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摘要:目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,实现EGFP基因在CHO细胞ACTB基因座位置定点整合和表达,建立基于CRISPR/Cas9技术的外源基因定点整合和表达技术。方法:根据CHO细胞β-actin(ACTB)基因起始密码子区基因序列,设计相应CRISPR/Cas9系统,同时构建含有ACTB同源臂和EGFP基因的同源供体载体(donor vector),通过脂质体转染法同时转染CRISPR/Cas9和供体载体,流式分选EGFP阳性细胞,分析基因编辑技术在EGFP基因定点整合和表达方面的可行性。结果:构建了能有效切割CHO细胞ACTB基因的CRISPR/Cas9系统,筛选到EGFP定点整合至ACTB基因座并有效表达的细胞,ACTB基因缺失后由于γ-actin代偿性表达增强,ACTB缺失细胞形态和生长未受影响。结论:单纯依靠基因编辑技术可以实现1 kb以内的基因同源置换,但效率较低,如实现更大片段的外源基因置换,需借助其它实验技术。
摘要:目的:探讨miR-506和PI3K/AKT信号通路在自发性高血压大鼠心脏重构中的作用。方法:将12只雄性自发性高血压大鼠(Spontaneous Hypertension Rat, SHR)随机分为2组,每组6只。分别为SHR模型组和治疗组(卡托普利,30 mg·kg^-1),6只健康WKY大鼠作为空白对照组。SHR模型组和空白对照组灌胃等体积生理盐水,连续给药8周,采用尾动脉测压法测定给药前后各组大鼠血压,采用qRT-PCR法检测各组大鼠心肌miR-506表达量,并检测大鼠心肌组织中SOD和GPx mRNA表达水平,免疫印迹检测大鼠心肌中p-PI3K和p-AKT的蛋白表达量。结果:SHR模型组血压为(184.79±3.35)mmHg,与空白对照组比较显著升高(P〈0.05),治疗组血压为(133.57±1.43)mm Hg,与SHR模型组相比均显著降低(P〈0.05)。SHR模型组大鼠心肌中miR-506、SOD、GPx的RNA相对表达量分别为(0.36±0.05)、(0.27±0.04)和(0.32±0.02),与空白对照组比较显著降低(P〈0.05),而p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著降低(P〈0.05),与SHR模型组比较,治疗组大鼠心肌中miR-506以及SOD、GPx的RNA水平显著升高(P〈0.05),p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著升高(P〈0.05)。结论:在卡托普利治疗高血压的过程中,miR-506可能通过抑制PI3K/AKT信号通路提高机体的抗氧化能力促进SHR心脏重塑。
摘要:目的:研究不同浓度甲基莲心碱对骨肉瘤143B细胞增值迁移的影响及其诱导凋亡的相关机制。方法:不同浓度甲基莲心碱处理骨肉瘤143B之后,CCK-8法检测甲基莲心碱对骨肉瘤143B细胞的增值抑制作用;细胞划痕实验检测不同浓度甲基莲心碱对骨肉瘤143B细胞迁移的影响;流式细胞术检测甲基莲心碱对癌细胞的凋亡率和周期分布;Western Blot检测甲基莲心碱对癌细胞相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:CCK-8显示甲基莲心碱能抑制骨肉瘤143B细胞的增值且以浓度和时间依赖的方式(P〈0.05);给药组(20, 40, 60μmol·L^-1)24 h细胞迁移率分别为(62.35±4.15)%,(40.74±4.80)%,(25.10±5.52)%,较对照组(75.89±5.24)%明显降低(P〈0.05);流式细胞术结果显示甲基莲心碱能使骨肉瘤143B细胞周期阻滞于G0/G1期,且呈剂量依赖性诱导癌细胞凋亡(P〈0.05);Western Blot证明甲基莲心碱可促进癌细胞中促凋亡蛋白Bax的表达,而降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达(P〈0.05)。结论:甲基莲心碱可能通过激活线粒体凋亡相关蛋白的表达,发挥抗骨肉瘤143B的作用。
