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摘要:目的:探讨不同同源模板所获得M1毒蕈碱乙酰胆碱受体模型的合理性及可靠性。方法:以牛视紫红素受体、人源β2-肾上腺素受体、M2胆碱受体和M3胆碱受体为模板,分别对M1胆碱受体进行同源建模;采用分子对接获得各M1胆碱受体同源模板与配体的互作模式,并与已报道的M胆碱受体晶体结构进行静态比对,得到最佳M1胆碱受体同源模板;采用分子动力学模拟分析配体与关键残基距离的变化,对M1胆碱受体同源模板进行动态验证。结果:M2胆碱受体与MI胆碱受体的序列相似度较高,为67.9%;以InactiveM2胆碱受体为模板构建的M1胆碱受体(M1Rinacive-M2R)与其他晶体结构间RMSD值的均值最低,为1.39A;M1Rinacive-M2R别构位点K392及E397残基侧链与结合口袋距离更近,与配体结合构象更匹配;分子对接结果显示,双位点别构激动剂VU0184670与M1Rinacive-M2R别构结合位点Y85、Y381的距离分别为4.8A、6.8A,优于其他模型;分子动力学模拟后,配体与Q177残基的距离由7.4A降至2.9A,提示配体VU0184670向Q177方向偏转,与文献结果一致。结论:以InactiveM2受体结构为模板构建的M1胆碱受体模型最为合理,更接近M1胆碱受体的晶体结构。本研究为M1胆碱受体药物开发提供重要工具,为其他GPCRs受体同源建模提供创新范式。
摘要:目的:探讨上调骨桥蛋白(0PN)和TIP30表达对口腔鳞状细胞癌cal-27细胞增殖和迁移能力的影响。方法:采用过表达OPN载体病毒和过表达TIP30质粒分别感染或转染cal-27细胞株后,通过实时荧光定量PCR法和蛋白印迹westernblot法检测OPN和TIP30的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:过表达OPN载体病毒感染的cal-27-shOPN细胞株OPNmRNA和蛋白的表达均明显高于cal-27-shN细胞株(P〈0.001,P=-0.002),且细胞的增殖能力和迁移能力强(P〈0.001,P=0.002)。过表达TIP30质粒转染的cal-27-pTIP30细胞株TIP30mRNA和蛋白的表达均明显高于cal-27-pc3.0细胞株fP=o.001,P=0.003),且细胞的增殖能力和迁移能力弱(P〈0.001,P=0.005)。结论:OPN能促进cal-27细胞的增殖和迁移,TIP30抑制cal-27细胞的增殖和迁移。
摘要:目的:运用基因表达谱芯片筛选并分析新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间的差异表达基因。方法:收集我院2014年1月至2016年6月间行手术切除的维吾尔族与汉族胰腺导管细胞癌组织并提取总RNA,选取经Nanodrop2000与Agilent2100仪器质检合格的样本总RNA采用Affymetrix基因表达谱芯片筛选出差异表达基因并绘制统计图,运用基因本体(G0)分析及信号通路(Pathway)分析对这些差异表达基因的生物信息进行汇总分析。结果:通过基因表达谱芯片分析,新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间共检测到1063个基因存在差异表达,在维吾尔族胰腺癌标本中显著上调表达的基因共281个,差异表达倍数最高的为IGLVl-44基因(差异倍数:9.99)下调表达的基因共782个,差异表达倍数最高的为CPB1基因(差异倍数:33.76);在GeneOntology数据库中共检索到815个上述差异表达基因具有明确的GO分类,差异表达倍数最高的为CPB1基因(差异倍数:33.76);Pathway分析中共检测到30条信号通路包含有上述差异表达基因,共涉及196个基因,其中以FAK信号通路差异表达基因富集程度最高,差异表达倍数最高的基因为COL11A1基因(差异倍数:5.02)。结论:基因表达谱芯片分析结果显示,在新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间存在大量的差异表达基因,这些基因与胰腺癌的增殖分化、侵袭转移及多药耐药等特性密切相关,且参与了多条生物体内重要信号转导通路的调控。
