中国农学通报杂志 统计源期刊

中国农学通报 2007年第06期杂志 文档列表

中国农学通报杂志畜牧兽医科学

牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株NS2-3区基因克隆及序列分析1-6

摘要：【目的】对牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株NS2-3区基因进行克隆及序列分析,为阐明本病致病机理,更好的控制BVDV感染、流行提供理论依据。【方法】以牛病毒性腹泻病毒河北分离株（HB-DCZ）基因组RNA为模板,扩增BVDVHB-DCZ株基因组NS2-3片段cDNA。将PCR产物克隆后进行PCR及双酶切鉴定。克隆产物进行序列测定及分析。【结果】HB-DCZcDNA体外扩增获得特异性条带,大小约为665bp,表明该分离毒株基因组中无插入序列。PCR产物克隆,提取重组质粒,扩增获得特异性的DNA条带,长度约为665bp,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,获得两条DN段,长度分别为2600bp和702bp左右,与理论值相符。序列测定结果表明,克隆得到的NS2-3重要区扩增片段共665核苷酸,NS2-3重要区的蛋白质由208个氨基酸残基组成。HB-DCZ毒株NS2-3重要区核苷酸序列与已公开发表的BVDV其他毒株相比的同源性依次为184株99.1%,ZM195株97.4%,Osloss株92.3%,C24V株77%,NADL株76.4%。HB-DCZ在NS2-3扩增区域中既没有外源序列的插入,也没有基因重组、重排或缺失,但存在某些核苷酸的替换。【结论】HB-DCZ与Osloss株、国内的184株、ZM195株遗传距离较近,与C24V株、NADL株遗传距离较远。HB-DCZ株应为BVDVIb基因亚型。

胶体金对小鼠细胞免疫的影响7-12

摘要：实验设计了四种直径和三种剂量12个组合的胶体金（CG）对小白鼠进行注射处理;采用MTT法、放射性免疫法、LDH短程释放法,测定了T、B淋巴细胞增殖活性及其腹腔巨嗜细胞活性,外周血血清和脾脏淋巴细胞诱导白介素2含量和脾脏NK细胞活性,结果表明：不同直径和剂量的CG对机体有不同程度的影响,其中直径15nm、10nmCG的0.3mL和0.2mL剂量组不仅对T、B淋巴细胞增殖活性和血清中IL-2含量有显著促进,也可显著提高腹腔巨噬细胞活性及脾脏NK细胞杀伤活性,0.1mL剂量组虽有提高但不显著;直径5nm、20nm各个剂量组效果的波动较大,中、高剂量组对四项指标起促进作用但不显著,低剂量组则没有促进作用。证明了15nm和10nm中高剂量的胶体金可显著提高小鼠机体特异性和非特异性细胞免疫功能。

凋萎时间对青玉米秸秆青贮饲料营养成分的影响13-17

摘要：【研究目的】青贮饲料调制是一项短时间内的突击性工作,刈割青玉米秸秆未能尽快调制青贮致使青贮饲料质量受影响;【方法】为此本试验选用农大108玉米秸秆收获后凋萎的1d、3d、5d、7d调制青贮,以研究刈割后凋萎时间对青贮饲料营养成分的影响;【结果】在本试验的凋萎条件下,试验期内玉米秸秆中干基水溶性碳水化合物含量、水分含量逐渐下降,凋萎7d的水溶性碳水化合物、水分含量显著低于其它处理组,在凋萎的1d、3d、5d、7d调制青贮,凋萎7d的青贮pH和氨态氮比例显著高于凋萎1d（pH,4.82比5.27;氨态氮/总氮,5.90%比8.56%）,但青贮饲料中乳酸、粗蛋白、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量没有显著差异。【结论】结果表明收刈后青玉米秸秆5d之内可以调制青贮。