摘要:目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)是否通过抑制氧化应激反应减轻七氟烷所致神经元损伤。方法:HT22小鼠海马神经元分为Con组、DHA组和Sevo组和DHA+Sevo组,药物处理各组细胞24 h后,在倒置相差显微镜下拍照记录各组细胞形态改变,采用MTT法检测神经元存活情况,检测各组培养基中LDH, NO, SOD及MDA的含量。结果:CON组和DHA组细胞形态正常,Sevo组细胞皱缩,胞体破裂,正常形态消失,而DHA+Sevo组细胞形态基本正常,皱缩破裂的细胞较少;与CON组和DHA组相比,Sevo组HT22细胞存活率下降至CON组的25.79%,培养液中LDH的漏出量显著增加至CON组的400.15%,SOD活力下降至CON组的30.96%,培养液中NO及MDA的含量分别增加至CON组的507.62%和342.15%(P〈0.05);而与Sevo组相比,DHA+Sevo组HT22细胞存活率增加至CON组的75.68%,培养液中LDH的漏出量下降至CON组的175.68%,SOD活力增加至CON组的70.48%,培养液中NO及MDA的含量分别下降至CON组的355.80%和192.27%(P〈0.05)。结论:DHA通过抗氧化应激反应减轻七氟烷对HT22细胞的损伤。
摘要:目的:探讨口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中B7-H1和B7-H4的表达及其临床意义,并为OSCC的临床诊断、治疗、判断预后及预防等提供依据。方法:采用免疫组织化学S-P法检测B7-H1及B7-H4在60例OSCC及20例非肿瘤患者正常口腔黏膜组织(NOM)中的表达情况,分析两者与OSCC临床病理特征的相关性。结果:B7-H1在OSCC组织中表达显著高于在NOM组织中表达(29例,48.3%v4例,20%,x^2=4.969,P〈0.05);B7-H4在OSCC组织中表达亦显著高于在NOM组织中表达(31例,51.7%v5例,25%,x^2=4.310,P〈0.05)。B7-H1与B7-H4在OSCC组织的表达都与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关(P〈0.05),而与年龄、性别及肿瘤直径大小等无关。OSCC组织中B7-H1和B7-H4的高表达呈显著性正相关性(x^2=5.613 P〈0.05),60例组织中B7-H1和B7-H4共表达现象有11例(18.3%),NOM中未发现两者共表达现象。结论:B7-H1和B7-H4过表达与OSCC发生、发展及预后有关,可以作为预后指标。
摘要:目的:利用Cre-LoxP重组酶系统构建成纤维细胞中Ddr2特异性敲除的纯合子小鼠并鉴定,为进一步研究Ddr2在肺纤维化中的作用提供基础。方法:将购买的Ddr2 loxp小鼠和成纤维细胞特异表达的S100a4-Cre小鼠分别繁殖与鉴定,然后将两种小鼠杂交与鉴定,最终得到基因型为Cre^× Ddr2^flox/flox的纯合子小鼠就是在成纤维细胞中Ddr2条件性敲除小鼠。结果:成功繁殖并用PCR技术准确鉴定了基因型为Cre^× Ddr2^flox/flox的纯合子小鼠,Western blot结果表明纯合子小鼠的肺成纤维细胞中Ddr2已缺失。结论:本研究利用Cre-LoxP系统成功构建了在成纤维细胞中Ddr2特异性敲除的纯合子小鼠,为进一步研究Ddr2在肺纤维化发展中的机制提供了研究平台。
