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摘要:目的:本研究旨在运用一种改良的甲苯胺蓝染色方法鉴定体外分离培养的肥大细胞形态,为肥大细胞研究提供简便的检测方法.方法:体外诱导分化培养小鼠骨髓来源的肥大细胞,4周后收集细胞、固定、染色.比较不同固定温度及时间对甲苯胺蓝染色效果的影响,确定最佳条件.结果:SCF和IL-3体外培养诱导出小鼠骨髓来源肥大细胞.肥大细胞用改良的甲苯胺蓝染色后细胞着色效果较好,细胞多呈圆形或椭圆形且胞膜较完整,胞浆中充满大量的紫红色颗粒.结论:本研究成功运用一种适用于体外培养小鼠骨髓源肥大细胞的甲苯胺蓝染色法,并发现肥大细胞在37℃充分固定后进行染色,可以降低肥大细胞发生脱颗粒.此操作方法稳定性好、简便,适用于体外培养的肥大细胞形态学观察.
摘要:目的:通过组织块培养法得到脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探讨其诱导分化潜能,并初步研究ADSCs的来源.方法:用脂肪组织块培养法培养原代人ADSCs.第三代ADSCs进行成脂和成骨诱导分化,分别用油红O和茜素红S染色进行鉴定.脂肪组织块培养七天后取脂肪组织进行Hematoxylin-eosin Staining(HE)染色观察ADSCs组织分布.结果:用脂肪组织块培养法成功培养出原代人ADSCs.ADSCs传代到第8代,依然保持着良好的增殖能力和细胞形态.ADSCs能成功诱导成脂肪细胞和骨细胞.通过对培养七天后的脂肪组织块进行HE染色,发现ADSCs主要分布在脂肪组织的间质血管和结缔组织周围.结论:用脂肪组织块培养出来的ADSCs具有成脂和成骨分化的潜能.ADSCs主要定位于间质血管和结缔组织周围.
摘要:目的:观察柴胡解毒汤含药血清对人肝星状细胞LX-2增殖、凋亡情况的影响,探究其抗肝纤维化作用的可能机制.方法:将Wistar大鼠分为实验组与对照组,分别以柴胡解毒汤、生理盐水灌胃5天后取血制备大鼠含药血清与正常血清.同时复苏人肝星状细胞LX-2后进行细胞培养和细胞传代.当肝星状细胞数量达到预定值时,将肝星状细胞分为对照组和药物组.观察LX-2细胞在与含药血清孵育24 h、36h、48 h、72 h后,用CCK-8比色法测定细胞的增殖抑制率.用流式细胞术(Annexin V-FITC,PI染色法)检测细胞凋亡的概况.结果:柴胡解毒汤含药血清在给药24h后可抑制LX-2细胞的增殖,36h、48h、72 h的增殖抑制率分别为0.37%、0.46%、0.44%,并可诱导LX-2细胞发生凋亡,48 h、72 h凋亡概率分别为(9.80±0.95)%、(36.40±5.09)%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:柴胡解毒汤具有抑制LX-2细胞增殖、诱导LX-2细胞发生凋亡的能力,这可能是柴胡解毒汤抗纤维化作用的机制之一.
摘要:目的:探讨四周尾部悬吊模拟失重大鼠颈总动脉基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein9,MMP9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP1)的基因、蛋白表达及酶活性变化.方法:采用4周(week,wk)尾部悬吊大鼠模拟失重影响,通过透射电镜检测颈总动脉壁基质含量,实时定量聚合酶链式反应检测MMP9和TIMP1的mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测其蛋白表达和分布,明胶酶谱法测定MMP9活性水平.结果:与对照组相比,悬吊组大鼠细胞外基质面积较对照组显著增加(P<0.05),胶原蛋白含量显著增加(P<0.05);悬吊组大鼠颈总动脉MMP9的mRNA表达量无明显改变,而其蛋白表达量和酶活性均显著降低(P<0.05);TIMP1 mRNA和蛋白表达量则显著升高(P<0.05).结论:模拟失重使大鼠颈总动脉MMP9水平降低,TIMP1水平升高,可能与其管壁基质增生和胶原蛋白含量增加有关.