摘要:目的:研究miR-21在脑缺血/再灌注(cerebral ischemia-reperfusion,I/R)损伤过程中对血脑屏障(Blood Brain Barrier)的保护作用。方法:采用线栓法构建SD大鼠脑缺血/再灌注模型。实验随机分为空白质粒组,miR-21-mimic组和miR.21inhibitor组。利用Western Blot检测大鼠大脑皮层组织中Bax蛋白的表达变化,透射电镜观察大鼠大脑皮层组织中细胞形态和血脑屏障的完整性,免疫荧光检测大脑皮层组织中自噬相关蛋白LC-3的分布情况。结果:Western Blot实验结果显示:与空白质粒相比,给予miR-21-mimic的大鼠脑组织中Bax蛋白的表达显著降低,而给予miR-21 inhibitor的大鼠脑组织中Bax蛋白的表达升高;透射电镜结果显示:与空白质粒组相比较,miR-21-mimic组中内皮细胞周围星形胶质细胞的板层突基本完整,而miR.21inhibitor组中明显可见自噬小体、溶酶体,并有吞噬物存在;免疫荧光结果显示:与空白质粒组比较,miR-21-mimic组中自噬相关蛋白LC.3表达降低,而miR-21inhibitor组中LC3蛋白的分布增加。结论:miR-21可能通过下调Bax蛋白的表达抑制凋亡或通过抑制自噬保护血脑屏障。
摘要:目的:研究Kru ppel样因子4(KLF4)的表达下调对HeLa细胞迁移与增殖的影响。方法:设计合成针对KLF4的siRNA和阴性对照siRNA,并转染至HeLa细胞中。使用含有10ng/mLTGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导HeLa细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。通过Transwell迁移实验和划痕实验观察HeLa细胞迁移变化;通过细胞增殖实验和流式细胞术观察HeLa细胞增殖状况和细胞周期分布。结果:转染了siRNA的HeLa细胞经TGF—β1诱导后,其细胞迁移能力较其他各组显著提高;与转染了阴性对照siRNA和空白对照的细胞相比,转染siRNA的HeLa细胞增殖能力明显提高;TGF-β1可以使HeLa细胞周期发生G1期阻滞,但是采用siRNA干扰KLF4的表达对此过程无明显影响。结论:使用siRNA下调KLF4的表达可以促进HeLa细胞的迁移与增殖。
摘要:目的:探索桂皮醛对高糖诱导的内皮细胞氧化应激的影响及其对相关血管内皮功能损害的作用,初步分析其作用机制。方法:①制作高糖(30mM)致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤和血管组织损伤模型,并以低糖(5.5mM)作为对照,高糖干预的HUVECs给予桂皮醛(10μM)或桂皮醛+TRPA1特异性拮抗剂(HC030031,10μM)进行干预,以DHE染色和DAF-2DA染色观察各组细胞超氧阴离子和一氧化氮(NO)水平;westem blotting分析核因子E2相关因子2(Nrf2),内皮一氧化氮合酶(eNOS),磷酸化eNOS及P22^phox水平。②以TRPA1敲除(TRPAl^-/-)及相应的野生型(Wildtype,WT)小鼠分离胸主动脉进行体外培养,设低糖(5.5mMD-葡萄糖)组、高糖(30mMD.葡萄糖)组、高糖+桂皮醛(10wM)组,以微血管张力测定仪测定血管内皮依赖性舒张功能和非内皮依赖性舒张功能。结果:①桂皮醛可显著减少高糖介导的内皮细胞超氧阴离子的产生,防止NO水平下降,但上述作用可被HC03003l所阻断。②桂皮醛可显著防止WT小鼠胸主动脉血管内皮依赖性舒张功能减退,但对TRPA1^-/-小鼠无上述作用。③桂皮醛剂量依赖性地上调Nrf2的表达,还可促进eNOS磷酸化,减少P22^phox上述作用均可被HC030031阻断。结论:桂皮醛激活TRPA1通过Nrf2信号通路可改善高糖介导的血管内皮细胞氧化应激水平,防止NO水平下降,改善血管内皮依赖性舒张功能。
摘要:目的:观察Nesfatin-1对大鼠摄食、胃酸分泌、胃运动及胃排空的影响并探究其可能机制。方法:将大鼠随机分为摄食实验组、胃酸实验组、胃运动实验组以及胃排空实验组。大鼠经腹内侧核置管后给予nasfatin-1,检测大鼠摄食量,使用NaOH滴定法测定大鼠胃酸分泌,记录清醒大鼠胃运动,以比色法测定大鼠胃排空。结果:低剂量和高剂量nesfatin-1均减少2小时累积食物摄入量;高剂量组4小时累积食物摄入量仍显著低于NS对照组。Nesfatin-1能够抑制2-DG对胃酸分泌的促进作用。SHU9119能够部分阻断nesfatin-1对2-DG的抑制作用。Nesfatin-1能够抑制胃运动及胃排空,SHU9119可部分阻断nesfatin-1对胃运动及胃排空的抑制作用。结论:Nesfatin-1能够调控大鼠摄食、胃酸分泌、胃运动及胃排空,黑皮质素信号通路可能也参与该调控过程。