摘要:目的:探讨有氧运动对自发性高血压大鼠心肌中高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)/Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)炎症通路的影响。方法:成年雄性大鼠分为三组:同源正常血压大鼠(Wistar-Kyoto rats,WKY),自发性高血压大鼠(spontaneoully hypertensive rat, SHR),自发性高血压大鼠运动组(SHR+exercise,SHR+EX)。运动为中等强度跑台运动,自制跑台,倾斜角设置为10度,运动强度逐步增强,持续12周。尾动脉检测血压,收集左心室,Masson染色检测心肌组织纤维化水平,RT-PCR法检测心肌中纤维化相关基因的m RNA水平,ELISA法检测炎症因子白介素6(Interleukin 6, IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)的蛋白水平,Western blot法检测HMGB1和TLR4的蛋白表达。结果:有氧运动可以明显降低SHR大鼠心肌中HMGB1(P〈0.05)和TLR4(P〈0.05)的蛋白表达以及炎症因子IL-6(P〈0.05)和TNF-α(P〈0.05)的蛋白水平。经过的有氧运动之后,SHR大鼠的体重(P〈0.05)、收缩压(P〈0.05)、舒张压明显降低(P〈0.05);心肌纤维化水平和心肌中I型胶原(P〈0.05)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β,P〈0.05)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA,P〈0.05)的m RNA水平出现显著下降。结论:有氧运动可抑制自发性高血压大鼠心肌中HMGB1/TLR4炎症通路。
摘要:目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)诱导乳腺癌细胞耐药及其作用机制。方法:从临床样本中分离培养CAFs,获取条件培养基,并纯化外泌体。使用CAFs条件培养基或CAFs外泌体与CD44+的乳腺癌干细胞(CSCs)和CD44-的非干细胞亚群共培养,并用5氟尿嘧啶(5-FU)处理共培养的细胞,通过成球实验和CCK8实验检测细胞的自我更新能力和存活能力。抑制细胞中ABCB5的表达,检测5-FU对细胞存活能力的影响。结果:CAFs条件培养或外泌体处理的CSCs自我更新能力和对5-FU的耐药能力更强,成球能力和对5-FU耐药性上升约1.5-2倍。CAFs外泌体可提高CSCs中ABCB5的表达水平约4-5倍,抑制ABCB5可降低CSCs的耐药性至原来的约60-80%。结论:CAFs通过旁分泌外泌体增强CSCs的自我更新能力并通过上调CSCs中ABCB5的表达水平促进其对化疗药物的抵抗。
摘要:目的:分析应用经皮氩氦冷冻消融术姑息性治疗恶性实体肿瘤后肿瘤进展的相关因素。方法:回顾性搜集2012年8月-2017年6月上海市第一人民医院收治的因患有恶性实体肿瘤行姑息性经皮氩氦冷冻消融术患者的相关临床资料,并随访至2017年11月,搜集患者随访结束时的临床资料。将总消融例数根据消融后肿瘤进展情况分为比较肿瘤进展和肿瘤非进展组,比较患者的一般临床特征。将消融后进展的病例列出,比较消融前和进展时相关检验结果差异,探寻肿瘤进展原因。结果:共82次经皮氩氦冷冻消融术在2012年8月-2017年6月间进行,35名患者所行的41次消融被纳入本研究,所有病人接受的经皮氩氦冷冻消融术次数均不大于2次,41次经皮氩氦冷冻消融术共消融42枚病灶,其中一次消融术同时消融了2枚肝内病灶。35名患者按照肿瘤全身进展与否分为肿瘤进展组(n=26)及肿瘤非进展组(n=9),有统计学差异的指标包括:消融处为原发肿瘤,随访截止/进展时间,消融前至随访截止/肿瘤进展时存在化疗相关性粒细胞缺乏,消融前粒细胞与淋巴细胞比值(ratio of peripheral neutrophils to lymphocyte,NLR)〉3。对于消融后判定为全身肿瘤进展的30次经皮氩氦冷冻消融术,对比消融前及进展时的各项指标,有统计学意义的指标是血浆白蛋白值和NLR〉3。最后,应用上述有统计学意义的计数资料通过Cox回归分析评定为肿瘤进展的30次消融的无进展生存时间,结果均无统计学意义。结论:作为综合治疗的一部分,氩氦冷冻消融术姑息性治疗恶性实体肿瘤后的肿瘤进展因素中,对于原发肿瘤的消融是肿瘤进展的不利因素,化疗相关性粒细胞缺乏、NLR〉3、低血浆白蛋白水平是肿瘤进展的有利因素。