链霉菌B221的角蛋白降解机制初探18-22

摘要：利用本实验室自行分离得到的链霉菌B221液体发酵分解羽毛角蛋白,在第2d到第3d角蛋白降解最为迅速,5d后角蛋白降解率达到82.7%。发酵液的无细胞上清液中检测到角蛋白酶活,最大酶活出现在第4d。在角蛋白降解率与角蛋白酶活之间的不完全对应,揭示可能还存在非酶降解途径。硫酸盐是角蛋白降解过程中硫元素的主要转化形式。同时在发酵液中检测到亚硫酸盐,其含量变化与酶活、降解率、可溶性蛋白、巯基化合物的变化存在很强的相关性,表明亚硫酸盐在角蛋白降解中可能起到非常关键的作用。链霉菌B221降解角蛋白的过程中不但存在角蛋白酶降解途径,而且存在非酶降解途径—亚硫酸分解作用。

siRNA干扰lZP3 mRNA表达的研究23-27

摘要：【目的】为探索新疆草原兔尾鼠（Lagurus lagurus）卵透明带3（lZP3）在精卵结合中的机理,有效的控制草原兔尾鼠的生育;【方法】将RNA干扰载体pGenesil-ZP31和真核表达质粒p-ACLC一起通过尾静脉大容量快速注射法（Hydrodynamics-based transfectionmethod,HD法）共注射小鼠。【结果】半定量RT-PCR和real-timePCR结果表明,2种质粒共注射时,pGenesil-ZP31的干涉作用至少发生在注射后的8h到10d之间;顺序性注射实验中,注射pGenesil-ZP31后间隔8h和1d再注射p-ACLC时,pGenesil-ZP31能在一定程度上干涉lZP3mRNA的表达,间隔3d以后lZP3mRNA的表达几乎不受影响,未出现干涉现象。而注射p-ACLC后间隔1h、2h、4h和8h再注射pGenesil-ZP31,lZP3mRNA的表达也受到了抑制,间隔24h时抑制现象则消失;【结论】以载体为基础的体内RNAi过程具有时间依赖性,为在卵母细胞水平进一步研究siRNA对lZP3的干涉机制提供借鉴。

牛精原干细胞研究进展28-31

摘要：精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是雄性生殖系干细胞,位于睾丸曲细精管基膜上,既具有自我更新潜能,又具有定向分化潜能,是自然状态下出生后动物体内在整个生命过程中进行自我更新并能将基因传递至子代的惟一成体干细胞。根据国内外最新相关进展,系统评述了牛SSCs的生物学特性、分离纯化、冷冻保存、体外培养、永生细胞系的建立及移植等方面的现状及问题。

秸秆粗饲料中粗纤维结构层次的研究32-36

摘要：通过酶解实验提出秸秆粗饲料中的粗纤维成分分为两个结构层次,即粗纤维中易被酶水解的是游离型半纤维素和纤维素,难以被酶水解的是与木质素键合的结合型半纤维素和纤维素。试验结果表明,棉花秸秆中半纤维素酶降解部分占半纤维素总量的80.98%,被纤维素酶降解部分占纤维素总量的19.31%;玉米秸秆中被半纤维素酶降解部分占半纤维素总量的60.23%,被纤维素酶降解部分占纤维素总量的44.36%;小麦秸秆中被半纤维素酶降解部分占半纤维素总量的46.20%,被纤维素酶降解部分占纤维素总量的43.04%;水稻秸秆中被半纤维素酶降解部分占半纤维素总量的47.60%,被纤维素酶降解部分占纤维素总量的51.80%。这可能是造成粗饲料消化代谢率低的主要原因。

多重荧光PCR检测肠出血性大肠杆菌（VTEC）方法的研究37-41

摘要：为寻找一种能广泛应用于食品检验、临床诊断的快速、简便、灵敏度高、特异性较好、价格低廉的肠出血性大肠杆菌（VTEC）的检测方法;对VTEC致病相关基因VT1和VT2基因序列进行分析,并设计2对特异引物,通过SYBR GreenⅠ多重荧光PCR反应法结合熔链曲线分析,实现对VTEC的检测;结果表明该方法具有较高的灵敏度及特异性,能够对肠出血性大肠杆菌（VTEC）进行有效检测,其最低检出限可达10cfu/g。利用该技术检测VTEC,具有快速、方便、准确、高效的特点,是一种适于检验检疫和兽医临床检验等领域的快速检测的有效方法。

