烟蚜茧蜂脂代谢相关的滞育相关蛋白差异表达分析
摘要：利用滞育特性可显著延长烟蚜茧蜂扩繁产品的货架期,探究烟蚜茧蜂滞育相关蛋白的表达特点,可促进对天敌昆虫滞育机理的了解。本文利用以i TRAQ为核心的蛋白定量技术,对提取的烟蚜茧蜂全蛋白进行酶解、标记、质谱检测、查库鉴定及定量分析,并结合生物信息学对烟蚜茧蜂滞育前期和滞育期的差异蛋白进行分析。定量鉴定蛋白1268个,其中滞育组差异表达蛋白601个,上调表达蛋白278个,鉴定肽段物种主要集中在膜翅目,占56.5%;下调表达蛋白323个,鉴定肽段物种主要集中在双翅目,占52.9%。对差异表达倍数分析发现,滞育烟蚜茧蜂有4个上调表达8倍以上的蛋白与脂代谢相关：脂质运载/胞质脂肪酸结合蛋白（gi_322794737）、C型凝集素（gi_607305114）、肽基脯氨酰顺反异构酶（W4X351_ATTCE）、芳基贮存蛋白α亚基（gi_332018934）。i TRAQ技术结合LC-MS/MS作为一种快速准确的定量蛋白质组学研究方法,能有效地分析烟蚜茧蜂滞育相关蛋白;烟蚜茧蜂滞育相关蛋白差异表达较为复杂,可针对上调表达倍数高的蛋白进行后续功能分析,深入开展昆虫滞育机理研究。绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP8的结合特性分析
摘要：气味结合蛋白（odorant binding proteins,OBPs）是参与昆虫嗅觉感知过程的一类重要蛋白,其功能之一是结合运输外界气味分子通过淋巴液到达神经元树突。本文克隆了一个绿盲蝽Apolygus lucorum（Meyer-Dür）气味结合蛋白Aluc OBP8（Gen Bank登录号JQ675725）并进行了原核重组表达。组织表达谱分析表明,Aluc OBP8基因主要在雌雄成虫触角表达。采用荧光竞争结合试验,研究了重组蛋白Aluc OBP8与7种性信息素类似物和33种植物挥发物的结合能力。结果显示,7种性信息素类似物均不能与Aluc OBP8有效结合,而植物挥发物中只有葎草烯（α-caryophyllene）和十二醛（dodecyl aldehyde）与Aluc OBP8表现出较强的结合,结合常数分别为8.74和9.99μmol/L。绿盲蝽雌雄成虫对这两种化合物的趋向结果表明,十二醛对绿盲蝽雄成虫具有显著的驱避作用。初步推断Aluc OBP8为普通气味结合蛋白并参与寄主普通挥发气味的识别过程。昆虫病原真菌对梨网蝽防治潜力的室内评测
摘要：梨网蝽Stephanitis nashi是多种果树和园林植物上的重要害虫,在长江流域、华北地区为害严重。梨网蝽发生世代多,易产生抗药性,筛选出能替代化学农药的生物控制因子,是对梨网蝽实现有效可持续控制的重要手段。本文通过菌株筛选平台,挑选出产孢较好的15株昆虫病原真菌,用喷雾法测定其对梨网蝽成虫和若虫致病力的差异。在1.0×10^6孢子/m L孢子悬浮液接种后,菌株Bb2359等6株球孢白僵菌和1株金龟子绿僵菌Ma67对梨网蝽成、若虫累积死亡率均达到100%,其中菌株Bb2352、Bb2359、Bb2372等对成虫的LT50小于4 d,而菌株Bb2352、Bb2359、Ma67对2龄若虫的LT50均在5 d以内,LT50显示菌株对成虫的致死速度要快于对若虫的致死速度。在时间-剂量-死亡模型研究中,梨网蝽成、若虫在接种后的第3 d到第7 d,累积死亡率均呈直线快速上升趋势,而在前后均变化平缓。同时,各菌株均表现出明显的死亡率随接种浓度增高而不断增高的剂量效应。菌株Bb2359对梨网蝽成虫、若虫均显示出很高的毒力水平,致死中浓度LC50分别为6.466×10^4和4.747×10^4孢子/m L;在1.0×10^7孢子/m L浓度下致死中时LT50分别为2.89和3.54 d。该菌株具备高效快速的杀虫特点,具有开发为真菌生物农药的巨大潜力。一株虫生真菌的分离、鉴定及其对筛胸梳爪叩甲幼虫致病力测定