摘要:目的:探讨心率减速力(DC)对慢性心力衰竭患者心源性死亡的预测价值。方法:选择208例慢性心力衰竭(CHF)患者和80例正常对照者为研究对象,检测和比较两组DC、心率变异性(HRV)、左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末内径(LVEDD)、C反应蛋白(CRP)和平均心率(mH R)等指标,随访6-18个月,终点事件是心源性死亡。结果:心衰患者DC较健康对照组明显下降(4.39±1.05 ms vs. 6.36±0.32 ms, P〈0.001),慢性心衰患者发生心源性性死亡较存活着DC明显减低(3.52±1.83 ms vs. 4.53±0.85 ms,P=0.002),单变量分析年龄≥65岁、LVEF≤30%、CRP≥11.8 mg/L、SDNN≤70 ms和平均心率(mHR)≥75次/min和DC〈4.5 ms等6个变量对终点事件有预测价值;多变量分析结果显示仅年龄≥65岁、LVEF≤30%、SDNN≤70 ms和DC〈4.5 ms对心源性死亡有预测价值(P〈0.05),DC相对危险度为3.14。结论:心力衰竭患者DC减低,DC是心功能慢性心力衰竭患者心源性死亡的独立危险因子。
摘要:目的:探讨慢性心力衰竭(CHF)患者彩色多普勒超声的心功能参数与血清同型半胱氨酸水平的相关性。方法:选取2016年2月至2017年6月期间我院收治的CHF患者73例作为研究组,选取同期体检的健康志愿者70例作为对照组。检测两组血清同型半胱氨酸(Hcy)及氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)水平,采用彩色多普勒超声测定两组心脏左室射血分数(LVEF)及左室舒张末期内径(LVEDd)。分析CHF患者血清Hcy水平与NT-proBNP、LVEF、LVEDd的相关性,观察不同血清Hcy水平CHF患者心血管事件发生情况。结果:研究组血清Hcy、NT-proBNP及LVEDd显著高于对照组,LVEF显著低于对照组(P〈0.05)。Ⅳ级患者血清Hcy、NT-proBNP、LVEDd水平高于Ⅱ级与Ⅲ级,且Ⅲ级高于Ⅱ级(P〈0.05);Ⅳ级患者LVEF水平低于Ⅱ级与Ⅲ级,且Ⅲ级低于Ⅱ级(P〈0.05)。由Pearson相关性分析可得,CHF患者血清Hcy水平与血清NT-proBNP、LVEDd呈正相关,与LVEF呈负相关(P〈0.05)。血清Hcy水平高于25μmol/L的患者心血管事件发生率为31.43%,血清Hcy水平在15μmol/L-25μmol/L范围内的患者心血管事件发生率为10.53%,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:CHF患者血清Hcy、NT-proBNP、LVEDd随心功能恶化程度增加而升高,LVEF随之降低,且Hcy水平越高,患者预后越差。
摘要:目的:探讨新辅助化疗联合肿瘤细胞减灭术对晚期卵巢癌患者的疗效及对血流参数的影响。方法:选取2015年1月-2017年6月我院诊治的158例晚期卵巢癌患者,按治疗方法分为对照组、观察组,各79例。对照组使用肿瘤细胞减灭术进行常规卵巢癌治疗,观察组在常规基础上联合新辅助化疗进行治疗。比较两组临床疗效、治疗前后血流动力学参数的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组化疗的表观缓解率(83.54%)显著高于对照组(62.03%)(P〈0.05)。两组患者治疗前各血流动力学参数比较差异无统计学意义(P〉0.05),观察组术后1、4、12 w颈动脉收缩期最大流速(peak systolic velocity,PSV)均显著低于对照组(P〈0.05),血管阻力指数(resisitance index,RI)、搏动指数(pulsatility index,PI)均显著高于对照组(P〈0.05)。两组患者在治疗期间出现的心脏毒性反应的发生率比较差异无统计学意义(P〉0.05),对照组患者治疗期间骨髓抑制、恶心呕吐、肝脏损伤、肾脏损伤的不良反应程度显著低于观察组(P〈0.05)。结论:新辅助化疗联合肿瘤细胞减灭术能够显著提高患者的临床疗效,改善卵巢的血流动力学参数。