摘要:目的:研究三氧化二砷(Arsenic trioxide,ATO)对人白血病HL-60细胞凋亡的影响,并以线粒体通路为靶点探讨其可能的机制.方法:采用1μg/mL、5 μg/mL及10 μg/mLATO处理HL-60细胞24小时后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过细胞内MDA与GSH含量检测反映氧化应激水平,采用免疫印迹法检测凋亡相关分子表达,并通过免疫荧光染色检测细胞线粒体膜电位(mitogchondrial membrane potential,MMP)水平.结果:5μg/mL及10 μg/mL ATO可显著诱导人白血病HL-60细胞凋亡,并显著增加其氧化应激水平,增加促凋亡分子Bax和Caspase-3的表达,而抑制抗凋亡分子Bcl-2的表达,降低HL-60细胞线粒体膜电位的水平.结论:一定剂量的ATO可诱导人白血病HL-60细胞凋亡,而这一作用可能是通过诱导线粒体相关性凋亡信号通路激活实现.
摘要:目的:通过气管内给药的方法比较不同浓度人脐带间充质干细胞气管内移植对重度烧伤致急性肺损伤大鼠的保护作用.方法:建立50%面积全层烫伤大鼠模型,将75只成熟雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、生理盐水组(B组)、1×105HUCMSCs移植组(C)、5×105HUCMSCs移植组(D)、1×106HUCMSCs移植组(E),每组15只,B组及移植组(C、D、E组)烫伤后立即液体复苏,B组烫伤后气管内滴注0.2 mL生理盐水,移植组气管内滴注不同浓度hUCMSCs,分别在移植后的天第1、3、7天留取大鼠肺组织标本,HE染色观察肺组织病理变化,MPO、CD68免疫组化染色观察肺组织中性粒细胞及肺巨噬细胞阳性表达情况.结果:肺组织病理切片可见:A组各时间点肺泡腔清晰,肺泡结构完整,偶见少量炎性细胞.烫伤后第1天,B组及移植组(C、D、E组)肺泡间隔增厚,大量红细胞漏出及炎性细胞浸润.烫伤后第3天,各组肺泡结构较前清晰,炎性细胞浸润及红细胞漏出较第一天减少,与B组相比移植组肺泡结构清晰,间隔变薄,移植组各组间改变不明显.烫伤后第7天,移植组肺组织损伤较B组明显减轻,E组损伤肺组织恢复最为明显.MPO染色显示:与A组相比,阳性细胞数在烫伤后第1天明显增加(P<0.05),但各组之间无明显差异.在烫伤后第3天,与B组相比,移植组阳性细胞数减少明显(P<0.05),E组阳性细胞减少明显(P<0.05);在烫伤后第7天E组阳性细胞数量较其他组显著减少(P<0.05).CD68染色显示在烫伤后第1天各组阳性细胞显著增多(P>0.05),在烫伤后第3天移植组阳性细胞数减少(P<0.05),但各移植组间无明显差异,烫伤后第7天移植组阳性细胞数量较B组明显减少(P<0.05),E组较C、D组阳性细胞减少有显著差异(P<0.05).结论:气管内移植HUCMSCs能修复重度烧伤后损伤的肺组织,减少肺组织中性粒细胞及巨噬细�
摘要:目的:考察五味子甲素对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血液流变性及凝血功能的影响.方法:以三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠制备溃疡性结肠炎小鼠模型,UC小鼠随机分为模型组、阳性对照组及五味子甲素高、中、低剂量组(80,40,20mg/kg),同时设立正常对照组,每组10只.灌胃给药,正常组、模型组分别给予等体积蒸馏水,阳性对照组给予500 mg/kg柳氮磺吡啶(SASP),连续给药14d.观察五味子甲素对UC小鼠全血黏度及凝血功能的影响.结果:与UC模型组小鼠比较,五味子甲素可显著降低UC小鼠全血黏度(P<0.05),延长出血时间(bleeding time,BT)(P< 0.01)及凝血时间(clotting time,CT)(P< 0.05),其中甲素高剂量组作用最强,与SASP阳性对照组相当,并呈剂量依赖性.结论:五味子甲素可改善UC小鼠血液流变性及凝血功能,此作用有利于UC溃疡黏膜的修复与疾病的治疗.
摘要:目的:探讨Notch信号及自噬在三氧化矿化聚合物(MTA)促人牙髓细胞(hDPCs)体外增殖中的作用.方法:取临床上完整拔除的健康第三磨牙,通过酶消化法获得原代培养hDPCs.采用CCK-8比色法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/mL) MTA对hDPCs增殖的影响,筛选出最佳促增殖作用浓度和作用时间.通过Western Blot法检测MTA作用下hDPCs Notch信号及自噬相关蛋白表达的变化.结果:1.0 mg/mL MTA对体外培养hDPCs促增殖作用最显著,高浓度MTA (10 mg/mL)则具有一定的细胞毒性.与未处理hDPCs相比,MTA处理组hDPCs的Notch1、Hes1表达(P<0.05)及自噬相关蛋白P62及LC3Ⅱ/Ⅰ表达(P<0.01)均显著增高.平衡盐溶液(EBSS)饥饿实验诱导自噬发生后Notch1表达水平显著下降.结论:MTA可显著促进hDPCs的体外增殖,其作用机制可能与Notch1-Hes1信号转导途径激活及自噬抑制有关.
