现代生物医学进展杂志 统计源期刊

现代生物医学进展 2017年第17期杂志 文档列表

现代生物医学进展杂志论著

肿瘤细胞外泌体中融合基因的检测3201-3205

摘要：目的：探究肿瘤细胞分泌的外泌体中是否可以检测到来源于源细胞的融合基因mRNA。方法：培养人非小细胞肺癌NCI-H3122细胞．采用外泌体试剂盒提取细胞上清中的外泌体，并用WesternBlot实验验证外泌体是否提取成功。分别提取外泌体以及H3122细胞中的总RNA，将RNA反转录为cDNA，通过PCR反应扩增vl型EMIA—ALK融合基因片段，经琼脂糖凝胶电泳确定目的条带后，将两种PCR产物送公司进行基因测序，最后对测序结果进行比对分析。结果：从H3122细胞上清中成功提取了外泌体，并且在外泌体中检测到来源于H3122细胞的mRNA；从H3122细胞外泌体中检测到EML4-ALK融合基因，并发现外泌体中的EML4-ALK融合基因的融合形式为V1，与在H3122细胞中检测到的EML4-Au（融合基因的融合形式完全相同。结论：肿瘤细胞分泌的外泌体中可以检测到肿瘤细胞来源的mRNA，并且外泌体中的mRNA可以反映肿瘤细胞mRNA的基因融合情况等生物学特性。

三氧化二砷通过激活Drp-1增加人白血病HL-60细胞的放疗敏感性3206-3210

摘要：目的：研究三氧化二砷（Arsenictrioxide，ATO）对人白血病HL-60细胞放疗敏感性的影响，并以动力相关蛋白-1（dynamin—relatedprotein 1，Drp-1）为靶点探讨其可能的机制。方法：μg／mL浓度的ATO处理HL-60细胞后使用20Gy强度进行放疗，采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡，通过线粒体钙离子缓冲能力检测线粒体钙离子代谢障碍，采用免疫印迹法检测Drp-1蛋白表达，并通过Drp—1阻滞剂mdivi-1预处理的方法检测Drp-1在实验中的作用。结果：1μg／mL浓度的ATO对HL-60细胞活力无影响，但可显著增加20Gy放疗所致的细胞活力下降、细胞凋亡和线粒体钙离子代谢障碍；1μg／mL浓度的ATO可显著增加Drp-1蛋白表达，使用mdivi-1预处理可部分逆转ATO的放疗增敏作用。结论：一定剂量的ATO可增加人白血病HL-60细胞的放疗敏感性，而这一作用可能是通过激活Drp-1蛋白表达而实现。

IL-17在黏附侵袭性大肠杆菌感染小鼠结肠过程中的作用机制研究3211-3215

摘要：目的：评价IL-17在黏附侵袭性大肠杆菌感染小鼠结肠过程中的作用及其可能机制。方法：选择野生型及IL-17基因敲除的SPF级C57BL／6小鼠并随机分成4组，分别给予不同的处理：（1）野生小鼠＋单纯蒸馏水灌胃处理组；（2）野生小鼠＋E．Coli LF82（1×10^9／CFU／只）灌胃10天处理组；（3）IL-17敲除小鼠＋单纯蒸馏水灌胃处理组；（4）IL-17敲除小鼠＋E．Coli LF82灌胃10天处理组。从以下5个方面评价各组小鼠的炎症反应和IL-17水平：（1）组织病理评分评估炎症反应严重程度；（2）透射电镜下观察结肠上皮细胞的超微结构；（3）免疫组织化学检测结肠分泌的IL-17；（4）PCR检测小鼠结肠中IL-17mRNA表达；（5）ELISA检测结肠组织中IL-17的含量。结果：定植了E．Coli LF82的几-17敲除小鼠肠道炎症程度和超微结构损伤较野生型小鼠更加严重（P〈0．05）。与未经E．coliLF82处理组相比，定植了E．Coli LF82的野生小鼠肠道中IL-17mRNA和IL-17含量明显升高（P〈0．05）。结论：IL-17在E．Coli LF82在黏附侵袭结肠粘膜过程中的保护作用，IL-17是针对AIEC菌株E．coliLF82免疫的重要效应物，而结肠局部分泌增加的IL-17会改善感染的结果。