摘要:目的:探讨自由呼吸状态下冠状动脉CT血管成像(Coronary CT Angiography, CCTA)的可行性。方法:收集187例疑似冠心病患者,所有患者均行CCTA检查,其中108例采用传统屏气法扫描,79例采用自由呼吸法扫描。扫描采用前门控预估法(Auto Gating)测得冠脉扫描期相,设置扫描范围和参数(准直宽度256×0.625、224×0.625、192×0.625,球管转速0.28 s,kV100,智能管电流,噪声指数25)。对比剂浓度为370 mg I/mL,注药量为0.86 mL/kg,注药时间维持12 s。由2名高年资放射科医师对冠状动脉图像采用5分法评分。测量升主动脉根部(冠状动脉左主干开口水平)和胸壁肌肉的CT值及标准差,计算图像的信噪比和对比噪声比。结果:自由呼吸状态下右冠状动脉(Right coronary artery, RCA)、左前降支(Left ascending artery, LAD)、左旋支(Left circumflex artery, LCx)的优良血管率分别为46.5%(87/187)、51.9%(97/187)及48.7%(91/187);屏气状态下RCA、LAD、LCx的优良血管率分别为32.6%(61/187)、36.4%(68/187)及36.9%(69/187),两组之间无统计学差异(Fisher值分别为6.94、1.54、0.81,P均〉0.05)。采用自由呼吸和屏气状态下CCTA检查的主动脉CT值、噪声、SNR和CNR均无统计学差异(P均〉0.05)。结论:采用超宽探测器CT,自由呼吸法CCTA可完全取代传统屏气法CCTA检查,从而降低受检者的配合难度,提高工作效率。
摘要:目的:研究卡托普利联合坎地沙坦治疗糖尿病肾病患者的临床疗效及对血浆内皮素(Endothelin,ET)、D-二聚体(D-Dimer,D-D)、同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、肾上腺髓质素(Adrenal medulla,ADM)、纤维蛋白原(Fibrinogen,FIB)的影响。方法:选择2016年1月至2017年8月在我院治疗的糖尿病肾病患者72例,根据不同的治疗方法分为观察组和对照组。对照组采用卡托普利治疗,观察组在对照组的基础上联用坎地沙坦治疗,观察和比较两组患者的临床治疗效果,治疗前后ET、D-D、Hcy、ADM、FIB水平、肾功能及空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2小时血糖浓度(2 hours Plas ma Glucose,2hPG)、糖化血红蛋白(Hemoglobin A1c,HbA1C)水平的变化。结果:治疗后,观察组总有效率为88.89%,明显高于对照组69.44%(P〈0.05);观察组血浆ET、D-D、Hcy、ADM、FIB、FPG、2hPG、HbA1C水平、24 h尿总蛋白及尿白蛋白排泄率均显著低于对照组(P〈0.05)。结论:卡托普利联合坎地沙坦治疗糖尿病肾病患者的临床疗效明显优于单用卡托普利治疗,可助于降糖、降压并有效保护患者肾脏功能。
摘要:目的:探讨孟鲁司特钠联合沙丁胺醇治疗重度支气管哮喘的临床效果及对患者血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)、过氧化脂质/过氧化物酶(LPO)、呼出气一氧化氮(FeNO)水平及肺功能的影响。方法:选择2014年5月到2017年5月我院接诊的重度支气管哮喘患者80例作为研究对象,以随机数表法分为观察组(n=40)和对照组(n=40)。对照组使用沙丁胺醇治疗,观察组在对照组的基础上使用孟鲁司特钠进行治疗。比较两组的临床疗效、治疗前后肺功能、血清ECP、LPO、FeNO水平的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组临床疗效总有效率为92.20%,明显高于对照组(70.00%,P〈0.05);观察组第治疗后秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC水平均明显高于对照组(P〈0.05),血清ECP、LPO、FeNO水平均明显低于对照组(P〈0.05)。观察组不良反应总发生率为10.00%,显著低于对照组的30.00%(P〈0.05)。结论:孟鲁司特钠联合沙丁胺醇治疗重度支气管哮喘患者的临床效果明显优于单用沙丁胺醇治疗,其可有效改善患者的肺功能,可能与其显著降低患者血清ECP、LPO、FeNO水平有关。