摘要：绿僵菌Metarhizium spp.是虫生真菌的主要类群之一,是当前世界上研究和应用最广的虫生真菌之一。由于绿僵菌能在自然土壤环境下长期存活,对地下害虫的控制具有明显优势。本研究从蛴螬僵虫上分离出一株寄生真菌,结合形态学和EF-1α基因5′端序列分析结果鉴定为黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride var.pemphigi。菌株培养的试验表明,乳糖有利于该菌株的菌丝生长,葡萄糖有利于该菌株产孢,KNO3为该菌株最适宜的氮源,在乳糖和KNO3为碳氮源时,C/N比为34：1有利于菌丝生长及产孢,添入微量元素Mn能促进产孢。在灭菌土中含5×10^6孢子/g时该菌株的对筛胸梳爪叩甲幼虫的校正累积死亡率为57.14%,幼虫逃逸率为4.76%。绿僵菌侵染对东亚飞蝗中肠保护酶和解毒酶的影响
摘要：为了明确绿僵菌Metarhizium anisopliae对东亚飞蝗的致病机制,探讨绿僵菌对东亚飞蝗中肠保护酶系和解毒酶系的影响。采用分光光度法测定了东亚飞蝗被绿僵菌侵染后,中肠超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、酚氧化酶（PO）、乙酰胆碱酯酶（Ach E）、全酯酶（ESTs）6种酶活力的动态变化。结果表明,中肠保护酶SOD、POD、CAT呈现先上升后下降再上升的趋势。PO则呈现先升高后下降再升高最后下降的趋势;解毒酶ACh E呈现先上升后下降再上升的趋势;ESTs则呈现逐渐减弱的趋势,5 d时与对照趋于一致。上述研究结果表明,东亚飞蝗被绿僵菌侵染后,不同的酶活力变化趋势存在明显差异。本研究对于揭示绿僵菌的致病机理及寄主对真菌侵染的免疫机制有一定的指导意义。亚洲玉米螟对Cry9Ee与Cry1Ab蛋白的交互抗性分析
摘要：Cry9Ee是近年来发现的对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis（Guenée）等害虫具有高毒力的蛋白,具有良好的应用前景。为了明确亚洲玉米螟对Cry9Ee和Cry1Ab蛋白是否存在交互抗性,本文首先分别表达、活化、纯化了Cry9Ee和Cry1Ab蛋白,进而对敏感和Cry1Ab抗性亚洲玉米螟进行生物活性测定;随后对2种蛋白在敏感亚洲玉米螟中肠刷状缘膜囊泡（brush border membrane vesicles,简称BBMVs）上的结合进行分析比较。生物活性测定结果表明,Cry9Ee和Cry1Ab蛋白的活性片段对敏感亚洲玉米螟的LC50分别为3.04和0.89μg/g;而Cry9Ee活性片段在5.00μg/g的浓度下,对Cry1Ab蛋白抗性亚洲玉米螟致死率高达96%,与对敏感种群活性相当。竞争结合试验表明,Cry9Ee和Cry1Ab两种蛋白间不存在竞争结合,推测它们在亚洲玉米螟中肠上存在不同的受体。综合生物活性测定及体外结合试验两方面结果得出结论：亚洲玉米螟对Cry9Ee与Cry1Ab蛋白不存在交互抗性。cry9Ee基因可以作为理想的候选基因,用于我国新一代转基因抗虫玉米的研制,为延缓和克服亚洲玉米螟对转基因抗虫玉米抗性的产生提供重要保证。链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析
