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摘要:目的:通过对海藻酸钠链段羟基位点改性制备甲氧基聚乙二醇(MPEG)原位共价修饰的海藻酸钠/壳聚糖(AC)微胶囊,在保证MPEG修饰微胶囊机械强度不受影响的基础上,有效提高表面MPEG修饰密度,实现兼具良好机械稳定性及抗蛋白性能的微胶囊制备方法。方法:利用溴化氰对海藻酸钠羟基进行活化并将末端氨基的点击化学linker(BAT)接枝在主链上进而制备MPEG原位共价修饰微囊AB(OH)CPN,用球磨法表征微囊机械强度,用Ig G和Fgn为模型考察微囊表面抗蛋白吸附性能,以L929细胞在其二维模拟平板膜上的黏附情况作为衡量指标,考察MPEG修饰微胶囊表面细胞粘附情况,并最终通过体内移植考察MPEG修饰微囊的生物相容性。结果:基于海藻酸钠羟基位点的MPEG原位共价修饰微胶囊能够实现与常规条件制备的微胶囊接近的机械强度;同时与对照组相比Ig G吸附量降低87.4%,Fgn吸附量降低75.5%,实现了良好的抗蛋白吸附性能;二维模拟平板膜表面L929细胞粘附情况显著改善,细胞粘附数与对照组相比降低了76.9%;体内移植结果证明MPEG修饰微囊细胞粘附极少,微囊与纤维层分离明显。结论:基于海藻酸钠羟基位点的MPEG原位修饰能够实现兼具良好机械稳定性及抗蛋白吸附性能的微胶囊。
摘要:目的:探讨尿液外泌小体(exosomes)中微小RNA(miRNA,miR)的变化与肾纤维化的关系,以寻找早期诊断肾纤维化的生物标志物。方法:以行肾穿刺活检术并诊断为原发性肾脏病的患者为研究对象,其中,肾活检未发现肾纤维化的患者作为对照组,而存在轻到中度肾纤维化的患者作为纤维化组。收集20 m L晨尿,用超速离心方法分离尿液exosomes,用电镜观察其形态,用定量PCR方法检测其中miRNA的含量,并分析其与肾纤维化的关系。结果:超速离心获得的尿液沉淀物呈现exosomes的形态学特征。miR-21、miR-29b、miR-29c、miR-30e、miR-192、miR-200a、miR-200c和miR-429可在所有患者的尿液exosomes中被检出,但含量存在较大差异。与对照组相比,纤维化组患者尿液exosomes中,miR-21、miR-29b、miR-30e和miR-200c的含量显著增高,miR-29c的含量显著下降,而miR-192、miR-200a和miR-429的含量无显著变化。尿液exosomes中miRNA含量与纤维化肾组织中miRNA表达量的变化并不完全一致。结论:尿液exosomes中miR-29c和miR-21的含量在肾纤维化的病变中发生显著改变,可能成为早期诊断肾纤维化的生物标志物。
摘要:目的:研究阿司匹林对吗啡引起的Wnt通路的上调的影响。方法:在大鼠海马神经元元细胞系HT22细胞上建立了慢性吗啡成瘾模型,然后运用免疫荧光技术和Western blot技术检测wnt通路中β-catenin蛋白的表达变化变化,同时应用报告基因技术检测Wnt通路下游转录因子的活性。结果:在慢性吗啡成瘾模型组,β-catenin蛋白的表达显著增加,而在接受了6 h的阿司匹林预处理的慢性吗啡成瘾模型组,β-catenin蛋白的表达受到了显著的抑制。结论:阿司匹林可抑制吗啡引起的Wnt/β-catenin通路水平的过表达。
摘要:目的:本研究诣在对壳聚糖进行修饰,以解决其水溶性问题和基因释放困难的问题。方法:本研究通过2,3-环氧丙基三甲基氯化铵和N-乙酰-L-半胱氨酸对壳聚糖进行修饰,得到巯基化壳聚糖季铵盐(TMC-SH),使其在生理条件下带正电并含有一定量的游离巯基。以TMC-SH为基因载体,形成基因复合物。通过琼脂糖凝胶电泳考察其稳定性,并测定其粒径和ζ-电位。通过DTT条件下的粒径测定,考察基因复合物的还原响应性。结果:核磁结果表明合成TMC-SH的季铵盐取代度为22%,游离巯基-SH含量为79.22μmol/g;琼脂糖凝胶电泳结果表明以TMC-SH为载体形成的二硫键交联的基因复合物TMC-SS/p DNA具有较好的稳定性;而且,二硫键交联以后基因复合物粒径较小,结构更为密实;在还原条件下粒径变大,表明二硫键交联的基因复合物变得疏松,说明其粒径具有还原响应性。结论:对壳聚糖进行低取代度的季铵盐修饰和一定量的巯基化修饰后,其具有较好的包载p DNA能力和还原响应性的基因释放能力。
摘要:目的:基于诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSC)多潜能性的特点将亨廷顿舞蹈病(Huntington disease,HD)患者和正常人特异性i PSC定向诱导分化成运动神经元,并在运动神经元的基础上探讨HD的发病机制。方法:将HD患者和正常人的i PS细胞在特定的生长因子和神经因子的作用下定向诱导分化成运动神经元。然后用免疫荧光染色检测运动神经元特异性标记物HB9和ISL1的表达。以DCFH-DA和JC-1为荧光探针,利用流式分析法分别对正常人和HD患者运动神经元细胞活性氧和线粒体膜电位进行检测。结果:经过25天诱导分化成功得到HD患者和正常人的运动神经元,并且免疫荧光染色显示,βIII-微管蛋白阳性的神经细胞同时表达运动神经元特异性的标志物HB9和ISL1。此外,经实验统计发现HD患者运动神经元细胞内代表活性氧水平的荧光强度(4704.33±390.50)较正常组(2840.33±166.20)有明显增强(P=0.002),而且代表线粒体膜电位红绿荧光强度比(2.74±0.13)较正常组(3.97±0.29)相比有明显降低(P=0.03)。结论:HD患者特异性i PSC能够诱导分化成运动神经元,为实验提供研究模型。HD的发病与运动神经元细胞线粒体功能障碍有关。
