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摘要:目的:研究PDK1对生发中心(GC)的生成、发育及其功能的影响。方法:通过配种小鼠得到在GC B细胞中特异性敲除PDK1的小鼠,然后采用共聚焦显微镜观察小鼠脾脏GC的大小,多色流式细胞分析方法观测PDK1的敲除是否会影响小鼠B细胞的发育,ELISA技术检测PDK1敲除的小鼠经免疫后其体内产生抗体的能力是否受影响,结合平面脂双层抗原呈递系统及全内反射荧光显微镜成像系统(TIRFM)观测PDK1的敲除是否会影响小鼠脾脏IgG细胞P85的磷酸化水平。结果:PDK1的缺失并不会影响小鼠B细胞的发育,细胞群中成熟与不成熟B细胞所占比例均无显著性变化,但在GC B细胞中条件性敲除PDK1会影响小鼠脾脏GC的生成以及T细胞依赖性抗原免疫反应,而且同等条件活化后,GC B细胞中条件性敲除PDK1的小鼠脾脏IgG细胞其胞内分子P85的磷酸化水平显著降低。结论:PDK1对GC的生成、发育及功能都具有重要作用。
摘要:目的:构建Parkin基因过表达质粒并转染SH-SY5Y细胞,为进一步研究帕金森病的发病机制及中药的作用环节奠定基础。方法:首先构建Parkin基因过表达质粒,采用脂质体转导技术,将Parkin过表达质粒应用Lipo3000转染SH-SY5Y细胞。荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR检测其Parkin mRNA的表达;Western Blot技术检测其Parkin蛋白的表达。结果:转染组可观测到较多的绿色荧光蛋白表达;Parkin过表达细胞Parkin mRNA和蛋白的表达均显著提高(P〈0.01)。结论:通过脂质体转导技术,应用Lipo3000可将Parkin过表达质粒成功转染入SH-SY5Y细胞,转染的基因和蛋白表达均较高,提示此法可成功构建Parkin基因过表达的细胞模型。
摘要:目的:制备一种具有空腔结构的高分子超细纤维并研究其相关性质,探索其应用。方法:结合静电纺丝技术和微流控技术,制备出具有空腔结构的聚乳酸(PLA)超细纤维,并使用荧光显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等手段进行结构表征;采用甘油铜分光光度法、Alamar-Blue法间接检测了纤维膜的甘油含量和细胞毒性,并考察了其吸水率相较于普通实心纤维膜的变化;将PEI-质粒复合物载入纤维的空腔结构中,通过细胞转染实验验证了此纤维膜在运载质粒方面的应用。结果:纤维平均直径在1μm左右,内部均匀分布着椭圆形空腔。该纤维膜中甘油占比38.99%,吸水率为普通实心PLA纤维膜的近2倍。纤维膜与内皮细胞5天的共培养中,没有明显的细胞毒性。细胞转染检测结果证明了纤维空腔部分能有效运载质粒复合物并保证其生物活性。结论:静电纺丝技术和微流控技术有效结合,成功制备出具有空腔结构的新型高分子超细纤维,展现出了区别于普通纤维的独特性质和应用。
摘要:目的:采用大肠杆菌表达系统制备人乳头瘤病毒58型(human papillomavirus type 58,HPV58)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。方法:合成法获得HPV58 L1大肠杆菌密码子优化基因,构建HPV58 L1重组原核表达质粒mpET22b/HPV58 L1,检测其在BL21(DE3)中表达水平,饱和硫酸铵沉淀加阳离子交换层析法纯化蛋白后进行动态光散射(dynamic light scatter,DLS)分析。小鼠免疫后,检测免疫血清针对HPV58假病毒的中和抗体水平。结果:HPV58 L1蛋白在BL21(DE3)细胞中大部分以可溶形式表达,纯化获得的HPV58 L1蛋白可组装成水动力学直径约为74 nm的VLP。0.5μg的HPV58 L1 VLP可诱发小鼠产生高滴度的HPV58特异性中和抗体,可维持至少20周。结论:原核表达系统制备的HPV58 L1 VLP可诱发高滴度且持久的中和抗体,可用于成本低的HPV58疫苗的研究。