摘要：胆固醇氧化酶（cholesterol oxidase,EC 1.1.3.6）是胆固醇降解代谢过程中的关键酶,在食品开发、医疗保健、临床检测、生物农药等方面具有广泛的应用价值。通过PCR方法从链霉菌Streptomyces ahygroscopicus 769的基因组中扩增得到769_Ch OA基因（Gen Bank accession No.KF290994）。该基因全长为1578 bp,编码一个由525 aa组成的蛋白质,蛋白理论分子量为57 k Da,等电点为6.29。769_Ch OA与来源于S.natalensis的胆固醇氧化酶基因的同源性为91%。构建了硫氧还蛋白-769_Ch OA融合的表达载体p ET32a：：769_Ch OA,以Escherichia coli Origami B（DE3）为表达宿主,获得了能可溶性表达的胆固醇氧化酶重组菌。经Ni亲和层析纯化得到的酶蛋白比活力为5.90 U/mg。酶学性质分析表明,该酶对胆固醇的催化活性最高,对测定的7种胆固醇类似物也都具有一定的催化能力。酶的最适温度和p H范围为20~40℃和p H 6.0~8.5,其活性均高于80%,且在30℃和p H 7.0时表现出最大的活性,酶活分别达到6.83和6.44 U/mg。酶在低于40℃和弱碱性条件下具有很好的稳定性。该酶对鳞翅目害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis（Guenée）和水稻二化螟Chilo suppressalis（Walker）幼虫具有很强的杀虫活性,半致死浓度分别为27.4和17.1μg/m L。氟唑活化酯诱导大白菜抗根肿病的研究
摘要：本文研究了我国具有自主知识产权的新型化合物氟唑活化酯诱导大白菜对根肿病的抗病效果及诱导技术。荧光染色观察发现该化合物对根肿菌休眠孢子没有明显的杀死作用,但具有明显的诱导抗病效果。不同的诱导浓度、诱导间隔期和诱导次数对根肿病的诱抗效果均不同。温室盆栽试验结果显示,25 mg/L的氟唑活化酯间隔7 d诱导大白菜3次,对根肿病的防病效果最好,达到71.33%,与诱抗剂苯并噻二唑效果相当,显著高于杀菌药剂50%氟啶胺悬浮剂拌土的防效（63.32%）。田间从苗期开始用氟唑活化酯25 mg/L诱导大白菜3次,诱导间隔期为7 d,对根肿病的诱抗效果最好达69.99%±2.01%,略低于对照杀菌剂氟啶胺拌土施药。本文明确了新型诱抗剂氟唑活化酯诱导大白菜对根肿病的抗病效果,并系统研究了施药技术,为白菜根肿病的防治提供了新手段。内生细菌TF28诱导番茄抗病分子机制研究
摘要：为了解内生解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens TF28诱导番茄抗病分子机制,本文采用相对定量RT-PCR方法研究内生细菌TF28对番茄抗病信号传递途径中促分裂原活化蛋白激酶基因MAPK和转录因子WRKY基因表达的影响,采用双向电泳、质谱检测和生物信息学等蛋白质组学技术研究接种菌株TF28后番茄叶片差异蛋白的表达情况。结果表明接种菌株TF28后,番茄叶片中的基因MAPK和WRKY上调表达,基因WRKY表达增幅高于基因MAPK,2个基因均在接种后2 d表达量最高。从接种内生细菌2 d后的番茄叶片中分离到373个蛋白点,与对照相比,有23个蛋白点特异表达,18个蛋白点上调表达,53个蛋白点下调表达,280个蛋白表达量与对照相当,对14个特异表达蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,9个与抗病相关,3个与品质相关,2个与生长调控相关。葡萄霜霉病菌拮抗放线菌PY-1发酵条件优化
摘要：为探讨暗黑链霉菌Streptomyces atratus PY-1液体摇瓶发酵条件,提高其活性次级代谢产物的产量,以菌体生物量和发酵液抑制葡萄霜霉病菌Plasmopara viticola活性为指标,采用单因子试验和正交试验对菌株PY-1的最适发酵培养基成分及发酵条件进行优化。结果表明,菌株PY-1最适发酵培养基为玉米粉50 g/L、葡萄糖5 g/L、蛋白胨5 g/L、氯化铵5 g/L、氯化钠0.5 g/L;最佳发酵培养条件为培养温度28℃、培养时间5 d、初始p H 7.0、250 m L三角瓶装液量90 m L、接种量体积分数5%、摇床转速180 r/min。在最佳发酵培养基和培养条件下,菌株PY-1发酵液抑菌率达到99.26%,抑菌能力提高8.35%。昆虫体内不同微生物间互作关系的研究进展
