中国农学通报杂志 统计源期刊

中国农学通报 2008年第04期杂志 文档列表

中国农学通报杂志畜牧兽医科学

不同培养代数鹿茸生长中心细胞对IGF1刺激的反应1-3

摘要：【研究目的】探讨胰岛素样生长因子（IGF1）对生长60d的梅花鹿鹿茸体外培养不同代数鹿茸生长中心细胞的影响。【方法】分离、培养生长60d的梅花鹿鹿茸生长中心细胞,将培养第2代、5代、8代细胞经含有不同浓度的IGF1（0,1,3和10nM）作用,在培养24h后用3H-胸腺嘧啶核苷掺入测定法检测每分钟衰变数（DPM）值。【结果】全部IGF1处理组都显著高于对照组（p〈0.01）。不同浓度IGFⅠ处理组的平均值和最高值都是离体培养2代的细胞的DPM最高（分别为31918和39818DPM/mg蛋白）,培养5代的细胞（分别为5455和6815DPM/mg蛋白）已大大地下降;到了第8代的（分别为4030和4838DPM/mg蛋白）又有进一步的下降。【结论】IGF1能够促进鹿茸生长中心细胞分裂增殖,生长60d鹿茸的生长中心细胞在离体培养,不同培养时期的鹿茸生长中心细胞对IGFⅠ刺激的敏感度不同。

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用4-7

摘要：用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。

犬瘟热病毒核衣壳蛋白N基因的真核表达及鉴定8-12

摘要：根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDVN基因的引物。以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验（IFA）鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础。

猪无透明带卵不同孤雌激活方法研究13-15

摘要：研究了离子霉素处理时间、处理浓度和不同胚胎基础培养基对猪无透明带卵孤雌激活的影响。结果表明：（1）10μM离子霉素处理5min、7min、10min的激活率64.81%、66.67%、68.75%差异不显著（P〉0.05）,但显著高于处理3min的激活率36.17%。（2）分别以10μM、15μM离子霉素处理10min的激活率68.18%、65.11%差异不显著（P〉0.05）,但显著高于5μM的激活率40.54%（P〈0.05）。（3）分别以NCSU-23＋4%BSA和TCM199＋4%BSA作为基础培养基进行培养,其激活率68.51%、62.50%无显著差异（P〉0.05）。试验结果表明：10μM离子霉素处理5min联合2mmol/L6-DMAP处理2h激活,以NCSU-23＋4%BSA为胚胎基础培养基能有效提高猪无透明带卵孤雌激活的激活率。

丝胶蛋白粉的制备及其物理性质初探16-18

摘要：分别采用冷冻法、酸析法、有机溶剂法和化学混凝法等方法提取丝胶蛋白并制备丝胶蛋白粉,测定并比较它们的物理特性。结果表明：冷冻法提取丝胶蛋白的回收较高;无水乙醇法结合离心法制出的丝胶蛋白粉物理性质良好,其持水性、持油性和溶解性都好于其它方法制备的丝胶蛋白粉,表现出良好的加工性能。

口蹄疫146S对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌IL-6的影响19-22

摘要：研究口蹄疫146S病毒粒子抗原（FMDV146S）对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞（RMMVECs）分泌IL-6的影响,为解决现有口蹄疫疫苗的不足提供数据。体外培养乳鼠心肌膜微血管内皮细胞,用ELISA方法检测FMDV146S处理后细胞上清液中IL-6浓度。乳鼠心肌膜微血管内皮细胞（RMMVECs）在正常状态下低水平分泌IL-6;FMDV146S刺激后IL-6的分泌量显著增加,且呈剂量和时间依赖性,在刺激24h后分泌量达到峰值。MVECs在FMDV146S诱导的免疫与炎症反应中起着重要作用。

隐性乳房炎奶牛4个微卫星座位的遗传变异分析23-28

摘要：选择牛23号染色体上4个微卫星标记BM1818、BM1443、BM1258和BM1905,用非变性聚丙酰胺凝胶电泳方法对石河子某奶牛场150头进口荷斯坦奶牛进行了遗传变异的检测分析并计算相应的遗传指标,利用SPSS12.0软件分析了4个微卫星座位与进口荷斯坦牛隐性乳房炎的关系,探讨各自座位上不同基因型与奶牛隐性乳房炎之间的相互关系。