摘要:目的:探讨烟酰胺核糖(Nicotinamide riboside,NR)在糖尿病小鼠心肌病中的保护作用及其可能机制。方法:80只20~25 g雄性昆明小鼠随机分为对照组(n=20)、对照+NR组(n=20)、DCM组(n=20)、DCM+NR组(n=20)。链脲佐菌素(STZ)对小鼠腹腔注射诱导1型糖尿病,最后1次STZ注射完成后第5日,血糖仪检测小鼠尾静脉血葡萄糖水平,三次测量随机血糖均≥16.7 mmol/L的视为糖尿病小鼠。糖尿病小鼠继续喂养12w,小动物超声检测提示心功能减退的为DCM小鼠。从中随机选出20只,腹腔注射NR(1000 mg/kg),2次/日,连续2w,为DCM+NR组。采用小动物超声分别检测各组小鼠心功能,天狼星红染色观察各组小鼠的心肌纤维化程度,Western blot检测心肌组织Atg7、Beclin-1、P62、Sirt3的表达。结果:与DCM组相比,DCM+NR组左室射血分数[LVEF(%)]增加(P〈0.01),为DCM组的2.12倍;左室短轴缩短率[LVFS(%)]增加(P〈0.01),为DCM组的2.79倍;左心室收缩末期容积(LV Vol;s)降低(P〈0.01),为DCM组的0.25;左心室舒张末期容积(LV Vol;d)降低(P〈0.01)、为DCM组的0.66;心肌纤维化程度减少(P〈0.01)、为DCM组的0.63;Atg7、Beclin-1、Sirt3表达增加(P〈0.05),P62表达降低(P〈0.01)。结论:NR能够减轻小鼠DCM心肌间质纤维化、改善心功能,Sirt3通路的激活可能参与了NR减轻小鼠DCM损伤的保护作用。
摘要:目的:探究ghrelin、GHRP-6以及胃动素对大鼠胃肠运动的影响。方法:在体实验观察ghrelin、GHRP-6及胃动素对大鼠胃排空及小肠推进的影响,离体实验观察ghrelin、GHRP-6及胃动素对大鼠电场刺激引起胃窦胃底平滑肌舒缩反应的影响,RT-PCR观察ghrelin mRNA在胃的表达。结果:在体研究发现ghrelin及GHRP-6能够促进胃排空及小肠推进,胃动素对胃排空及小肠推进无影响。离体研究发现,ghrelin 1μM能够抑制胃底平滑肌4-8Hz开电刺激下的舒张反应,并增强胃底平滑肌1-8Hz及胃窦平滑肌4-16Hz断电刺激下的收缩反应;GHRP-6 1μM能够抑制胃底平滑肌4-8Hz开电刺激下的舒张反应,并增强胃底平滑肌1-2Hz、8-16Hz及胃窦平滑肌4-8Hz断电刺激下的收缩反应;L-NAME增强ghrelin、GHRP-6诱导的胃底和胃窦平滑肌条舒缩作用。大鼠胃窦及胃底分布有ghrelin受体mRNA。结论:ghrelin和GHRP-6能够加快胃排空促进小肠推进,该效应可能是通过迷走神经通路及胆碱能兴奋产生的。
摘要:目的:通过对比和检测人正常成骨细胞系hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系MG63中NOK以及EMT标志性分子E-cadherin、Vimitin的mRNA和蛋白表达量,并观察NOK对骨肉瘤细胞系MG63中EMT标志性分子E-cadherin及Vimitin的mRNA和蛋白表达量的影响,探讨NOK在骨肉瘤细胞系MG63 EMT过程中的作用。方法:qRT-PCR、Western blot法检测人正常成骨细胞系hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系MG63中NOK、E-cadherin、Vimitin的mRNA和蛋白表达量;构建慢病毒并干扰骨肉瘤细胞系MG63中NOK表达,qRT-PCR、Western blot法检测干扰NOK前后EMT标志性分子E-cadherin及Vimitin的mRNA和蛋白表达。结果:相比于人正常成骨细胞系,NOK、Vimitin的mRNA和蛋白在骨肉瘤细胞系MG63中高表达,E-cadherin的mRNA和蛋白在骨肉瘤细胞系MG63中低表达。慢病毒干扰骨肉瘤细胞中NOK表达后,E-cadherin的mRNA和蛋白表达升高,Vimitin的mRNA和蛋白表达降低。结论:NOK具有促进骨肉瘤细胞系MG63发生EMT过程。
摘要:目的:研究欧前胡素对低氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用和机制。方法:采用CO2-95%和N2-5%的细胞培养箱诱导H9c2大鼠心肌细胞建立心肌细胞低氧损伤模型,采用不同浓度的欧前胡素孵育细胞12、24 h,检测上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde MDA)的含量。采用MTT方法检测细胞的存活率,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡比例,蛋白质印迹法检测检ERK1/2蛋白的表达。