山羊GH基因5′侧翼序列多态及生物信息学分析42-46

摘要：试验采用PCR-SSCP方法,分析了黄淮山羊、长江三角洲白山羊以及波尔山羊168只个体GH基因5′侧翼区两个位点的遗传多态性,同时分析了三个群体是否为平衡群体。结果如下：在GH基因的两个位点上均发现了多态性,其中第1对引物出现6种基因型,存在2处突变;第2对引物出现3种基因型,存在3处突变。群体分析表明,第1个位点三个群体都处于非平衡状态,说明该位点有经过人工选择的可能;而第2个位点三个群体则都处于平衡状态。进一步利用生物信息学软件分析GH基因的5′侧翼序列,发现在其多态位点处存在IA-1、PIT-1、Gsh-2、C/EBP等多个分值较高的转录因子结合位点,其中264位T→C的突变导致PIT-1和Gsh-2结合位点的消失,至于这些位点是否会影响到GH基因的表达,进而影响到山羊个体的生长发育还需作进一步的研究。

不同锌水平对荷斯坦种公牛精液品质及血液理化指标的影响47-51

摘要：【研究目的】本文旨在研究不同锌水平日粮对荷斯坦种公牛精液品质和血液理化指标的影响。【方法】选取30头荷斯坦种公牛,随机分为5组,A为对照组,饲喂基础日粮,B、C、D、E组锌的添加水平分别为50、80、110、200mg/kg,试验期8个月。【结果】结果表明,（1）不同锌水平对荷斯坦种公牛精子活力、射精量、精子密度影响极显著（P〈0.01）;对精子顶体完整率无显著影响（P〉0.05）,能显著降低精子畸形率（P〈0.05）。（2）不同锌水平对荷斯坦种公牛血清中睾酮含量影响极显著（P〈0.01）,对血清锌、精清锌和精清睾酮含量无显著影响（P〉0.05）。（3）不同锌水平对荷斯坦种公牛精清中谷草转氨酶（GOT）活性影响极显著（P〈0.01）,对碱性磷酸酶（AKP）和谷丙转氨酶（GPT）活性有显著影响（P〈0.05）,对乳酸脱氢酶（LDH）活性无显著影响（P〉0.05）;对血清中GOT和GPT活性影响极显著（P〈0.01）,对AKP和LDH活性无显著影响（P〉0.05）。【结论】综合分析不同锌水平试验牛生理生化指标的变化,本次试验研究表明：锌的适宜添加量为110mg/kg日粮干物质。

新疆大叶紫花苜蓿（Medicago sativa.L）子叶、下胚轴、根的植株再生52-56

摘要：随着植物抗逆性研究和植物转基因技术的发展,通过异源目的基因转化培育耐盐碱苜蓿品种的研究已引起人们的关注,植物受体高频再生体系的建立是异源转化高效的基础。选取新疆大叶紫花苜蓿种子萌发5～7d无菌苗的子叶、下胚轴及根为外植体,诱导愈伤培养基为MS＋2,4-D0.1～3.0mg/L（8种不同水平）或MS＋2,4-D2.0mg/L＋KT0.01～0.5mg/L（10种不同水平）,诱导芽培养基为MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.05mg/L,生根培养基为MS。结果表明,外植体在MS＋2,4-D2.0mg/L＋KT0.2mg/L培养基中能够产生状态较好可再分化的愈伤组织,子叶、下胚轴、根的平均出愈率分别为93.1%、100%、100%。愈伤组织在MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.05mg/L培养基中培养40～80d中均可分化芽,子叶、下胚轴、根的芽平均分化率为50%、78%、50%,将2cm以上的芽转入MS培养基中诱导生根,14d后,生根的小植株炼苗移入花土中,成活率达90%以上。子叶、下胚轴、根在该体系中均能获得再生植株,根也是一种较好的植株再生材料,以根为外植体进行植株再生的研究报道还较少。

东亚4个黑山羊群体mtDNAD-环遗传多样性及其起源57-60

摘要：为了研究地方山羊品种的起源与分化,了解其遗传背景,为山羊资源的合理利用提供基础资料,利用PCR产物直接测序法对3个中国黑山羊群体和1个韩国黑山羊群体共39个个体的mtDNAD-环部分序列进行了测定和分析。测定的序列经排列比对后选取441bp分析,发现了55个多态位点,单一多态位点11个,简约信息位点44个,确定了29种单倍型,单倍型多样度为0.984。构建系统发育树将29种单倍型分成了明显的3个分支,角猾羊聚入A分支。同时利用群体间的单倍型的错配分布和遗传距离分析了各群体的亲缘关系。结果表明：4个黑山羊群体遗传多样性丰富,至少拥有3个不同的母系起源,角猾羊是家山羊的一个母系祖先。

