中国老年学杂志 北大期刊

中国老年学 2009年第05期杂志 文档列表

中国老年学杂志基础研究

S1P2受体shRNA腺病毒载体的构建及筛选513-516

摘要：目的为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制，构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体。方法设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸（ss oligo），经变性退火为双链寡核苷酸（ds oligo）插入穿梭质粒pRNAT-H1.1／Shuttle载体，测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞（HPAEC），通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1．1／Shuttle-shRNA，提取质粒DNA，经双酶切，回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRN段，亚克隆到腺病毒表达载体（pAdeno-X），筛选出正确重组子，转染HEK293A细胞，收集重组的腺病毒，测定病毒滴度，通过Western blot方法检测s1P2受体沉默效果。结果测序结果证实所构建的pRNAT-111．1／Shuttle-shRNA质粒正确，并从4对ds oligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA，经亚克隆到腺病毒表达载体。转染人肺动脉内皮细胞后，Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果。结论成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒。

补肺益肾活血法对慢性低氧性肺动脉高压大鼠血管活性物质的影响516-518

摘要：目的探讨补肺益肾活血法冶疗肺动脉高压的作用机制。方法取健康SD大鼠40只，随机分为空白对照组、模型组、中药芪葶合剂组、卡托普利组。各组动物在同等条件下饲养，将后3组大鼠放入常压缺氧箱内缺氧造模4W，各组分别用等量生理盐水、芪葶合剂及卡托普利溶液灌胃。4w之后用右心导管法检测大鼠肺动脉平均压（mPAP）、颈动脉平均压（reCAP）；用放免法检测内皮素（ET-1）、血栓素（TXB_2）。结果芪葶合剂组、卡托普利组与模型组比较肺动脉平均压降低，而颈动脉平均压则无明显变化。芪葶合剂组、卡托普利组肺组织中ET-1和TXB2水平下降（P〈0．05或P〈0．01），结论芪葶合剂能降低肿组织中ET-1和TXB2含量，改善肺动脉高压。

红景天苷对脑缺血再灌注大鼠脑神经元APE／Ref-1的影响518-520

摘要：目的研究红景天苷对局灶性脑缺血／再灌注（I／R）损伤后神经可塑性和DNA修复酶APE／Ref表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组，I／R模型组和红景天苷干预组，采用线栓法制造大鼠大脑局灶缺血（2h）／再灌注模型，于灌注后0．25、1、3、7d4个时间点断头取脑，HE和尼氏染色观察神经元形态学变化，免疫组化方法检测无嘌呤无嘧啶位点／氧化还原因子，1（APE／Ref-1）的表达。结果与其他两组比较，红景天苷组梗死灶范围明显减小，梗死灶周围皮质神经元损伤明显减轻（P〈0．05）；APE／Ref-1阳性细胞数表达显著增高（P〈0．05）。结论红景天可以易化脑I／R损伤后中枢神经系统神经再生和修复的可塑性，抑制APE／Ref-1降低可能是其在I／R早期发挥神经保护作用的一条重要途径。

粉防己碱对大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1和caspase-3表达的作用527-529

摘要：目的探讨粉防己碱对脑缺血再灌注（I／R）后ICAM-1及caspase-3表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为假手术组，模型组，粉防己碱组。采用线栓法复制大鼠右侧大脑中动脉脑I／R模型，通过免疫组织化学方法测定ICAM-1和caspase-3表达的变化，并进行组织病理学观察。结果模型组ICAM-1、caspase-3蛋白表达与假手术组比较明显升高（P〈0．05，P〈0．01），再灌注24h达高峰，且中性粒细胞附壁浸润明显；粉防己碱组ICAM-1、caspase-3蛋白表达与模型组比较明显减少（P〈0．05，P〈0．01），且中性粒细胞附壁浸润较少。结论粉防己碱可降低脑I／R后ICAM-1和caspase-3水平，减轻脑I／R后的炎性反应和细胞凋亡，拮抗脑I／R损伤。