姜黄素后处理通过SIRT1／FOXO1信号通路拮抗小鼠脑缺血再灌注损伤3216-3219

摘要：目的：探究姜黄素后处理是否通过激活SIRT1／FOXO1信号通路抵抗小鼠脑缺血再灌注损伤。方法：小鼠脑缺血30min，再灌注24h建立脑缺血再灌注模型。手术前脑室内注射SIRT1特异性抑制剂EX527。再灌注后腹腔注射姜黄素。小鼠随机分为以下6组：假手术组；单纯姜黄素后处理组；缺血再灌注组；缺血再灌注＋姜黄素后处理组；EX527预处理＋缺血再灌注＋姜黄素后处理组；EX527预处理＋脑缺血再灌注组。再灌注24h检测脑梗体积、Complex I活性、ROS含量以及SIRT1、Ac-FOXO1、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况。结果：与手术组相比，姜黄素后处理组梗死区脑组织SIRT1的表达量及活性明显增加，脑梗体积降低，ROS含量降低而ComplexI活性增高，Bcl-2的表达增高而Bax和Caspase-3的表达量降低（均P〈0．05）。阻断SIRT1信号通路后上述姜黄素脑保护作用均减弱（P〈0．05）。结论：我们的研究首次证实姜黄素后处理通过激活SIRT1／FOX01信号通路，进而降低氧化应激与凋亡，最终减轻脑缺血再灌注损伤。

抑制RANKL诱导破骨细胞分化的DNA适配子的筛选3220-3224

摘要：目的：筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞诱导分化作用的DNA适配子。方法：首先，采用原核系统表达并纯化RANKL蛋白，通过SELEX（Systematic evolution of ligands by exponential）技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的DNA适配子。然后，用RNAfolding sever software分析适配子空间结构，以ELISA检测DNA适配子和RANKL亲和力大小并筛选出亲和力最高的一组DNA适配子用以验证DNA适配子对RANKL诱导破骨细胞分化的抑制作用。结果：①成功在原核系统表达并纯化RANKL蛋白；②筛选出能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的12个DNA适配子。③与对照组相比，不同浓度DNA适配子能明显抑制TRAP阳性破骨细胞数量（P〈0．05），且浓度越高抑制效果越明显。结论：成功筛选出的DNA适配子能特异性结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞的诱导分化功能。

二甲双胍联合塞来昔布对胰腺癌细胞增殖及Caspase-3活性的影响3225-3229

摘要：目的：探讨二甲双胍和塞来昔布单独或联合应用对胰腺癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响。方法：体外培养人胰腺癌Bx．PC-3和AsPC-1细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度二甲双胍和塞来细胞对胰腺癌细胞存活率的影响。联合实验分4组：对照组、二甲双胍组（MET，15mmol／L）、塞来昔布组（CEL，100wmmol／L），二甲双胍和塞来昔布联合组（MET15mmol／L＋CEL100μmmol／L），孵育48h，用MTT检测细胞存活率，用Caspase-3比色测定试剂盒测定Caspase-3活性。结果：二甲双胍和塞来昔布单药均可以时间和剂量依赖性方式降低胰腺癌BxPC-3和AsPC一1细胞的生存率。两种细胞系的各加药组细胞存活率与对照组比较差异均存在统计学意义（P〈0．01），联合实验组的细胞存活率明显低于单独用药组（P〈0．01）。二甲双胍和塞来昔布单药处理的胰腺癌BxPC-3和AsPC-1细胞Caspase-3活性均显著高于对照组（P〈0．01），二甲双胍和塞来昔布联合实验组Caspase-3活性均明显高于单药处理组和对照组（P〈0．01），但二甲双胍组和塞来昔布组之间的Caspase．3活性比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：二甲双胍和塞来昔布联合作用可协同抑制胰腺癌细胞的增殖，并通过激活Caspase一3活性促进胰腺癌细胞的凋亡，其联合应用可能成为胰腺癌药物治疗的有效策略。

丹红注射液中5种主要活性成分促血管新生作用研究3230-3233

摘要：目的：研究丹红注射液（DHI）入血后5个主要成分的促血管新生活性。方法：采用人脐静脉内皮细胞（mmEC）正常培养体系和鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型评价。细胞和鸡胚分别随机分为正常对照组，DHI组、羟基红花黄色素A组、丹酚酸B组、丹参素组，原儿茶醛组和迷迭香酸组。MTT法检测HUVEC增殖情况，免疫印迹法测定HUVEC促血管新生相关因子的表达，显微镜下计数鸡胚CAM给药区域新生血管数。结果：与正常对照组比较，10％（V／V）DHI及相应浓度的各单体均能显著增加HUVEC的增殖（P〈0．01），并促进HUVEC中促血管新生因子VEGF—A，bFGF，HGF的表达（P〈0．05，P〈0．01）；而50％（V／V）DHI及相应浓度的各单体均能不同程度地增加鸡胚CAM给药区域新生血管数；两个筛选模型中，羟基红花黄色素A和丹参素均呈现一定的作用优势。结论：DHI入血后的5个主要活性成分都有促血管新生作用，其中羟基红花黄色素A和丹参素活性更佳。