摘要:目的:研究线粒体分裂蛋白1(Mitochondrialfissionprotein1,FIS1)介导的线粒体分裂对肝癌细胞侵袭与迁移的调控作用与机制。方法:采用免疫组化实验比较10对肝癌原发灶与转移灶组织中FISl表达,以明确FIS1与肝癌转移的关系。通过siRNA干扰FIS1的表达后,用Transwell实验检测肝癌细胞迁移与侵袭能力的变化,qPCR与Western Blot检测上皮间质转化标志分子上皮型钙黏蛋白(epitheliacadherin,E-cadherin)、紧密连接蛋白(zonula octludens-1,Z0-1)、神经型钙黏蛋白(neuralcadherin,N.cadherin)、波形蛋白Vimentin的表达。结果:肝癌转移灶组织中FIS1的表达显著高于原发灶组织。干扰FIS1表达后,肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显下降,细胞上皮间质转化标志蛋白E-cadherin和ZO-1的表达上调,而N-cad.herin和Vimentin的表达下调。结论:线粒体分裂蛋白FIS1在肝癌转移灶组织中高表达,并可能通过调节细胞上皮间质转化促进肝癌细胞转移。
摘要:目的:研究低浓度万古霉素(1%)复合聚甲基丙烯酸甲酯PMMA骨水泥对SD仔鼠原代成骨细胞的增殖以及凋亡的影响。方法:采用分离SD仔鼠颅骨与胰酶消化法获取SD仔鼠原代成骨细胞,通过细胞爬片碱性磷酸酶染色对原代成骨细胞进行鉴定;利用CCK-8法检测低浓度万古霉素复合PMMA及纯PMMA骨水泥浸提液对SD大鼠原代成骨细胞的增殖影响、流式细胞仪检测万古霉素复合PMMA及纯PMMA骨水泥浸提液对对SD大鼠原代成骨细胞的凋亡影响。结果:SD大鼠原代成骨细胞在低浓度万古霉素复合PMMA骨水泥浸提液中第1、2、3天的增殖更明显(P〈0.05),在纯PMMA骨水泥浸提液中第1、5天凋亡显著增加(P〈0.05)。结论:低浓度万古霉素复合PMMA骨水泥相比PMMA骨水泥具有较低的细胞毒性,在临床应用于骨缺损伴局部骨感染的治疗方面具有一定的优势。
摘要:目的:探讨下丘脑外侧核(LHA)·伏隔核(NAcc)orexin—A神经和功能通路构成及该通路对胃运动的影响及潜在机制。方法:将健康成年雄性Wistar大鼠随机分为逆行追踪组和胃运动组:逆行追踪组大鼠采用逆行追踪技术结合免疫荧光组织化学染色法,观察下丘脑外侧核.伏隔核间是否存在orexin—A神经通路;胃运动组大鼠通过在体胃运动研究,观察伏隔核内微量注射不同浓度orexin.A对大鼠胃运动幅度和频率的影响,以及电刺激下丘脑外侧核后,大鼠胃运动的变化及机制。结果:荧光逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示:下丘脑外侧核内有荧光金和orexin—A双重标记的神经元。胃运动研究结果显示:伏隔核内微量注射orexin-A,大鼠胃运动幅度和频率显著增加,并呈现显著剂量依赖关系(P〈0.05),伏隔核预先微量注射SB-334867,可反转该效应(P〈0.05)o电刺激下丘脑外侧核,大鼠胃运动幅度和频率显著增强(P〈0.05)。同样,伏隔核内微量注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,电刺激导致的胃运动增强效应显著减弱(P〈0.05)。结论:下丘脑外侧核-伏隔核存在orexin—A神经和功能通路,该通路可能通过orexin.A受体介导参与胃动力和能量代谢调控。
摘要:目的:探讨改良丝线结扎法建立大鼠牙周病模型的可行性。方法:本实验创新一种新的手段,利用玻璃离子水门汀结合传统丝线结扎法建立大鼠牙周病模型,即在丝线结扎大鼠第一磨牙之后,在大鼠磨牙牙颈部丝线附近堆砌有黏着性的玻璃离子水门汀制造利于丝线固定的外形高点并同时稍微垫高咬合面,制造咬合创伤,加快牙周病的发生发展。结果:改良丝线结扎法建立牙周病模型的成功率为95%,相比传统丝线结扎发的65%,具有更高的成功率,模型建立更稳定,相比现有各种改良方法操作更简便易行。结论:改良丝线结扎法相比传统丝线结扎法建立大鼠牙周病模型具有更高的稳定性和成功率。