摘要：昆虫在某些发育阶段可感染不同种类的共生微生物,这些共生物在宿主生长、繁殖、适应环境及进化的过程中起重要作用。大量研究发现,昆虫体内的不同共生微生物并不是孤立存在和发生作用的,而是相互间不同程度地存在某些联系。本文以共生细菌为重点,综述了最近10多年来有关不同种共生细菌之间的关系,及共生细菌与其他昆虫相关微生物（病原细菌、真菌和病毒及昆虫共生真菌）之间相互关系的研究进展。其中,重点回顾了不同细菌在昆虫体内的共存和对宿主功能上的协作,昆虫中已经发生或可能正在发生的细菌取代,以及共生细菌对宿主的病原物敏感性的影响等方面的研究。最后对各种生物学技术大量应用于共生细菌研究的背景下此领域的研究前景进行了讨论。亚洲玉米螟越冬关键生物控制因子研究
摘要：连续4年对沈阳地区亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis（Guenée）越冬幼虫越冬后存活及发育情况研究表明,亚洲玉米螟幼虫越冬死亡率在45%~65%之间;白僵菌Beauvaria bassiana、寄蝇和茧蜂是导致亚洲玉米螟幼虫越冬死亡的主要病原菌和天敌种类,3类生物致死因子的综合控制力为22.50%~34.11%;3种生物致死因子年度间组成比例变异较大,存在互补和竞争效应,越冬后发生时期不同,白僵菌主要发生于发蛾高峰期前,茧蜂羽化期在发蛾高峰期后,寄蝇羽化期晚于白僵菌而早于茧蜂,白僵菌有越冬后再次侵染越冬代幼虫的条件;亚洲玉米螟室温下羽化期为18 d左右,雄蛾羽化和结束时间早于雌蛾,雌雄性比年度间差异较大。球形芽胞杆菌Cry48Aa/Cry49Aa毒素在苏云金芽胞杆菌中的共表达及杀蚊活性
摘要：球形芽胞杆菌Cry48Aa/Cry49Aa复合杀蚊毒素对库蚊有高毒力,并能杀死二元毒素Bin A/Bin B抗性蚊虫,是一种比较有潜力的新型杀蚊毒素蛋白,但Cry48Aa在野生菌株中表达量较低限制了该毒素的开发与应用。本文将cry48Aa基因启动子置换,并将cry48Aa和cry49Aa在苏云金芽胞杆菌中进行共表达。SDS-PAGE检测重组蛋白表达,可见120 k D左右的Cry48Aa蛋白带和53 k D的Cry49Aa蛋白带,cry48Aa在自身启动子下表达量偏低,在置换强启动子Pcry1Aa后表达量明显提高,但Cry48Aa仍低于Cry49Aa的表达量。重组菌株BMB171-p BU-cry48Aa-cry49Aa和BMB171-p BU-Pcry1Aacry48Aa-cry49Aa产生典型的双锥型和方形2种晶体。两菌株发酵液对实验室饲养的二元毒素敏感（Cq SL）和抗性致倦库蚊（Cq RL/C3-41）品系4龄幼虫都表现出高毒力,LC50分别为3.05和3.45以及0.65和0.82μL/m L。番茄灰霉生防菌CQ的分子鉴定及其生防效果研究
摘要：菌株CQ是一株分离自云南省保山市昌宁县烟草根部的对番茄灰霉病具有较好防治效果的拮抗细菌。通过对该菌株进行形态特征观察、16S r DNA序列分析鉴定,确定菌株CQ为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。拮抗试验结果表明,菌株CQ能够显著抑制番茄灰霉菌的菌丝生长,使菌丝出现异常分枝和囊泡状畸形。1‰CQ发酵滤液即可显著抑制番茄灰霉菌孢子的形成。室内生测结果表明,相比对照组,48 h无菌发酵滤液原液在离体叶片上对番茄灰霉病的防效可达100%,而其10、100倍稀释滤液则使发病率分别降低28.5%和21.3%,病情指数分别降低44.01和37.86。