局灶缺血早期大鼠脑组织一氧化氮合酶表达的变化529-531

摘要：目的研究局灶缺血早期大鼠脑组织一氧化氮合酶（NOS）表达变化情况，探讨NO和NOS在脑缺血性损伤中的作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）局灶脑缺血模型，选择大鼠脑缺血10、30、60min 3个时点，采用免疫组织化学SABC方法检测脑组织NOS表达，应用光镜、透射电镜观察海马神经元的形态学改变。结果脑缺血早期10～30min大鼠脑组织NOS活性上升至高峰，脑缺血后30～60min逐渐下降。电镜观察脑缺血后30rain海马神经元损伤最为严重。结论NO和NOS在脑缺血早期造成脑组织损伤较为严重。

高脂膳食对小鼠脑内铁调节蛋白-2基因表达的影响531-532

摘要：目的探讨高脂膳食对脑老化及脑铁代谢的影响，为合理膳食预防脑老化提供科学依据。方法24只ICR小鼠分4组：脑老化模型组、高脂膳食组、脑老化＋高脂膳食组和对照组。连续造模10W后，以RT-PCR法检测各组脑内铁调节蛋白-2（IRP-2）表达水平。结果脑老化组和高脂膳食组小鼠IRP-2表达水平均低于对照组且差异显著（P〈0．05）；高脂膳食组与脑老化模型组、脑老化＋高脂膳食组间IRP-2表达无显著差异（P〉0．05）。结论高脂膳食可降低小鼠脑内IRP-2表达，这可能是高脂膳食诱发脑老化及神经退行性变的机制之一。

延肾一号冲剂抗大鼠肾缺血再灌注氧化损伤的研究533-535

摘要：目的观察延肾一号冲剂对肾缺血再灌注（I／R）损伤大鼠肾组织活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、Ca^2-Mg^2＋ ATP酶活性的变化，探讨其抗肾I／R损伤的机制。方法72只Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、治疗组，各24只。治疗组给予延肾一号冲剂，假手术组及对照组灌以相应量的生理盐水。分别检测缺血1h、再灌注24、48h时尿素氮、肌酐，ROS、MDA含量及SOD、Ca^2＋ -Mg^2＋ ATP酶活性的变化。结果再灌注24、48h时治疗组、对照组与假手术组血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）比较均有显著升高（P〈0.01）；再灌注24h时对照组SOD、Ca^2＋ Mg^2＋ ATP酶活性与48h时相比活性明显降低（P〈0．05），再灌注24h时治疗组与对照组相比SOD、Ca^2＋ -Mg“ATP酶明显升高（P〈0．05）；再灌注24h时，治疗组MDA、ROS则显著低于对照组（P〈0．01），再灌注48h时，治疗组与对照组相比仍有显著差异（P〈0．01）。结论氧化损伤是导致肾I／R损伤的重要原因；氧化损伤主要发生在I／R 24h；延肾一号冲剂通过升高SOD、Ca^2＋ -Mg^2＋ ATP酶的活性，减少MDA、ROS产生，减少其对肾脏的损伤作用。

肿瘤坏死因子-α在大鼠急性脊髓损伤中的表达535-537

摘要：目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α与大鼠急性脊髓损伤的关系。方法按改良Allen’s撞击法制作脊髓损伤模型，用ELISA方法检测大鼠脊髓损伤0、24、48、72、96h TNF-α的表达，并用RT-PCR法测定上述大鼠损伤组织中TNF-α mRNA表达量。结果ELISA法检测结果显示，在脊髓损伤24h后，TNF-α表达明显增加，与0h组比较有显著性差异（P〈0．05）。与24h组比较，48、72h及96h TNF-α表达进一步明显增加（P〈0．05）。RT-PCR结果显示，在脊髓损伤24h后，TNF-α mRNA表达明显增加，与0h组比较有显著性差异（P〈0．05）；随着损伤时间的延长，TNF-α mRNA在损伤后24、48、72h及96h表达并无明显差异。结论TNF-α可能是加重脊髓损伤的一个重要因素，抑制TNF-α的表达可能会成为治疗脊髓损伤的一个有用手段。