中国农学通报杂志农业生物技术科学

一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法29-32

摘要：在药用植物中开展分子生物学研究时的常见困难是RNA提取困难,提取的RNA质量不能满足下一步试验要求。探索了一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法并对提取的RNA质量在随后的分子生物学中进行了检验。结果证实通过该方法提取的RNA纯度和完整性较好,完全可以满足后续的分子生物学实验要求,也可以作为其它药用植物RNA提取的参考方法。

一种直接用于PCR的土壤微生物DNA提取方法33-36

摘要：以橡胶林土壤为材料,直接提取土壤微生物DNA。本实验介绍的方法不仅可以获得大片段,并且不需要纯化即可直接用于PCR扩增和DNA酶切等后续操作,每克土壤DNA提取量约为2.1～4.6μg。此方法操作简单、快捷、为土壤宏基因组文库的构建和土壤微生物群落结构的多样性分析提供基础。

花生SSR-PCR体系的优化37-41

摘要：以花生品种丰花3号为材料,研究了花生SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增效果的影响及不同引物的退火温度。结果表明dNTP对扩增影响较大,每对引物都有其扩增适合的退火温度。确立了适合花生SSR分子标记研究的优化体系。最终确定总反应体系为20μl,其中25mMMgCl21.5μl,2.5mMdNTP1.6μl,5U/μlTaq酶0.17μl,100ng/μl模板DNA0.4μl,2.5mM引物5μl。优化后的扩增程序退火温度为54℃。

绿色荧光蛋白基因银耳表达载体构建及表达42-46

摘要：以银耳芽孢为材料,由载体pEGFP、pCAMBIA1300经过HindIII和EcoRⅠ双酶切、连接、转化,重组质粒酶切验证,成功构建了由双孢蘑菇gpd启动子调控EGFP基因的银耳真核表达载体,命名pCB-BEGFP。采用电击转化法将携带EGFP基因的银耳表达载体pCB-BEGFP转化到银耳芽孢。提取4个转化子基因组DNA,用EGFP基因特异引物PCR扩增,电泳结果表明有与EGFP基因大小一致的特异带出现;荧光显微镜观察在再生培养基上的转化子可看到很强的绿光;其中一个转化子蛋白SDS-PAGE电泳,结果发现在大约27kD处有一明显的蛋白条带出现,与预期的蛋白分子量相近。以上结果证明EGFP基因转入银耳芽孢中,双孢蘑菇启动子可以调控外源基因的在银耳芽孢中正确表达。

ISSR标记对34份樱桃种质资源的遗传分析47-51

摘要：利用ISSR标记对34份樱桃种质资源进行遗传多样性检测。结果发现,ISSR标记能够揭示材料间较高的遗传多样性。每个引物可获得6～12条DN段,平均为8.76条;17个ISSR引物共扩增出149条DN段,其中143条具有多态性,多态性比率（PPB）为95.97%;平均多态信息量（PIC）为0.90;每个位点有效等位基因数（Ne）为1.914;材料间遗传相似系数GS变幅为0.44～0.91,平均达0.73。通过聚类,从分子水平对樱桃种质资源的遗传关系进行分析,并对34份资源进行分类,ISSR标记能将34份樱桃种质完全区分开,为樱桃种质资源的研究利用提供参考。

人工合成六倍体小麦后代衍生群体Waxy蛋白亚基的分子标记52-57

摘要：四倍体小麦与节节麦杂交培育的人工合成六倍体小麦已广泛应用于国内外小麦品种改良。以引自CIMMYT的Syn768、Syn769和Syn780人工合成六倍体小麦分别与中国四川成都平原主栽普通小麦品种杂交、回交的BC2F2：6后代群体中选育的113份优良高代系为材料,采用SSR特异引物的PAGE凝胶电泳对其Waxy蛋白亚基缺失类型进行了研究。结果表明,在所检测的121份材料中,8份材料缺失Waxy-B1型蛋白亚基,占全部材料的6.6%;没有检测到其他类型的缺失体。从每个人工合成六倍体小麦亲本材料所形成的后代衍生群体来看,Waxy-B1缺失体频率各不相同,说明Waxy蛋白亚基缺失类型在人工合成六倍体小麦后代衍生群体材料中的表现存在着随机性,与亲本的基因型状况关系极大。通过研究人工合成六倍体小麦与普通小麦杂交后代的Waxy蛋白亚基缺失类型,有助于提高分子标记育种效率。

