限制性内切酶介导的粉红粘帚霉67-1转化体系构建

作者:许梦秋 姜杰 孙漫红 谢响明 李世东

摘要:本文将含有潮霉素抗性基因(hph)的质粒pAN7-1通过限制性内切酶介导法转入植病生防真菌粉红粘帚霉Clonostachys rosea 67-1中,并由此建立该生防真菌的遗传转化体系。研究结果表明,PEG介质含量、限制性内切酶种类和浓度、质粒形态和反应时间对转化效率具有显著的影响。当质粒经线性化后加入40%PEG3350和20 U HindⅢ,室温下转化10 min时,转化效率可达到30~40 CFU.μg 1质粒DNA。PDA平板上连续培养3代,再转接到潮霉素抗性平板中,获得遗传稳定的转化子。PCR检测、Southern杂交和Real-time PCR检测等证明hph基因已整合到基因组中,且多为单拷贝插入。对随机挑取的50个转化子生长性状的测定结果表明,20%的转化子在PDA培养基中生长较快,12%的转化子产孢水平较高;另有16%~20%的转化子生长缓慢、产孢量减少;还有4%的转化子生长微弱,且无明显产孢现象。上述方法可以成功用于在粉红粘帚霉中引入外源基因,为今后生防粘帚霉高效工程菌株的构建提供了依据。

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关键词:
  • 粉红粘帚霉
  • 原生质体转化
  • 限制性内切酶介导整合
  • 潮霉素抗性

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期刊名称:中国生物防治学报

期刊级别:北大期刊

期刊人气:1896

杂志介绍:
主管单位:中华人民共和国农业农村部
主办单位:中国农业科学院植物保护研究所;中国植物保护学会
出版地方:北京
快捷分类:农业
国际刊号:2095-039X
国内刊号:11-5973/S
邮发代号:2-507
创刊时间:1985
发行周期:双月刊
期刊开本:B5
下单时间:1-3个月
复合影响因子:1.12
综合影响因子:1.77