康欣口服液对老年小鼠脑线粒体DNA缺失突变的影响537-539

摘要：目的研究补肾健脾养血活血法对Balb／c小鼠脑线粒体DNA（mtDNA）缺失突变的影响。方法近交系Balb／c老年小鼠（14个月）分别灌胃给予生理盐水（老年空白对照组），康欣口服液（老年康欣口服液组），连续4个月后处死，提取脑组织的mtDNA。采用PCR技术分别扩增野生型和缺失型的mtDN段，运用凝胶成像仪进行光密度扫描，比较两组缺失型mtDNA／野生型mtDNA的光密度比值。结果近交系老年Balb／c小鼠脑mtDNA中存在明显的片段缺失，与老年空白对照组相比，康欣口服液能显著降低老年Balb／c小鼠mtDNA的缺失率（P〈0．001）。结论补肾健脾养血活血法可以抑制老年小鼠脑mtDNA的缺失。

吡那地尔对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响540-542

摘要：目的探讨吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法20只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、K_ATP开放剂组及K_ATP开放剂＋阻断剂组，每组5只。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型，应用TUNEL法检测神经元凋亡，应用免疫组化方法检测Bcl-2及Bax蛋白表达，同时观察神经功能缺损评分。结果K_ATP开放剂组与对照组及K_ATP开放剂＋阻断剂组相比，神经功能缺损程度显著减轻（P〈0．05），神经元凋亡数显著减少（P〈0．01），Bcl-2蛋白表达显著增多，Bax蛋白表达显著减少（P〈0．01），对照组与与K_ATP开放剂＋阻断剂组之间无显著性差异。结论K_ATP通道开放剂能显著增加脑缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达，减少Bax蛋白表达，抑制神经元凋亡，改善神经功能缺损程度，对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。

靶向survivin的RNAi联合X线照射对肺腺癌A549细胞周期、凋亡及增殖的影响542-544

摘要：目的构建靶向生存素（survivin）基因的RNA干扰（RNAi）载体，观察其联合X射线照射对肺腺癌A549细胞周期、凋亡及增殖影响。方法根据GenBank中survivin的cDNA序列设计干扰序列，构建干扰survivin的重组干扰质粒pGenesil2-survivin。酶切、测序鉴定正确后，干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞，联合5 Gy射线照射，应用PI单染、流式细胞仪检测细胞周期与凋亡变化，MTT检测细胞增殖的变化。结果酶切和测序结果显示，载体构建正确；转染空载体pGenesil2对细胞G0／G1期、S期及凋亡，增殖能力影响不大，降低了G2／M期（P〈0.05）；而干扰质粒pGenesil2-survivin能延长G0／G1期，缩短S期，诱导细胞凋亡增加，降低细胞增殖能力（P〈0．05）；5 Gy照射对细胞周期影响不大，增加细胞凋亡，降低增殖能力（P〈0．05）；转染pGenesil2-smwivin后，进行5 GyX射线照射，延长G0／G1期，缩短S期，诱导细胞凋亡增加，降低细胞增殖能力（P〈0．05，P〈0．01）。结论靶向SUrvivin的RNAi可延长G0／G1期，缩短S期，增加细胞凋亡，降低细胞增殖能力，X射线照射能够增强该质粒的作用。