基因激活标签体系及其在植物功能基因组学研究中的应用58-65

摘要：利用传统的基因缺失产生的突变体的方法来鉴定基因的功能效率很低,因为对于发育早期的基因特别是配子发育相关的基因以及冗余基因,这种突变体显得无能为力,前者基因纯合突变体导致死亡、而后者由于冗余基因之间的功能互补而不显示任何表型。而通过基因激活标签技术可以获得显性突变体即功能获得型突变体,为研究这类基因的功能提供了一个重要的手段。基因激活标签技术是指含有35S增强子或启动子的T-DNA或转座子若插入基因内,可导致插入突变,引起插入失活突变体的产生;若插入基因附近（上游或下游）,则可能激活正常情况下不表达或表达极弱的基因,导致显性功能获得（dominantgain-of-function）性突变。近年来通过T-DNA或转座子介导的方法建立了多种植物的基因激活标签突变体库,在植物基因功能研究中发挥了重要作用,使一些由多个基因或基因家族决定的功能的研究获得突破性进展。就植物基因激活标签技术的原理,特点和创制方法以及在植物生长发育、代谢等一系列方面研究中的应用进行了阐述,并对该技术的发展趋势进行了较为详细的探讨。

千瓣莲品种资源的RAPD分析66-68

摘要：千瓣莲是中国独特的荷花资源。为阐明其品种资源间遗传关系。利用16条随机引物对来自云南省的5份农家品种和湖北当阳玉泉寺的1份千瓣莲资源进行了RAPD分析。16条引物共扩增出141条谱带,其中多态带81条,占57.45%;6份千瓣莲之间遗传距离较远。千瓣莲在中国具有较丰富的遗传多样性,并存在较大遗传分化;玉泉寺千瓣莲品种与云南省品种之间没有明显遗传分化;云南省内地方品种间存在较大分化,其中姚安千瓣莲最特殊。

基于改良SDS法的杏基因组DNA提取69-71

摘要：为探讨改良SDS法是否适用于杏基因组DNA提取及提取液适宜浓度,以6个品种杏叶片为试材提取DNA,提取液设0.5%、1%、2%三个浓度梯度。检测结果表明,改良SDS法完全适用于杏叶片基因组DNA的提取,3种浓度的提取液均可得到质量较高的DNA,且0.5%为改良SDS法提取杏叶片基因组DNA的适宜提取液浓度。

玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb的克隆与过表达载体的构建72-75

摘要：【研究目的】克隆玉米分支酶基因SBEⅡb并构建该基因的过表达载体pCASBEⅡb。【研究方法】从糯玉米（Waxycorn）新鲜胚乳中提取总RNA,利用RT-PCR方法克隆玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb的全长cDNA。【结果】克隆得到了玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb的全长cDNA,用BLAST软件作同源序列比对的结果显示,该片段的核苷酸序列与GenBank上报道的序列具有99%的同源性,全长2719bp,编码799个氨基酸。【结论】将该基因连接到携带GUS报告基因的植物表达载体pCAMBIA1303中,并通过了GUS活性检测,说明已成功构建了玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb的过表达载体pCASBEⅡb。

碗莲组培快繁技术初探76-79

摘要：以碗莲‘案头春’茎尖为实验材料,对诱导培养基成份、培养基状态、最佳取材时期以及增殖培养基筛选等方面进行了研究。结果表明：最佳取材季节为10～12月份;碗莲茎尖分化最适宜培养基为MS＋1.0mg/L6-BA＋0.25mg/LNAA＋1.0mg/LGA3;适宜的增殖培养基为MS＋2.0mg/L6-BA＋0.25mg/LNAA;固液培养状态：上层为5mm厚的MS＋1.0mg/L6-BA＋0.25mg/LNAA＋1.0mg/LGA3液态培养基,下层为1cm厚的MS＋1.0mg/L6-BA＋0.25mg/LNAA＋1.0mg/LGA3固态培养基,更有利于芽诱导;培养过程中污染的芽苗用75%酒精1min、0.1%HgCl210min灭菌效果最好。