摘要:目的:研究不同严重程度骨关节炎模型兔的软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)和基质金属蛋白酶13(Matrix metalloproteinase 13,MMP-13)的相关性.方法:将40只新西兰大耳白兔随机分成4组,通过注射不同浓度木瓜蛋白酶处理,而构建患有不同程度骨关节炎的兔模型.利用Real-Time PCR法和ELISA法分别检测β-catenin、OPN、MMP-13以及Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的mRNA和蛋白的水平.结果:利用不同浓度的木瓜蛋白酶成功建立OA兔模型,通过Mankin评分可分成轻度、中度和重度三级.在不同分级的CA模型兔中,β-catenin、OPN、MMP-13的浓度均高于正常对照组,而Ⅱ型胶原和蛋白聚糖较正常对照组均下降(P<0.05);且随着OA严重程度增加,结果具有一致性(P<0.05).结论:Wnt/β-catenin信号通路可调节OPN的表达,进而影响到MMP-13的表达,最终对骨关节炎的发生产生影响.
摘要:目的:研究紫草素对破骨细胞体外分化的影响,并探讨其对去卵巢(ovariectomized,OVX)诱导的骨质疏松模型小鼠的骨保护作用.方法:体外细胞生物学实验,采用CCK-8法检测不同浓度紫草素对C57BL/6J小鼠骨髓源性单核巨噬细胞的毒性;采用RANKL和M-CSF诱导单核巨噬细胞破骨分化模型,给予不同浓度的紫草素干预后,经TRAP染色对破骨细胞进行形态学观察,并通过Real-Time PCR技术检测破骨细胞特异性基因TRAP、c-Fos和NFATc1的表达.动物体内实验,随机将15只小鼠平均分为假手术组、OVX组、治疗组.造模成功后治疗组给予紫草素干预,假手术组和OVX组以等体积生理盐水处理.连续处理30天后取胫骨,用MicroCT扫描重建观察胫骨近端骨丢失状况.结果:①高于250 nmol/L的紫草素显著抑制小鼠单核巨噬细胞生长(P<0.01).②不同浓度的紫草素干预能显著抑制体外破骨细胞形成(P<0.01).③不同浓度的紫草素干预能显著抑制TRAP,c-Fos和NFATc1等参与破骨细胞分化的重要基因表达(P<0.01).④紫草素干预能显著改善去卵巢诱导的骨质疏松模型小鼠的骨丢失(P<0.05).结论:紫草素能在体外抑制破骨细胞分化并在体内改善去卵巢诱导的小鼠骨质疏松.
摘要:目的:研究清胰利胆颗粒对重症急性胰腺炎患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白27(HSP27)、白介素-8(IL-8)水平的影响.方法:选取2015年8月至2016年7月我院收治的84例重症急性胰腺炎患者,根据随机数字法分为观察组和对照组,42例每组.对照组采取常规方案完成治疗,观察组在此基础上使用清胰利胆颗粒治疗.比较两组患者临床疗效,血淀粉酶恢复至正常时间、白细胞恢复至正常时间、胃肠功能恢复至正常时间、腹痛缓解时间及血清HMGB1、HSP70、HSP72、IL-8水平.结果:治疗后,观察组临床总有效率显著高于对照组[92.86%(39/42)比71.43%(30/42)](P<0.05).观察组的血淀粉酶恢复至正常时间、白细胞恢复至正常时间、胃肠功能恢复至正常时间及腹痛缓解时间显著短于对照组(P<0.05).治疗前,两组患者HMGB1、HSP70、HSP72、IL-8水平比较无显著差异(P>0.05),治疗后,两组患者HMGB1、HSP70、HSP72、IL-8水平和治疗前相比显著下降(P<0.05),和对照组相比,观察组的HMGB1、HSP70、HSP72、IL-8水平较低(P<0.05).结论:清胰利胆颗粒能有效降低重症急性胰腺炎患者血清HMGB1、HSP70、HSP27、IL-8水平,且可提高临床疗效.