结果:低氧处理H9c2心肌细胞12 h后,上清中LDH和MDA的含量分别为(523.28±90.29)U/L和(5.59±0.33)U/L,均明显高于对照组(P〈0.05),而SOD的含量[(12.23±1.38)U/mg]明显低于对照组(P〈0.05)。低、高浓度欧前胡素孵育12 h后,细胞存活率分别为(64.51±2.78)%和(73.22±3.56)%,低、高浓度欧前胡素孵育24 h后,细胞存活率分别为(80.21±4.67)%和(87.38±5.41)%,均较与模型组显著升高(P〈0.05)。高浓度欧前胡素孵育12 h和24 h后凋亡细胞比例分别为(39.67±4.11)%和(49.61±3.39)%,均较模型组显著降低(P〈0.05),10μmol/L的PD98059阻断ERK1/2信号通路后细胞存活率均较高浓度欧前胡素组显著降低,凋亡细胞比例较高浓度欧前胡素明显升高(P〉0.05)。高浓度欧前胡素孵育12 h和24 h后,ERK1/2蛋白相对表达量分别为(1.92±0.09)和(2.42±0.21),与模型组相比均显著增加(P〈0.05)。结论:欧前胡素可能通过活化ERK1/2信号通路保护低氧诱导的心肌细胞损伤。
摘要:目的:采用加压毛细管电色谱法测定复方芦丁片中芦丁与维生素C的含量。方法:采用Trisep~(TM)-2100加压毛细管电色谱仪,以C18毛细管色谱柱(300 mm×100μm i.d.,1.8μm)为固定相,流动相为甲醇-乙腈-0.4%磷酸(18:70:12),用三乙胺调节pH值至3.0,总流速为0.05 mL·min^-1,检测波长为254 nm。结果:芦丁的线性范围为2.0~20μg·mL^-1(r^2=0.999);平均回收率为99.4%,RSD为1.2%(n=9);维生素C的线性范围为2.0~50μg·mL^-1(r^2=0.999);平均回收率为99.3%,RSD为1.4%(n=9)。另外,本方法与原国标方法进行了比较,结果基本一致。结论:加压毛细管电色谱法可用于复方芦丁片有效成分含量的测定,该方法简单、快速、准确,为复方芦丁片质量控制提供了新检测技术。
摘要:目的:研究干扰素α1b(IFN-α1b)对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用体外培养的黑色素瘤细胞A375,通过MTT法检测和比较IFN-α1b和IFN-α2b对A375细胞的增殖的抑制作用;细胞划痕实验分析IFN-α1b对A375细胞迁移的影响;Annexin V-FITC/PI染色后采用荧光显微镜观察和流式细胞术分析IFN-α1b对A375细胞凋亡的影响。结果:MTT结果显示随着IFN-α1b和IFN-α2b浓度的增加,A375细胞的生长抑制率逐渐升高,药物作用48 h和72 h后,IFN-α1b作用的A375细胞生长抑制率明显高于IFN-α2b,IFN-α1b和IFN-α2b作用48 h的IC50分别为(22.69±1.52)μg/mL和(35.69±1.01)μg/mL(P〈0.01);IFN-α1b和IFN-α2b作用72 h的IC50分别为(10.00±0.98)μg/mL和(25.02±0.44)μg/mL(P〈0.01)。细胞划痕实验显示IFN-α1b能够使A375细胞的迁移指数和迁移能力降低,且随着IFN-α1b药物浓度的增加抑制细胞迁移作用增强。随着50μg/mL IFN-α1b作用的A375细胞的凋亡率为(29.31±0.45)%,较对照组(8.21±1.36)%相比明显上升(P〈0.01)。结论:IFN-α1b对人恶性黑色素瘤细胞A375具有生长抑制作用,与IFN-α2b相比,IFN-α1b的抑制作用更加显著;IFN-α1b能够降低细胞A375的迁移能力并诱导其凋亡。
摘要:目的:探讨内质网应激(ERS)对肺动脉平滑肌细胞表型转化的影响。方法:采用胶原酶Ⅰ消化法培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),用衣霉素(TM)或4-苯基丁酸(4-PBA)诱导或抑制内ERS,MTS法评价细胞增殖情况,western blot和定量RT-PCR检测蛋白和mRNA表达情况。结果:TM呈浓度依赖性诱导内质网应激标志物GRP78和XBP1 mRNA表达;较低浓度的TM促进PASMCs增殖,高浓度(5μg/mol)使细胞凋亡;TM使PASMCs表达SM22 alpha减少,分泌Ⅰ型胶原增加;4-PBA预处理可逆转TM诱导PASMCs的SM22 alpha减少和Ⅰ型胶原分泌增加。结论:内质网应激促进肺动脉平滑肌细胞表型转化,可能是内质网应激参与肺动脉高压的机制之一。