摘要:目的:探讨老年非小细胞肺癌患者并发肺部感染的病原菌种类及药敏情况。方法:对2010年1月至2015年12月在我院老年病房收治的82例不可手术非小细胞肺癌(NSCLC)并发肺部感染患者及101例院内获得性肺炎(HAP)患者的痰培养阳性结果进行统计分析,包括病原菌分布及耐药特征分析。结果:NSCLC组共分离菌株187株,HAP组分离313株,其中革兰氏阴性菌分别为99株(52.9%)和198株(63.3%),分离真菌分别为53株(28.3%)和63株(20.1%),两组对比均有统计学显著性差异(p=0.023,p=0.035)。NSCLC组白色念珠菌分离率显著高于HAP组(15.4%VS.6.4%,p〈0.001)。两组分离革兰氏阳性菌分别是35株(18.8%)和52株(16.6%),分离率无统计学差异。对NSCLC组病原菌的耐药谱分析表明,革兰阴性菌多表现为多重耐药,革兰氏阳性菌和真菌对常用抗菌药敏感性高。结论:老年不可手术NSCLC合并肺部感染主要以革兰阴性菌为主,且耐药率较高,NSCLC组患者真菌分离率高于HAP患者,根据药敏结果合理应用抗生素是治疗的关键。
摘要:目的:回顾性分析因怀疑前交叉韧带断裂而住院行膝关节镜检查治疗术的患者当中,术前前抽屉试验(ADT)、Lanchman试验、核磁共振成像(MRI)检查提示韧带断裂的阳性率、敏感性以及特异性,讨论前交叉韧带断裂的最敏感非手术检查方法。方法:通过搜集近10年内我院骨科关节镜术中确诊的前交叉韧带损伤患者的临床病例资料,分析术前ADT、Lanchman试验及MRI检查数据,统计各种检查结果的阳性率、敏感性和特异性,比较各种检查方法的差异。结果:本次研究共搜集到210个关节镜手术病例,术前相关检查的确诊前交叉韧带断裂的阳性率依次为:ADT:61.4%;Lanchman试验:69.5%:MRI:87.1%。敏感性依次为:ADT:61.5%;Lanchman试验:69.5%;MRI..91.4%。特异性依次为:ADT:60.9%;Lanchman试验:69.6%;MRI.52.2%。结论lADT、Lanchman试验、MRI对于诊断前交叉韧带断裂均存在偏差,临床诊疗过程中应将三种检查结果联合参考作为前交叉韧带断裂的诊断依据。
摘要:目的:研究布地奈德雾化吸入治疗小儿毛细支气管炎的临床疗效及对血清白介素-4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TYV—α)TLT淋巴细胞亚群的影响。方法:研究对象选取我院2014年1月到2017年1月收治的毛细支气管炎患儿70例,采用随机数字法将其分为对照组和观察组,每组35例。对照组患者给予吸氧、控制喘憋和抗病原体等常规治疗,观察组患者在对照组的基础上雾化吸入布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵治疗。比较两组患者的治疗总有效率,各症状和体征缓解时间和住院时间,治疗前后的血清IL-4、IFN-γ、TNF-α和T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、及CD4+/CD8+水平的变化。结果:治疗后,观察组的治疗总有效率(97.14%)明显高于对照组(71.43%)(P=0.00);观察组气促缓解时间、哮鸣音消失时间、湿哆音消失时间、咳嗽消失时间、心率正常时间、住院时间明显短于对照组(P〈0.01);观察组患者的CD3+、CD4+、及CD4+/CD8+细胞比值、血清IFN-γ水平均明显低于高于对照组,CD8+血清IL-4、TNF-γ水平明显低于对照组(P〈0.05)。结论:布地奈德雾化吸入治疗毛细支气管炎的临床疗效显著,可有效抑制炎症,增强机体免疫功能,且治疗安全性较高。
摘要:目的:探讨脉搏指数连续心输出量(PICCO)技术在重型颅脑损伤患者液体管理中的临床应用价值。方法:回顾性分析重型颅脑损伤患者46例(男性27例,女性19例),以应用PICCO技术监测血流动力学指标指导液体管理的患者为治疗组(n=26),未应用PICCO技术指导液体管理的患者为对照组(n=20)。比较两组患者的日平均液体量、格拉斯哥昏迷评分(GCS)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、肺水肿发生率、住院时间、住院总费用以及治疗6个月后的格拉斯哥预后评分(GOS)、生存率、颅脑损伤恢复良好率。结果:治疗期间,治疗组的GCS评分以及APACHEⅡ评分均优于对照组,而治疗组的住院总费用高于对照组,但差异并无统计学意义(P〉0.05)。治疗组的日平均液体量、肺水肿发生率及住院时间均明显少于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。治疗6个月后,治疗组患者的GOS评分、生存率和颅脑损伤恢复良好率均高于对照组,但差异亦无统计学意义(P〉0.05)。结论:应用PICCO技术监测血流动力学指标指导重型颅脑损伤患者的容量管理可在一定程度上缩短危重患者的住院时间并降低肺水肿的发生率,但并不能明显改善患者的预后。