摘要:目的:探讨通脉养心丸对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)伴慢性病贫血(ACD)患者铁调素水平的影响.方法:于2015年4月-2016年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院(南院)接受治疗的患者中选取70例年龄≥40岁的冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者并随机分成两组,每组各35人,分别服用通脉养心丸(Ⅱ组)或未服用通脉养心丸(Ⅲ组).同时选取冠心病患者不伴有慢性病贫血40人为对照组(Ⅰ组),该组患者服用通脉养心丸.观察比较三组服药8周前后的血铁调素及血红蛋白、铁蛋白水平的变化.结果:服药前,Ⅱ、Ⅲ组的血Hepc水平均明显高于Ⅰ组(P<0.05).8周治疗后,Ⅱ组患者血Hepc表达明显下降,Hb水平较治疗前显著升高(P<0.05),其余两组血Hepc表达与治疗前相比差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ组、Ⅲ组血Hepc水平显著高于Ⅰ组(P<0.05),Ⅲ组的血Hepc水平显著高于Ⅱ组;Ⅲ组患者的Hb水平明显低于Ⅰ组、Ⅱ组(P<0.05).结论:通脉养心丸能降低冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者的铁调素水平,提高该类患者的血红蛋白值,对冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者,尤其是轻度贫血患者有一定的治疗价值.
摘要:目的:探讨中重度肺内/外源性ARDS患者行不同时间俯卧位通气的治疗效果.方法:将中重度30例肺内/30例外源性ARDS患者分别行2h、4h俯卧位通气,观察患者APCHEII评分,氧合指数、胸片吸收情况、心率、平均动脉压、脱机拔管时间,出ICU时间.结果:四组患者APCHEII评分、心率、平均动脉压比较差异均无统计学意义(P>0.05).肺内源性ARDS患者行2h、4h俯卧位通气均能有效改善患者氧合指数,4h组较2h组氧合指数改善、胸片吸收情况更明显,4h组在脱机时间、转出ICU时间均优于2h组(P<0.05);肺外源性ARDS患者行2h、4h俯卧位通气均能有效改善患者各项指标,但两组间无统计学差异(P>0.05),且均优于肺内源性ARDS患者(P<0.05).结论:俯卧位通气可改善中重度肺内/外源性ARDS患者的病情,其对肺外源性ARDS患者效果更好,2h俯卧位通气即能取得较好效果,而肺内源性ARDS患者需更长时间的俯卧位通气改善病情且预后较差.
摘要:目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者泌尿系结石形成的相关影响因素.方法:根据是否合并泌尿系结石,将106例糖尿病患者分为观察组和对照组,每组53例,比较两组患者临床资料及生化指标的差异,并采用多因素回归分析研究2型糖尿病与泌尿系结石的相关关系.结果:观察组和对照组患者的年龄、性别、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hFBG)、糖化血红蛋白(HbA1C)等资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),而两组患者在体重指数(BMI)、甘油三酯(TG)、尿pH值、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血尿酸(SUA)、24小时尿酸(TUA)水平比较差异具具有统计学差异(P<0.05),多因素Logistic回归分析显示血尿酸、尿pH值和HOMA-IR为2型糖尿病患者泌尿系结石形成的重要危险因素(P<0.05).结论:高尿酸血症、高甘油三酯血症、高尿酸排泄、胰岛素抵抗、肥胖或超重等因素促进了泌尿系结石的形成,其中血尿酸、尿pH值、HOMA-IR是2型糖尿病患者合并泌尿系结石形成的独立危险因素.
摘要:目的:研究塞米松棕榈酸酯、维生素B12、利多卡因联合使用对膝骨性关节炎的疗效及对血清白介素-1(IL-1)、软骨基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)的影响.方法:选取2014年8月至2015年7月新疆医科大学第六附属医院收治的84例膝骨性关节炎患者,根据入院顺序分为观察组和对照组,42例每组.观察组采取塞米松棕榈酸酯、维生素B12、利多卡因进行关节腔内注射,对照组采取中药涂抹方案.评判患者治疗后的临床疗效,比较两组患者治疗前和治疗1个月后血清IL-1、MMP-3、TIMP-1水平、视觉模拟(VAS)评分的变化.结果:治疗后,观察组临床总有效率显著高于对照组(P<0.05),两组患者的血清IL-1、MMP-3、VAS评分均显著低于治疗前(P<0.05),血清TIMP-1水平明显高于治疗前,且观察组的IL-1、MMP-3、TIMP-1、VAS评分水平显著低于对照组,血清TIMP-1水平明显高于对照组(P<0.05).结论:采取塞米松棕榈酸酯、维生素B12、利多卡因关节腔内注射治疗膝骨性关节炎患者能有效降低患者血清IL-1、MMP-3水平,升高TIMP-1水平,缓解患者疼痛感,临床疗效良好.
