^m-1(F43Y)及PP-NP^m-2(I354M,L358F)。含突变基因的重组表达载体pPIC9k-phyA^m-1,pPIC9k-phyA^m-2在毕赤酵母GS115中表达,对表达产物进行酶活性测定及热稳定性检测。结果表明:突变体PP-NP^m-1最适反应温度比未突变体PP-NP^m-8上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高15%,比活力提高11%;PP-NP^m-2最适反应温度未改变,热稳定性比PP-NP^m-8仅提高3%,比活力降低6.5%。对突变前后的植酸酶空间结构进行比较预测,发现突变氨基酸Tyr43与空间位置相邻的Asn416之间形成氢键,增强了酶的热稳定性。

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关键词:
  • 植酸酶
  • phya基因
  • 定点突变
  • 毕赤酵母
  • 热稳定性

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期刊名称:中国生物化学与分子生物学报

期刊级别:北大期刊

期刊人气:1463

杂志介绍:
主管单位:中国科学技术协会
主办单位:中国生物化学与分子生物学会;北京大学
出版地方:北京
快捷分类:生物
国际刊号:1007-7626
国内刊号:11-3870/Q
邮发代号:82-312
创刊时间:1985
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
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综合影响因子:0.99