摘要:目的:探讨老年患者下肢动脉粥样硬化与心血管疾病危险因素关系,为疾病的预防控制和治疗提供依据。方法:收集从2016年1月到2017年1月在南华大学附属第一医院进行下肢静脉彩色多普勒超声检查的715例住院患者的基本临床数据和检测数据,确诊为下肢动脉粥样硬化的患者215例作为实验组,剩余500例为对照组,比较两组心血管危险因素,并采用Logistics回归分析筛选出下肢动脉粥样硬化的独立危险因素。结果:实验组年龄、存在高血压病史及糖尿病史比例及血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白B(APO-B)、血清肌酐(Cr)、尿酸(UA)、超敏C-反应蛋白(hs—CRP)、空腹血糖(FBG)、血浆纤维蛋白原(Fib)、收缩压(SBP)、舒张压(SDP)水平均高于对照组(P〈0.05),而体质量指数(BMI)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)、载脂蛋白AI(APO-AI)、鞘氨醇1-磷酸(S1P)、清道夫受体(SRB1)水平均低于对照组(P〈0.05)。多因素Logistics回归分析显示,年龄(OR=1.156)、糖尿病史(OR=2.623)、uA(OR=1.005)、TG(OR=2.345)、FBG(OR=1.066)为下肢动脉粥样硬化的独立危险因素(均P〈0.05)。结论:心血管的危险因素与下肢动脉粥样硬化有关,其中年龄、糖尿病史、UA、TG、FBG为下肢动脉粥样硬化的独立危险因素,对上述因素进行针对性干预可以有效预防下肢动脉粥样硬化的发生。
摘要:目的:探讨血清同型半胱氨酸(HCY)、金属蛋白酶9(MMP-9)、N-端B型钠利尿肽(NT-proBNP)变化与老年2型糖尿病大血管病变的关系。方法:选取我院2014年5月至2016年5月收治的老年2型糖尿病患者50例,依据大血管病变发生情况将其分为合并大血管病变组(A组,n=25)和未合并大血管病变组(B组,n=25),另选取同期来我院进行体检的健康人员50例作为对照组.比较三组的一般临床资料、血清HCY、MMP-9、NT-proBNP水平。结果:A组患者的收缩压、舒张压、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hBG)水平均显著高于B组(P〈0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著低于B组(P〈0.05),但三组患者的性别、年龄、体质量指数(BMI)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。A组、B组患者的BMI、收缩压、舒张压、FBG、2hBG、HbA1c、TG、TG、LDL-C水平均显著高于对照组(P〈0.05),LDL-C水平均显著低于对照组(P〈0.05),但三组人员的性别、年龄比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。A组患者的血清HCY、MMP-9、NT-proBNP水平均显著高于B组(P〈0.05);A组、B组患者的HCY、MMP-9、NT-proBNP水平均显著高于对照组(P〈0.05)。结论:血清HCY、MMP-9、NT-proBNP水平与老年2型糖尿病的大血管病变显著相关。
摘要:目的:介绍和分析单节段固定关节突峡部融合治疗年轻人轻度峡部裂腰椎滑脱的临床应用。方法:对2010.01-2016.01来我院就诊,诊断为峡部裂伴轻度腰椎滑脱的共计46例青年患者(〈30岁),采用单节段固定结合关节突峡部融合的方法进行治疗。分析包括患者术前与术后3月、6月及12月VAS(Visual AnalogueScale)疼痛评分,Lehmann腰椎功能评分等功能恢复指标的比较及融合率、并发症等临床观察指标的总结。结果:所有患者均至少接受12个月的术后随访,患者在术后(3,6,12月)的VAS评分及Macnab评分较术前均有显著改善和提高(P〈0.05)。影像资料显示:未出现不融合现象。1例患者出现皮肤浅层感染,处理后好转,余无明显并发症出现。结论:对于年轻人的轻度峡部裂伴腰椎滑脱患者,使用单节段固定结合关节突峡部融合的方法具有较好的疗效。且对后期影响较小。