摘要:目的:探讨正念减压疗法(MBSR)对试管婴儿患者知觉压力及心理状态的影响.方法:选取2014年5月到2016年12月在我院行试管婴儿技术(IVF-ET)辅助生育的不孕女性83例作为研究对象,根据随机数字表法将其分为对照组41例和观察组42例.对照组患者均给予常规的综合护理干预,观察组在对照组的基础上给予MBSR干预.对比两组患者干预前后抑郁自评量表(SDS)、焦虑自评量表(SAS)和知觉压力量表(CPSS)评分.结果:干预前两组患者的SDS评分、SAS评分、CPSS评分比较无统计学差异(P>0.05).干预后观察组患者SDS评分、SAS评分、CPSS评分为(43.53±4.89)分、(42.38±4.34)分、(27.53±4.89)分,低于干预前的(57.96±7.30)分、(56.42±5.49)分、(37.96±7.30)分,差异均有统计学意义(P<0.05);干预后对照组患者的SDS评分、SAS评分、CPSS评分为(51.13±5.52)分、(50.31±4.48)分、(31.13±5.52)分,低于干预前的(58.83±7.28)分、(56.45±5.51)分、(38.83±7.28)分,差异均有统计学意义(P<0.05),且干预后观察组以上评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:MBSR干预可有效改善试管婴儿患者患者的焦虑、抑郁和知觉压力情况,有利于提高WF-ET成功率,值得临床推广应用.
摘要:目的:探讨奥美拉唑联合生长抑素对老年重症胰腺炎腹内压及肠道粘膜屏障功能的影响。方法:选择82例我院收治的高龄重症胰腺炎患者,分为研究组48例,对照组34例,其中对照组行基础治疗,研究组在对照组基础上行奥美拉唑联合生长抑素进行治疗。分析并对比两组患者临床疗效、肠道粘膜屏障功能以及症状指标。结果:(1)研究组患者临床疗效总有效率明显优于对照组,差异具有统计学意义(P=0.005);(2)治疗后,两组患者D-乳糖及二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)水平明显比治疗前低,差异具有统计学意义(均P〈0.001);且研究组患者治疗后D-乳糖及DAO水平明显比对照组低,差异具有统计学意义(均P〈0.001);(3)治疗后,研究组患者腹痛腹胀缓解时间,肠道恢复时间,住院时间及血淀粉酶指数均显著优于对照组,差异具有统计学意义(均P〈0.001);(4)两组患者治疗后腹内高压显著低于治疗前,差异具有统计学意义(均P〈0.001);且研究组患者治疗后腹内高压明显较对照组低,差异具有统计学意义(均P〈0.001)与文献雷同。结论:联合奥美拉唑以及生长抑素对老年重症胰腺炎患者能纠正患者腹内高压并改善患者肠道粘膜屏障功能,值得临床借鉴和推广。
摘要:目的:探讨壳聚糖创面修复膜凝胶在Ⅱ度烧伤患者中的应用效果及对患者血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-10、细胞间粘附因子(ICAM)-1水平的影响.方法:选择我院2015年6月~2016年11月收治的96例Ⅱ度烧伤患者并采取随机数字表将其分成两组,每组48例.观察组采用壳聚糖创面修复膜凝胶治疗,对照组常规给予凡士林油纱布包扎创面,对比两组创面愈合情况、血清TNF-α、IL-10及ICAM-1水平的变化及不良反应的发生情况.结果:治疗第7天,观察组浅Ⅱ度烧伤创面愈合率明显高于同时点对照组(P<0.01);治疗第15天、25天,观察组深Ⅱ度烧伤创面愈合率明显高于对照组同时点(P<0.05).观察组浅Ⅱ度烧伤创面与深Ⅱ度烧伤创面愈合时间均显著短于对照组,SI评分均显著低于对照组(P<0.01).两组浅Ⅱ度和深Ⅱ度烧伤患者治疗后血清TNF-c、IL-10、ICAM-1水平均较治疗前明显下降,观察组下降更明显(P<0.05).观察组创面感染发生率显著低于对照组(P<0.05).结论:壳聚糖创面修复膜凝胶用于Ⅱ度烧伤患者中能加快创面愈合,预防创面感染,减轻机体炎症反应,安全性高.