摘要:目的:探讨在诱导前给予预注射右美托咪定对于全麻患者麻醉诱导期插管前后循环影响。方法:选择拟行择期手术患者60例并将其随机分为3组,每组20例。D1组在入室后5 min内泵入0.2μg·kg^-1盐酸右美托咪定,D2组于入室后5 min内泵入0.4μg·kg^-1盐酸右美托咪定,C组于入室后5 min内泵入等容积量生理盐水。比较三组患者在给药前(T0)、给药15 min后(T1)以及插管成功后(T2)左室舒张末期容积(EDV)、左室收缩末期容积(ESV)、射血分数(EF%)、心输出量(CO)、每搏量(SV)以及同时期的平均动脉压、心率变化。结果:在T1时,D1、D2组患者EDV、ESV、EF%、CO、SV、平均动脉压、心率与对照组比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。而在T2时,D1组心率、平均动脉压以及CO均较C组明显降低,D2组心率、平均动脉压、心输出量、每搏量、左室舒张末期容积较C组低,左室收缩末期容积较C组高(P〈0.05)。结论:麻醉诱导前给予0.4μg/kg盐酸右美托咪定可以更好的改善诱导期心脏负荷和心功能,并减轻插管引起的交感神经兴奋导致的循环波动。
摘要:目的:探讨红细胞分布宽度(RDW)和超敏C反应蛋白(hsCRP)对射血分数保留心衰(HFpEF)的诊断价值,为临床诊断提供资料。方法:研究共纳入2013年12月至2016年12月上海市第七人民医院收治的368例CHF患者,对其临床资料进行回顾性分析,用Logisitic回归分析确定HFpEF的独立危险因素,用ROC曲线分析确定RDW和hsCRP对于HFpEF诊断的最佳Cut-off值及其预测价值。结果:HFpEF患者的RDW(12.83±1.09)和hsCRP(8.70±17.81)水平显著低于非HFpEF组患者的RDW(13.58±1.20)和hsCRP(14.24±30.90)水平;较低的RDW(OR=1.831)和hsCRP(OR=1.003)是HFpEF的独立危险因素;对RDW和hsCRP进行ROC曲线分析,hsCRP的AUC为0.814[95%CI(0.758~0.871)],最佳鉴别界值为185.6;RDW的AUC为0.694[95%CI(0.624~0.764)],最佳鉴别界值为13.15。结论:HFpEF患者的RDW和hsCRP水平显著低于非HFpEF型心衰患者,RDW和hsCRP对于HFpEF均有较高的诊断价值,可作为临床诊断HFpEF的参考指标。
摘要:目的:通过对大龄发育性髋关节脱位(developmental dysplasia of the hip,DDH)患儿进行术前模拟手术,实现术中精确截骨及旋转角度,从而达到个体化治疗,改善患儿预后的目的。方法:本研究按照术前规划方式分为两组,一组为传统手术组;另一组为模拟手术组。共20例患儿均采用骨盆三联截骨术+股骨截骨术治疗,传统手术组10例,模拟手术组10例,手术时平均年龄为11.3岁,平均随访时间24.2个月。所有患儿均于术前行骨盆三维重建CT检查,测量CE角、股骨前倾角及髋臼指数,在mimics软件中,模拟手术方案,确定术中股骨截骨需要旋转的角度及骨盆截骨的位置,术中按照模拟手术的结果进行操作。术前评价指标使用Tonnis分级,术后评价指标使用改进的Trevor评分系统。结果:模拟手术组Tonnis分级3级4髋,Tonnis分级4级8髋;传统手术组Tonnis分级3级4髋,Tonnis分级4级9髋,两组患儿术前严重程度无显著性差异。依据Trevor评分,模拟手术组8髋(67%)优秀,3髋(25%)良好,1髋(8%)一般。传统手术组5髋(38%)优秀,5髋(38%)良好,3髋(23%)一般。两组有显著性差异。并发症:术后传统手术组3例患儿有不同程度的股骨头坏死。结论:大龄DDH患儿术前模拟手术,可以达到术中精确截骨及旋转角度,可改善患儿预后,实现该类患者的个体化治疗。