雷公藤对糖尿病大鼠肾皮质GLUT-1 mRNA表达的影响及其意义545-548

摘要：目的探讨雷公藤对糖尿病（DM）大鼠肾脏GLUT-1 mRNA表达的影响及其意义。方法采用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法建立DM动物模型。将46只3月龄160～190g大鼠（雌雄各半）随机分为正常对照组，DM模型组，雷公藤组（6．7mg·kg^-1·d^-1）。第4、8、12周末各组处死4只大鼠并收集标本，记录体重、右肾重、检测血糖、血尿素氮、肌酐、24h尿蛋白定量。用RT-PCR方法检测肾皮质GLUT-1 mRNA表达水平。肾组织行HE、PAS染色。结果①与正常对照组相比，DM模型组大鼠造模成功后血糖明显增高（P〈0．01），但24h尿蛋白排泄量无明显增高（P〉0．05）；4W时体重、肾重指数、尿素氮、肌酐、24h尿蛋白排泄量、肾皮质GLUT-1 mRNA表达均明显增加（P均〈0．01），12W时增加更加显著。与DM模型组相比，雷公藤组8W时血糖、尿素氮、肌酐降低（P均〈0．05），24h尿蛋白排泄量和肾皮质GLUT-1 mRNA表达量均明显下降（P均〈0．01）；12w时体重增加（P〈0．05），肾重指数才明显下降（P〈0．01）。②肾组织HE、PAS染色病理学观察：DM模型组光镜下肾小球肥大，系膜细胞增生，系膜基质弥漫性或结节性增多，肾小球、肾小管基底膜增厚，而雷公藤组这些病理改变明显减轻。结论雷公藤能明显减少DM大鼠尿蛋白排泄量，抑制肾脏肥大、减轻肾脏的纤维化硬化程度。其机制可能是下调GLUT-1 mRNA的表达量及功能活性，最终延缓DN的发展。

迷迭香酸对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的研究549-551

摘要：目的观察迷迭香酸对D-半乳糖诱导的衰老小鼠的抗氧化作用。方法昆明小鼠连续6w颈背部皮下注射D-半乳糖1mg·g^-1·d^-1复制亚急性衰老小鼠模型。造模的过程中，3个给药组（低、中、高剂量）分别以100、200和400mg·kg^-1·d^-1的迷迭香酸分析纯灌胃；同时设立3个含有等效剂量迷迭香酸的迷迭香提取物给药组（1000、2000和4000mg·kg^-1·d^-1）对比灌胃。实验6W后处死动物，测定血清和脑中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、甘油三酯（TG）水平；以及进行耐缺氧实验。结果高剂量的迷迭香酸能明显提高衰老小鼠血清和脑中的SOD活力（P〈0．01）、GSH-Px活性（P〈0．05），降低MDA含量（P〈0．05）和TG水平（P〈0．05），且能明显延长小鼠常压耐缺氧时间（P〈0．05）。结论迷迭香酸通过提高抗氧化酶活性，清除自由基，减少过氧化脂质生成而抗衰老。

阿托伐他汀对Aβ_1-42诱导AD模型抗凋亡作用的研究551-554

摘要：目的探讨阿托伐他汀对Aβ_1-42诱导阿尔茨海默病（AD）大鼠模型学习记忆功能及神经细胞凋亡的影响。方法采用侧脑室注射Aβ_1-42的方法制备大鼠痴呆模型，阿托伐他汀5mg·kg^-1·d^-1灌胃为治疗组，并设假手术组作为对照组。水迷宫实验观测大鼠的行为学变化，免疫组织化学方法测定海马区caspase-3的表达，尼氏染色观察海马区神经元凋亡情况，透射电镜观察海马区神经元超微结构的变化。结果模型组大鼠的学习记忆成绩下降，半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）生成增多（P〈0．01），凋亡神经元增多；阿托伐他汀治疗组与模型组大鼠相比较，学习和记忆成绩有所改善，海马区caspase-3生成减少（P〈0．01），凋亡神经元减少。细胞形态学观察显示，与模型组相比，阿托伐他汀治疗组模型海马区神经细胞损伤减轻。结论阿托伐他汀可以减少AD大鼠模型海马区caspase-3的生成，减少神经元的凋亡，减轻神经细胞损伤，改善其学习和记忆能力。

