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摘要:目的探讨低氧环境下天冬多糖对人肝癌细胞生长的影响及初步作用机制。方法氯化钴(CoCl2)化学模拟低氧下培养4种人肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721及Bel-7402),加入不同浓度的天冬多糖(0mg/m L、0.9 mg/m L、1.2 mg/m L、1.8 mg/m L、2.4 mg/m L、2.7 mg/m L、3.6 mg/m L)培养,CCK-8法检测天冬多糖对4种人肝癌细胞株细胞增殖的影响,根据IC50选取0.9 mg/m L、1.8 mg/m L、2.7 mg/m L作为后续实验的天冬多糖低、中、高剂量浓度。后续实验4种细胞均设6组:常氧对照组只加入培养液培养;低氧对照组加入200μmol/L CoCl2培养;低氧低剂量组加入200μmol/L CoCl2+0.9 mg/m L天冬多糖培养;低氧中剂量组加入200μmol/L CoCl2+1.8 mg/m L天冬多糖培养;低氧高剂量组加入200μmol/L CoCl2+2.7 mg/m L天冬多糖培养;常氧高剂量组加入2.7 mg/m L天冬多糖培养。培养24 h后,Real-time PCR检测各组血管内皮生长因子(VEGF)、Bax、Bcl-2 mRNA表达情况,Western-blot方法检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、VEGF、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果低氧下天冬多糖可明显抑制人肝癌细胞株的生长,且抑制作用呈剂量依赖性。天冬多糖可明显抑制HIF-1α、VEGF、MMP-9蛋白表达及VEGF mRNA、Bcl-2mRNA表达,促进Cleaced Caspase-3蛋白及Bax mRNA表达,且低氧下高剂量作用最明显。结论天冬多糖在体外低氧条件下能抑制肝癌细胞的生长,其可能通过抑制HIF-1α/VEGF表达及肝癌细胞的侵袭、促进肝癌细胞凋亡起到抗肝癌的作用。
摘要:目的探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者肝纤维化血清学指标与肝纤维化分期的关系。方法对316例慢乙肝患者(HBeAg阳性者242例、阴性者74例)通过肝穿刺活检组织病理结果确定肝纤维化分期,按照肝纤维化分期将患者分为S1、S2、S3及S4组。采取化学发光免疫分析技术检测患者血清中肝纤4项[透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氨端肽(PCⅢNP)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)及层黏连蛋白(LN)]水平;采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和天冬氨酸氨基转氨酶(AST)水平。结果 316例慢乙肝患者中,HA、PCⅢNP、C-Ⅳ、LN、ALT、AST水平随肝纤维化分期加重均不断增高,其中各期PCⅢNP、LN水平基本上在正常参考范围内,而HA、C-Ⅳ在S2期即开始出现异常;ALT、AST的含量在S1期即异常升高。242例HBeAg阳性慢乙肝患者血清肝纤四项及转氨酶水平随肝纤维化分期加重均不断增高,与上述总体研究结果基本一致。74例HBeAg阴性慢乙肝患者中,肝纤四项中只有C-Ⅳ在S3期异常升高,而HA和LN均在S4期才出现异常,ALT和AST分别在S1期和S2期即出现异常升高。结论肝纤四项对肝纤维分期的诊断有一定临床意义,其中HA、C-Ⅳ较灵敏,而PCⅢNP最不敏感。另外,肝纤四项联合ALT、AST检测更有利于肝纤维化的早期诊断。肝纤四项诊断HBeAg阳性患者肝纤维化的作用优于HBeAg阴性患者。