猪瘟胶体金免疫层析快速诊断法的建立及应用61-64

摘要：运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、灵敏度高、特异性好,能区分强弱毒感染,适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。本试验利用大肠杆菌表达猪瘟病毒E2蛋白作为弱毒抗原,利用PK15细胞培养纯化后的猪瘟病毒强毒用作强毒抗原,研制了胶体金免疫层析猪瘟病毒抗体检测试纸条。结果显示,经过37℃破坏,该试验方法制备的试纸条仍具有很好的稳定性;与间接血凝法、美国IDEXX酶免试剂比较,发现该试纸条灵敏度在一定程度上优于前者;用多种病毒、病原菌阳性血清考核,显示该试纸条亦具有较高特异性。该试纸条的研制为猪瘟的快速诊断提供了一种更加实用的方法。

福建鸭品种的典型体型性状的确定65-68

摘要：【研究目的】探讨确定福建省四个优良地方鸭品种莆田黑鸭、连城白鸭、金定鸭、福建白番鸭具有代表性的典型体型性状。【方法】应用相关分析和聚类分析方法对四个鸭品种的11个体型性状进行了研究。【结果】根据聚类分析分类结果和相关指数的均值R2,从各类的体型性状中选出代表性的典型性状。莆田黑鸭可以聚成3类,典型性状为体重,胸宽,颈长;连城白鸭聚成4类,典型性状为体重,胸宽,嘴宽,骨盆宽;金定鸭聚成4类,典型性状为体重,半潜水长,骨盆宽,胸深;福建白番鸭聚成5类,典型性状为体重,体斜长,胸深,嘴长,嘴宽。【结论】聚类分析可将众多的体型性状归结为数量较少的几个综合指标,为福建地方鸭的选育、改良,提供了体型性状选育的重点和方向。

奶牛急性乳房炎的治疗对比试验69-71

摘要：选择75头奶牛急性乳房炎病例,随机分成三组,分别采用不同的治疗方案进行治疗,以对比不同的治疗方案所产生的治疗效果。结果表明：中西药配合使用,有效率、治愈率均达到100%;只用青、链霉素治疗,有效率是92%,治愈率是88%;只用中药治疗有效率84%,治愈率80%。青、链霉素局部用药配合中药全身用药,优势互补,治疗效果最佳,值得在治疗奶牛急性乳房炎时推广应用。

猪Musclin基因片段克隆与序列分析72-74

摘要：【研究目的】克隆并分析猪musclin基因;【方法】肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;【结果】克隆的猪musclin基因片段与人、大鼠、小鼠同源性分别为86%、78%、75%,预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域;【结论】克隆了猪musclin基因片段并注册GenBank（Ac-cession.EF369511）。

猪2型链球菌河北株的分离及PCR鉴定75-77

摘要：对河北省某规模化猪场病死猪进行临床诊断和实验室诊断,通过采取病料直接涂片染色镜检,病原分离培养,初步怀疑为链球菌。对纯化的分离细菌进行动物试验、生化试验,确定该病原菌为链球菌。分离菌经过液体增菌后,提取细菌基因组DNA,用荚膜多糖基因的特异性引物分别扩增出与设计大小相符条带,将PCR产物送至上海生物工程有限公司进行序列测定,并进行序列分析,确定为该菌株为猪链球菌2型。

中国农学通报杂志农业生物技术科学

甘蔗AFLP分析技术体系的建立78-82

摘要：【研究目的】为了建立甘蔗AFLP标记技术体系;【方法】本文通过对甘蔗抗、感黑穗病的杂交亲本CP84-1198和科5,以及根据其杂交后代的浸渍接种田间抗性鉴定结果所构建的抗、感黑穗病池的AFLP银染法分析;【结果】建立了甘蔗黑穗病抗性的AFLP分析实验体系,同时将AFLP-银染技术应用于甘蔗近缘植物斑茅抗旱胁迫及其对照材料的cDNA差别筛选,建立了一种mRNA差别显示技术体系。实验过程中还筛选出了四对能在抗、感亲本上扩增出特异条带的引物,以及一对在斑茅水分胁迫和对照中表现良好差异的引物,为下一步的实验工作的开展奠定了基础。【结论】通过本实验建立了甘蔗AFLP分析技术体系、变性聚丙烯酰胺凝胶的快速银染、凝胶简单保存以及聚丙烯酰胺凝胶中的特异条带的高效回收技术。