PKCβII特异性抑制剂LY333531减缓心肌梗死后心肌纤维化3234-3237

摘要：目的：探讨蛋白激酶CβIIOaKCβII）特异性抑制剂LY333531对心梗后大鼠心功能和心肌纤维化的保护作用。方法：利用左冠状动脉降支（LAD）结扎制备大鼠心梗模型，将手术4周后出现心衰的大鼠分为模型组（IVIF＋NS）和治疗组（MF＋LY333531），分别给予生理盐水和LY333531（10mg]kg／d）处理6周，检测各组大鼠体重和各项心功能指标，利用HE染色观察各组大鼠左心肌组织形态变化。利用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况。结果：相对于模型组，LY333531处理组大鼠左心室缩短率（FS）明显改善（从21％到35％）。HE染色显示LY333531能够部分逆转心衰大鼠心室壁肥厚和心肌细胞宽度，天狼星红染色显示治疗组胶原蛋白沉积降低150％。结论：使用LY333531选择性抑制PKCβII能够改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制心肌纤维化。

在体单向肠灌流模型研究白芷中三种成分的吸收特性3238-3242

摘要：目的：研究白芷中有效成分欧前胡素、异欧前胡素和花椒毒酚在大鼠小肠各段的吸收特征。方法：采用大鼠在体单向肠灌流模型结合HPLC法同时测定肠灌流液中欧前胡素、异欧前胡素和花椒毒酚含量的变化，考察高、中、低三组剂量下三种成分在十二指肠、空肠和回肠的吸收特性。结果：三种成分随着剂量的增大，吸收速率常数（Ka）和有效渗透系数（Peff）逐渐增大。三种成分相同剂量下各肠段间吸收均无显著性差异，其吸收大小顺序为：欧前胡素〉异欧前胡素〉花椒毒酚。结论：白芷三种主要成分在各肠段均吸收良好，吸收大小呈剂量相关性。

温敏性几丁糖填充兔眼玻璃体两种手术方式对比研究3243-3245

摘要：目的：通过两种手术方式对兔眼玻璃体进行温敏性几丁糖填充，比较其眼压及并发症差异。方法：将18只白兔随机分为实验组和对照组，每组各9只，右眼均为手术眼，实验组白兔行玻璃体切割术并注入温敏性几丁糖，对照组通过1mL注射器抽取玻璃体并填充温敏性几丁糖，术后随访1月，对比两组白兔术后眼压及手术并发症的差异性。结果：实验组手术前眼压（7．76±2．21）mmHg与术后眼压（7．49±2．98）mmHg无明显差异（P〉0．05），对照组手术前眼压（7．80±2．04）mmHg与手术后眼压（5．17±0．96）mmHg有统计学意义（P〈0．05）。对照组术后并发症发生率为44．4％（4／9），明显高于实验组22．2％（2／9）。结论：玻璃体腔注射温敏性几丁糖操作简单，但并发症较多，且易造成眼压改变；而玻璃体切割术后填充温敏性几丁糖并发症相对较少，眼压波动较小，但应注意并发性白内障的发生。

Orexin—A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用3246-3249

摘要：目的：研究orexin-A对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用。方法：取成年雄性大鼠6只，观察MCAO前和MCAO后2h、24h的生理学参数，界定后续指标参考时间。另取20只大鼠随机分为MCAO组、vehicle组、orexin．A50p,g／kg组和orexin．A100μg／kg组（n=5），于缺血再灌注24h后评估大鼠神经功能学评分和脑梗死容积。再取60只大鼠同样分成4组，（各组n=15），每组在术前、手术后6h、24h（各时间点n=5）取脑组织匀浆离心，检测上清液中谷胱甘肽过氧化物酶（GsH．ex）和丙二醛（MDA）的含量。结果：①大鼠MCAO术前、术后2h、24h生理参数比较无统计学意义（P〉0．05），提示脑保护参考指标在MCAO后24h内不受影响。②与MCAO组、vehicle组相比，orexin—A50和100Ixg／kg降低神经功能评分（P〈0．05）且梗死容积缩小（P〈0．05）；术前、术后6h和术后24h，脑匀浆中GSH-PX活性升高，MDA含量降低（P〈0．05）。结论：Orexin-A可能通过降低脑内自由基水平，控制脂质过氧化物酶从而对脑缺血再灌注损伤起保护作用。