摘要:目的:探讨低渗法与红细胞裂解法应用于小鼠少量外周血间期核荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测的优缺点,以便于根据实验条件选取最合适的方法。方法:小鼠剪尾巴法获取外周血,采用低渗法或红细胞裂解法破坏红细胞,涂片前先用免疫组化笔在玻片上划好预计涂片区域,重悬沉淀后稍等片刻再吸中间部分用于涂片,涂完后在相差显微镜下观察密度,行常规FISH,比较两种方法处理后的FISH结果。结果:低渗法和红细胞裂解法处理后的片子背景都较干净,密度适中,信号较强。结论:在外周血间期核荧光原位杂交技术中,低渗法和红细胞裂解法都可以获得较满意的FISH结果。低渗法的特点在于试剂便宜且易于获取,但耗时稍长;而红细胞裂解法的特点在于可节省实验时间,但需专用试剂。
摘要:目的:在原核载体中表达、纯化金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶,免疫小鼠获得多克隆抗体,使用多克隆抗体分析与其它菌种的交叉反应性。方法:复苏p ET28a-ldh/Bl21重组菌,IPTG诱导重组融合蛋白表达、以抗HIS标签的单克隆抗体进行western-blot鉴定重组蛋白。使用纯化的重组蛋白以及相应的佐剂免疫小鼠,利用ELISA测定血清抗体效价,并使用小鼠抗血清进行免疫印迹法鉴定重组蛋白的反应原性及其与金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌的交叉反应性。结果:SDS-PAGE电泳在39 KDa处可见目的条带,免疫印迹法验证了重组LDH的表达,纯化后获得2.8 mg重组蛋白。纯化蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,ELISA检测特异性Ig G效价为1:50000,western-blot鉴定显示所制备的多克隆抗血清能分别识别金黄色葡萄球菌重组及天然乳酸脱氢酶,但不识别表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌中天然乳酸脱氢酶。结论:纯化的LDH具有良好的免疫活性,免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体。使用多克隆抗体western-blot显示与其它菌种LDH不存在交叉反应性,为后续使用该重组蛋白进行金黄色葡萄球菌感染的诊断研究奠定基础。
摘要:目的:了解中枢神经系统(CNS)奴卡菌感染的临床特点、诊治方法及预后。方法:对青岛大学附属医院收治的1例脑奴卡菌感染病例进行报道,并检索相关文献报道的脑奴卡菌感染共31例,对以上32例进行回顾性分析。结果:32例患者中,22例存在基础疾病,18例有糖皮质激素或免疫抑制剂治疗史。主要临床表现为头痛,发热,恶心、呕吐,口齿不清,意识障碍,肢体功能障碍等。7例接受复方磺胺甲噁唑单药治疗,17例接受复方磺胺甲噁唑联合其他抗生素治疗,8例接受喹诺酮类、氨基糖苷类、β-内酰胺类等联合治疗。23例好转或治愈,9例死亡。结论:免疫功能低下是中枢神经系统奴卡菌病的危险因素;奴卡菌培养阳性是确诊该病的惟一方法;应及早应用磺胺类药物,必要时结合外科手术治疗。
摘要:目的:探讨躯体化症状对综合医院急诊科住院患者住院时间和住院费用的影响及躯体化症状自评量表在急诊科住院患者中的应用价值。方法:采用躯体化症状自评量表对100例急诊科住院患者进行心理状态评估,评分≤40分为低分组,>40分为高分组,比较两组的一般情况及住院时间和费用,并对住院费用和时间的影响因素进行多因素分析。结果:100例患者中,SSS得分≤40分共73例,>40分共27例,两组间年龄、性别分布比较有统计学差异,受教育程度、职业和病程等方面差异均无统计学意义。高分组患者年龄偏大(71.15±14.42 vs 61.62±14.66)岁,女性比例较高(59.2%vs 32.8%),住院天数较长(16.30±3.81 vs13.56±5.64天),住院费用较高(17922.55±1966.64 vs 14252.13±8655.71元)。多元回归分析结果显示住院时间与费用与患者的年龄、性别及躯体化症状有相关性。结论:躯体化症状是综合性医院急诊科住院病人常见症状,与年龄及性别相关,可能延长患者的住院时间和住院费用。躯体化症状自评量表具有较好的信度和效度,可应用于综合医院住院患者心理症状的筛查。