摘要:目的:探讨帕瑞昔布联合股神经阻滞用于膝关节置换术后镇痛的效果及对患者免疫功能的影响。方法:选择2016年10月-2017年10月我院骨科住院部收治并行单侧膝关节置换的患者108例,按镇痛方式分为对照组和观察组各54例。对照组患者采用单纯股神经阻滞,观察组采用股神经阻滞联合帕瑞昔布。比较两组静息及活动状态下术后VAS评分、术后膝关节HSS评分、不良反应的发生情况及免疫指标的变化情况。结果:静息及活动状态下,观察组术后VAS评分均明显低于对照组(P均〈0.05),膝关节HSS评分显著高于对照组(P〈0.05)。两组术后不良反应的发生情况比较差异无统计学意义(P〉0.05)。手术结束时,两组CD4^+较麻醉前均显著下降(P均〈0.05);术后72 h,两组CD4^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+较麻醉前均无显著差异(P均〉0.05)。观察组术后72 h CD4^+比对照组高(P〈0.05),而CD4^+/CD8^+显著低于对照组(P〈0.05)。结论:帕瑞昔布联合股神经阻滞对膝关节置换术后镇痛临床效果好,利于保护和改善患者免疫功能,促进膝关节功能的康复。
摘要:目的:探讨通道大小对经皮肾镜取石患者围手术期出血的影响及治疗策略。方法:回顾性分析2016年1月至2017年1月在我院行F24和F18通道的经皮肾镜取石术的189例患者临床资料,分别比较具有不同临床特征患者围手术期出血的发生情况。结果:95例F24通道患者平均出血量为125±19.6 mL,其中5人进行输血治疗;94例F18通道患者平均出血量为103±17.6m L,其中3人进行输血治疗。F18通道经皮肾镜取石术的出血组和非出血组糖尿病、高血压的发生率、结石表面积、通道数量、手术时间比较差异均具有统计学意义(P〈0.05)。F24通道经皮肾镜取石术的出血组和非出血组孤立肾、高血压发生率、结石面积、肾实质厚度、通道数量和手术时间比较差异均具有统计学意义(P〈0.05)。F18通道经皮肾镜取石围手术期出血量显著少于F24通道(P〈0.05)。结论:孤立肾、高血压、结石面积大、肾实质厚、肾积水轻、通道数量多和手术时间长均会导致经皮肾镜围手术期出血几率和出血量增加,并且F24通道相较于F18通道出血量更多。
摘要:目的:探讨左西孟旦对脓毒症休克患者心肌损伤的保护作用。方法:选择我院2013年1月至2017年12月收治的149例脓毒症休克患者,根据随机数字表法分为观察组(73例)及对照组(76例),对照组给予常规治疗及静脉注射多巴酚丁胺48 h,观察组在常规治疗基础上给予静脉注射多巴酚丁胺24h后再静脉注射左西孟旦24 h。观察和比较两组的心脏功能参数、血流动力学指数、肌钙蛋白、乳酸、去甲肾上腺素、机械通气例数及ICU病死率。结果:治疗前,两组的左室射血分数、左室舒张期末容积指数及左室收缩期末容积指数对比差异无统计学意义(P〉0.05);治疗后,观察组的心排血量、每搏量指数、左室每搏作功指数均明显高于对照组,中心静脉压低于对照组(P〈0.05)。对比治疗前,治疗后观察组的心脏功能参数有明显改善(P〈0.05),而对照组无明显差别(P〉0.05)。此外,两组治疗后肌钙蛋白及乳酸水平均低于治疗前,且观察组明显低于对照组(P〈0.05)。两组的去甲肾上腺素总用量、机械通气例数及ICU病死率对比差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论:左西孟旦对脓毒症休克患者具有心肌保护作用,可以改善患者心脏功能,优化血流动力学,但并不能降低患者ICU病死率。