Sprouty-2对胃癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响3250-3254

摘要：目的：研究Sprouty2（SPRY2）基因在胃癌肿瘤细胞上皮间质转化（EMT）和侵袭转移的影响。方法：体外培养人胃癌细胞（BGC-823），采用慢病毒介导的shRNA沉默SPRY2基因，并用实时定量PCR与Westernblot检测其SPRY2、E-钙黏蛋白（E—cadherin）、波形蛋白（vimentin）的表达，采用细胞划痕实验、Transwell实验检测SPRY2基因沉默后的胃癌细胞侵袭转移能力变化。结果：在慢病毒介导shRNA沉默SPRY2基因的人胃癌BGC-823细胞中，SPRY2的mRNA和蛋白表达明显降低（P〈0．05），SPRY2沉默后人胃癌细胞E—cadherin的蛋白表达增多（P〈0．05），vimentin的蛋白表达减少（P〈0．05）。此外，SPRY2沉默后，胃癌细胞迁移能力和侵袭能力明显减弱（P值均P〈0．05）。结论：Sprouty-2基因通过调节E-cadherin与vimentin的表达参与胃癌细胞的上皮一间质转化，进而促进胃癌细胞的迁移与侵袭。

衰老程度评价生物学指标在人胚肺二倍体细胞的筛选研究3255-3258

摘要：目的：通过在微观结构水平和分子水平检测不同代次人胚肺二倍体细胞衰老相关的指标值，筛选出能够系统性评价人胚肺二倍体细胞衰老程度的生物学指标。方法：将Walvax－2细胞分成16个代次，在倒置显微镜下观察不同代次Walvax－2细胞生长情况及形态学变化；在透射电镜下观察不同代次Walvax－2细胞生长情况和衰老情况；通过检测SA—B-gal染色阳性率，分析不同代次Walvax－2细胞β－半乳糖苷酶的表达水平。结果：细胞可传58代。倒置显微镜下：随细胞代次的增加，可见颜色逐渐加深，色素积累；透射电子显微镜观察到：P20到P43细胞正常且骨架结构明显，细胞核完整，具有较高的核质比，P44和P45开始出现衰老现象，细胞质色素积聚加深，核膜不同程度内折，P50和P55细胞衰老更加明显；β－半乳糖苷酶的阳性染色率和细胞代龄之间呈显著相关（P〈0．01）。结论：细胞形态学变化，β－半乳糖苷酶阳性率变化与Walvax－2细胞代龄增长显著相关，可选择作为Walvax－2细胞衰老程度评价的生物学指标。

经皮介入封堵冠状动脉-肺动脉瘘治疗分析3259-3262

摘要：目的：分析冠状动脉．肺动脉瘘（coronary artery-to-pulmonary artery fistula，cvgv）行经皮介入封堵治疗的可行性、安全性及疗效。方法：回顾性分析长海医院心内科于2009年7月至2016年2月之间接受经皮介入封堵术的58例CPAF患者的临床资料，排除合并其他复杂心脏病变而需要外科手术治疗的患者。结果：58名CPAF患者经介入封堵均获成功，平均植入封堵材料（2．35±0．87）枚。24名（41．38％）患者成功封堵后残余分流立即消失，34名（58．62％）患者仍有少量分流。未出现手术相关并发症。术后随访2～61个月。无出血、缺血等并发症。随访造影显示，其中3名（5．17％）患者出现了大量再通，后者随后均接受了再次封堵术并成功封堵。结论：经皮介入封堵CPAF切实可行，但应选择适宜患者，且需要经验丰富的术者操作。经治疗后冠状动脉瘘可能出现再通。因此对这些患者应进行随访造影或其他影像学检查。

磁共振三维稳态进动快速成像序列诊断脑积水的临床价值3263-3266

摘要：目的：分析磁共振三维稳态进动快速成像（3D-FIESTA）序列诊断脑积水的临床价值。方法：选择我院2015年3月-2016年3月收治的手术病理确诊的120例脑积水患者，术前均行磁共振常规序列及3D—FIESYA序列扫描，比较其检查结果。结果：磁共振常规序列提示有23例交通性脑积水，有73例梗阻性脑积水，其中有24例中脑导水管完全梗阻，有20例中脑导水管狭窄，有16例四脑室流出道梗阻，有13例桥前池囊肿阻塞双侧室间孔，有24例未检出。3D—FIESTA序列提示有34例交通性脑积水，有83例梗阻性脑积水，其中有34例中脑导水管完全梗阻，有19例中脑导水管狭窄，有18例四脑室流出道梗阻，有12例桥前池囊肿阻塞双侧室间孔，有3例未检出。3D-FIESTA序列对脑积水的检出率高于磁共振常规序列，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：3D．FIESTA序列能够客观反映脑脊液循环通路的状态，利于脑积水类型的鉴别，为临床治疗提供更全面、确切的影像学参考。