摘要:目的:探讨肺癌根治术应用0.5μg(kg·h)维持剂量右美托咪定(Dex)辅助麻醉对患者血清白细胞介素-6(IL-6)、神经元特异性烯醇化酶(NES)及S100β蛋白水平的影响。方法:选取我院2016年3月~2017年3月收治并择期行肺癌根治术治疗的92例患者,采取随机数字表法均分为两组。所有患者均采取相同的常规静吸复合麻醉,于麻醉诱导前15 min(T1)静脉滴注负荷剂量为1μg/kg的Dex。观察组在此基础上以0.5μg/(kg·h)速度持续静脉泵注Dex至术毕前10 min,对照组以等剂量生理盐水重复以上操作。记录比较两组T1、单肺通气前(T2)、单肺通气60 min(T3)、术毕时刻(T4)、术后24 h(T5)血清IL-6、NSE、S100β蛋白水平及术后不良反应的发生情况。结果:与T1时间点对比,两组T2、T3、T4、T5时血清IL-6、NSE、S100β水平均显著升高(P〈0.01),且观察组在T2、T3、T4、T5时血清IL-6、S100β水平显著低于对照组同时(P〈0.01)。观察组术后不良反应率较对照组低(P〈0.05)。结论:肺癌根治术应用0.5μg(kg·h)维持剂量右美托咪定(Dex)辅助麻醉更能有效降低术患者IL-6、NSE、S100β蛋白水平,抑制机体炎症反应,减轻脑损伤,且安全性高。
摘要:目的:观察和比较左西孟旦(LEV)与米力农(MIL)治疗难治性心力衰竭(RHF)的临床效果及对患者血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、内皮素(ET)-1水平的影响。方法:选取我院2015年1月~2017年4月收治的102例RHF患者,采取随机数字表法均分为两组。MIL组给予MIL治疗,LEV组予以LEV治疗。比较两组的临床疗效,治疗前后超声心动图指标[左室射血分数(LVEF)、二尖瓣舒张早期/舒张晚期峰值流速(E/A)、左室舒张末期内径(LVIDd)]、血清NT-proBNP、ET-1水平的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗7 d后,LEV组总有效率较MIL组明显升高(P〈0.05)。与治疗前对比,两组治疗7 d后LVEF、E/A值均显著上升(P〈0.01),LVIDd值均显著下降(P〈0.01),且LEV组LVEF、E/A值均显著高于MIL组,LVIDd值均显著低于MIL组(P〈0.01)。两组治疗7 d后血清NT-proBNP、ET-1水平较治疗前均显著降低(P〈0.01),且LEV组血清NT-proBNP、ET-1水平均明显低于MIL组(P〈0.01)。LEV组不良反应的发生率较MIL组明显降低(P〈0.05)。结论:与米力农相比,左西孟旦治疗难治性心力衰竭能更有效缓解或消除患者症状体征、抑制心室重构、改善心功能,且安全性更高,可能与其显著降低血清NT-proBNP、ET-1水平有关。
摘要:目的:探讨右美托咪定复合丙泊酚应用于清醒气管插管的麻醉效果及对呼吸和循环的影响。方法:选择我院2015年1月~2016年12行清醒气管插管患者80例,按麻醉方式分组,每组40例,对照组采用丙泊酚麻醉诱导,研究组麻醉诱导予以右美托咪定复合丙泊酚。比较两组麻醉效果、呼吸和循环的变化及并发症的发生情况。结果:研究组插管时间、Ramsay评分、耐受良好、插管成功率、呼吸次数、分钟通气量、心率、平均动脉压均显著高于对照组(P〈0.05),潮气量、去甲肾上腺素、皮质醇、并发症总发生率均明显低于对照组(P〈0.05)。结论:右美托咪定复合丙泊酚用于清醒气管插管的麻醉效果确切,可使有效减轻对呼吸和循环的影响。
摘要:目的:探讨慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)患者血清生长分化因子-15(Growth Differentiation Factor-15,GDF-15)的表达及与其他肾功能相关临床指标的相关性。方法:选取西南医科大学附属医院2017年3月至2017年7月健康体检中心30例健康体检者对照组及肾病内科、内分泌科、心内科住院病房各期CKD患者150例,采用ELISA法测试验检其血清GDF-15水平。结果:除去CKD1期外,各期CKD患者eGFR及血清SCr、BUN、GDF-15水平均明显高于健康对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);随着CKD分期的增加,患者血清SCr、BUN、GDF-15浓度逐渐增加,且各组之间差异具有统计学意义(P〈0.05)。CKD3组患者血清UA浓度明显高于健康对照组、CKD1组(P〈0.05),CKD4组、CKD5组血清UA浓度明显高于健康对照组、CKD1组及CKD2组(P〈0.05)。GDF-15水平与eGFR水平呈负相关(r=-0.768,P〈0.01),与SCr水平呈正相关(r=0.751,P〈0.01),与BUN水平呈正相关(r=0.764,P〈0.01),与UA水平呈正相关(r=0.470,P〈0.01)。结论:GDF-15与慢性肾脏病的发生与发展密切相关。