人参糖肽对糖基化抑制作用的体外研究557-559

摘要：目的研究人参糖肽对体外糖基化的抑制作用。方法分别应用血红蛋白-8-葡萄糖酸内酯实验、牛血清白蛋白-葡萄糖实验和N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖实验，体外观察人参糖肽注射液（2、4、8、16和32mg／m1）对糖基化产物形成的抑制效果。结果血红蛋白-8-葡萄糖酸内酯实验显示，人参糖肽以浓度依赖方式抑制早期糖基化产物糖化血红蛋白A1c（HbA1c）的产生。牛血清白蛋白-葡萄糖实验和N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖实验表明，人参糖肽以浓度依赖方式明显抑制晚期糖基化终产物的形成。结论人参糖肽对体外糖基化有明显抑制作用。

人参二醇皂苷对重症胰腺炎急性肺损伤时水通道蛋白表达的影响561-562

摘要：目的探讨人参二醇皂苷（panaxadiols，PDS）对急性重症胰腺炎（SAP）急性肺损伤时的水通道蛋白（AQP-1）影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组（SO组）、SAP组、地塞米松组（DEX组）和PDS组，每组8只。SAP组、DEX组和PDS组大鼠胰管逆行注射5％牛磺酸黄制备大鼠胰腺炎模型；SO组手术操作同其他组，但不向胰管内注射5％牛磺酸钠。制模成功后DEX组腹腔注入DEX，剂量为0．5mg／100g；PDS组腹腔注入PDS，剂量为2．5mg／100g。模型制作6h后杀鼠，测定血清淀粉酶、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6），肺脏湿／于重比值；应用RT-PCR测定肺脏AQP-1 mRNA的水平，应用蛋白印记杂交方法观察AQP-1蛋白改变情况。结果应用PDS治疗后AQP-1在mRNA和蛋白水平均有所增加，减轻了肺水肿、肺损伤。结论在SAP时直用PDS可以抑制TNF-α、IL-6表达，减轻血液浓缩，改善微循环，增加肺组织水通道蛋白1的表达，从而减轻肺水肿、肺损伤。

激活素A对人皮肤微血管内皮细胞周期的影响563-564

摘要：目的观察激活素A对人皮肤微血管内皮细胞周期的影响，探讨激活素A抗新生血管形成的可行性。方法传代培养人皮肤微血管内皮细胞，以脂质体介导将真核表达质粒pEGFP-ActivinA转染该细胞，MTT法检测基因转染对人皮肤微血管内皮细胞增殖的影响，流式细胞仪检测激活素A基因转染后对细胞增殖周期的影响。结果MTT结果显示，转染后48h与72h，转染组与对照组比较细胞增殖有明显的抑制（P〈0．05）；流式细胞仪检测结果显示，激活素A基因转染组G0／G1细胞比例增加，S期细胞比例减少。结论激活素A能够抑制人皮肤微血管内皮细胞的增殖，是一种潜在的抗新生血管药物。

糖尿病大鼠局灶脑缺血AGEs及其受体的表达565-566

摘要：目的观察晚期糖基化终产物（Advanced glycation endproducts，AGEs）及其受体（Recepter of advanced glycation endproducts，RAGE）在糖尿病大鼠局灶脑缺血中的表达。方法雄性Wistar大鼠50只，随机取25只应用链脲佐菌素（STZ）法制备DM模型后，正常组与DM组各取20只，应用线栓法制备局灶脑缺血模型即大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。根据缺血不同时间又分为单纯缺血组（MCAO组）1、3、6、24h组，DM局灶脑缺血组（DM＋MCAO组）1、3、6、24h组，每组5只。采用SP免疫组化检测AGEs、RAGE在缺血不同时间脑组织中的表达。结果正常对照组有较少AGEs和RAGE表达，DM组及MCAO组表达增加，DM＋MACO组明显增加，且在缺血1h逐渐开始增加，6h略有下降，24h表达再次增加。结论AGEs及RAGE的表达参与了DM大鼠局灶脑缺血损伤。