损伤控制手术对严重胸腹联合伤患者胃肠功能及血清炎症因子水平的影响3267-3269

摘要：摘要目的：探讨损伤控制手术治疗严重胸腹联合伤患者的临床观察及对患者胃肠功能的影响。方法：选择2014年9月至2016年9月我院接诊的96例严重胸腹联合伤患者，通过随机数表法分为观察组（n=48）和对照组（n=48）。对照组行确定性手术，观察组行损伤控制性手术。观察并比较两组患者手术时间、术中出血量、血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）及C反应蛋白（CRP）水平、排便时间、排气时间、肠鸣音恢复时间、进食时间及术后并发症的发生情况。结果：观察组手术时间短于对照组，术中出血量少于对照组（P〈0．05）；观察组患者血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）及C反应蛋白（CRP）水平均低于对照组（P〈0．05）：观察组排便时间、排气时间、肠鸣音恢复时间及进食时间均早于对照组（P〈0．05）；观察组术后并发症发生率低于对照组（P〈0．05）；观察组死亡率低于对照组（P〈0．05）。结论：在严重胸腹联合伤患者中实施损伤控制手术效果显著，可促进术后胃肠功能的恢复，减少并发症，降低死亡率，值得应用推广。

激光共聚焦显微镜在肿瘤免疫治疗检测中的应用3270-3273

摘要：目的：通过激光共聚焦显微镜对肿瘤生物治疗后患者的外周血淋巴细胞进行亚群计数，为生物治疗后外周血淋巴细胞无法分群的肿瘤患者提供新的监测免疫功能状态的方法。方法：收集35例肿瘤生物治疗后患者的外周血标本，通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪两种方法分别对患者外周血淋巴细胞亚群进行分类计数。结果：流式细胞仪和激光共聚焦显微镜同时分类计数的患者外周血细胞标本30例，两种方法在检测CD3、CD3^＋／CD4^＋．CD3^＋／CD8^＋、CD3^-／CD16^＋56^＋、CD3^-／CD19^＋细胞时均无统计学差异（P值〉0．05）：5例流式细胞仪无法将患者外周血淋巴细胞分群的样本，通过激光共聚焦显微镜可以进行分类计数。结论：激光共聚焦显微镜亦可以用于外周血淋巴细胞的分类计数。

质子泵抑制剂兰索拉唑和奥美拉唑对胃溃疡患者MDA，SOD及NO的影响3274-3277

摘要：目的：探讨兰索拉唑和奥美拉唑两种不同质子泵抑制剂对胃溃疡患者治疗效果及对丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及一氧化氮（NO）水平的影响。方法：收取2013年9月至2015年6月之间于我院接受治疗的胃溃疡患者98例作为研究对象，根据随机数字表法将98例患者平均分为A、B两组，两组各包含患者49例。A组患者使用兰索拉唑治疗，B组患者使用奥美拉唑治疗，两组均进行连续30d治疗。对两组患者治疗效果、症状缓解情况、MDA、SOD及NO水平、不良反应以及治疗费用进行比较。结果：A组患者痊愈率及总有效率分别为63．27％及91．84％，B组患者痊愈率及总有效率分别为61．22％及93．88％。两组患者治疗效果比较无显著差异（P〉0．05）。治疗后，两组患者腹胀、腹痛、上腹部烧灼及反酸症状与治疗前相较有显著差异（P〈0．05），但治疗后组间比较无明显差异（P〉0．05）。治疗后两组MDA显著降低，SOD及NO显著升高，其中A组变化幅度大于B组，差异有统计学意义（P〈0．05）。A组患者不良反应发生率为20．41％，明显高于B组的6．12％（P〈0．05）。B组患者质子泵抑制剂治疗费用明显低于A组。结论：兰索拉唑和奥美拉唑两种质子泵抑制剂对胃溃疡患者疗效相当，兰索拉唑在MDA、SOD及NO水平改善上具有优势，但奥美拉唑安全性更高且治疗费用相对较低。应当结合患者具体情况选择适宜的治疗方案。