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摘要:目的:本研究着重探讨中枢神经系统周细胞是否表达desmin。方法:取3周龄雄性Wistar大鼠,取其大脑和脊髓组织,分离提取培养脑微血管周细胞(BMP)和脊髓微血管周细胞(SCMP)两种周细胞,用周细胞非特异性标记物神经胶质抗原2(NG2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)双标鉴定周细胞,并用免疫荧光方法定性定量测定两种周细胞表达desmin阳性率,免疫印记分析实验定量测定两种周细胞表达desmin。结果:观察刚分离得到的脑微血管和脊髓微血管,前者在长度和密度上多于后者,培养至第3天时,观察到BMP更趋向于聚集,而SCMP则更分散。培养至第9天时,两种周细胞基本铺满了培养皿。经用周细胞非特异性标记物NG2和α-SMA双标鉴定,确定分离得到的细胞为周细胞,免疫荧光和western blot实验结果表明两种周细胞均表达desmin,且SCMP表达desmin阳性率显著多于BMP(P〈0.001),SCMP表达desmin量显著多于BMP(P〈0.05)。结论:中枢神经系统周细胞表达结蛋白desmin,表达量不同暗示了血脑屏障和血脊髓屏障之间存在差异。
摘要:目的:将合成的两种量子点应用于研究人骨肉瘤HOS细胞系,初步检测其生物毒性,以确定本研究所制备量子点可否应用于骨肉瘤的基础研究。方法:将生长良好的HOS细胞与制备的两种量子点分别共培养,使用MTT试剂盒检测不同时间点细胞活性,实验进行三次,取其平均值,分析所得数据,并绘制出量子点浓度-细胞活性曲线,分析得出两者之间的量效关系。结果:1.4μM的CdTe/ZnS QDs和0.275μM的Cd Te/Cd S QDs分别是本实验中对HOS细胞的最高毒性浓度。较短时间(30 min)的暴露分别导致了48.6±0.9%和31.9±0.8%的细胞死亡,3 h后分别有33.7±2.3%和49.4±1.1%的细胞存活。而在孵育了18 h之后,只有28.0±1.6%和15.3±1.6%的细胞存活。我们可以观察到均为典型的时间/浓度曲线。结论:选用适宜浓度以及共培养时间,本实验制备的量子点完全可以满足纳米量子点粒子使用于HOS细胞研究的基本生物学条件,可以进行人骨肉瘤HOS细胞测温等的一些列实验操作。由于量子点自身优越的光学性能以及可接受的生物安全性,在肿瘤研究领域具有很大的潜力,将会成为肿瘤示踪、检测、以及靶向治疗新的有力工具。
摘要:目的:探讨银杏内酯B对过氧化氢(H2O2)诱导的星形胶质细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:星形胶质细胞传代培养,分为阴性对照组(以正常培养液培养),氧化损伤组(100μmol·L^-1的H2O2作用12 h),银杏内酯B低剂量组(1×10^-6 mol·L^-1银杏内酯B孵育24 h后,加入H2O2作用12 h)和银杏内酯B高剂量组(1×10^-4 mol·L^-1银杏内酯B孵育24 h后,加入H2O2作用12 h),MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果:银杏内酯B能抑制氧化损伤引起的细胞活性的下降,降低星形胶质细胞内ROS的生成,促进SOD、GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。结论:银杏内酯B通过提高细胞内SOD、GSH-Px含量,降低细胞内MDA含量发挥其较强的抗氧化作用,从而为其用于治疗神经系统疾病提供可靠的实验依据。
摘要:目的:观察原矛头蝮(P.mucrosquamatus)蛇毒对小鼠脏器形态结构的影响,从组织学角度探讨该蛇毒的致病机理。方法:用原矛头蝮攻击小鼠,待小鼠死亡后,立即进行解剖,观察心脏和大血管内部血栓形成情况。取心脏、血管、周围神经、肾脏、肝脏、脾脏和肺,观察外形,并进行石蜡切片,H.E染色观察。用健康小鼠相同器官为对照,比较二者的差异。结果:被原矛头蝮攻击致死小鼠的心脏、肝脏和肺发生了显著收缩;心腔和血管腔被血栓堵塞;在心脏、肝脏和肾脏组织血管中观察到了血栓;脾脏中白细胞显著增多;肺泡收缩,细支气管严重收缩致管腔堵塞;股动脉血管内膜发生了脱落;在股神经中发生了脱髓鞘现象。结论:急性凝血和窒息是导致小鼠死亡的重要原因;原矛头蝮蛇毒兼具血循毒和神经毒的特征;原矛头蝮蛇毒可导致多种脏器内部结构发生改变。
摘要:目的:对双丹口服液(Shuang Dan oral liquid,SD)的入血成分进行分析研究,进而探讨其药效物质基础。方法:采用血清药物化学的研究方法,建立双丹冻干粉经口灌胃后大鼠血清的HPLC指纹图谱,结合体外样品指纹图谱,分析比较双丹冻干粉及单味药材给药后所得血清样品,鉴定双丹冻干粉大鼠血中移行成分。结果:通过与文献中标准物质的保留时间确定大鼠口服双丹冻干粉后有8种血清移行原型成分,分别为源自牡丹皮的没食子酸、芍药苷和丹皮酚,源自丹参的丹参素、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B,此8种成分将有可能成为双丹方药效作用的物质基础。结论:本实验初步确定了双丹口服液的入血成分,为后续双丹方体内直接作用物质的确定和药效相关性研究提供了数据支持,并为其药效物质基础的阐明奠定了理论基础。
摘要:目的:研究microRNA-18a(miR-18a)对缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,hPASMCs)增殖的调控作用及其可能机制。方法:体外培养hPASMCs,分为未转染组、miR-18a模拟物对照组、miR-18a模拟物组、miR-18a抑制剂对照组、miR-18a抑制剂组、si RNA control组、si HIF-1α组、miR-18a抑制剂和si HIF-1α共转染组。分别于常氧(21%O2)和低氧(3%O2)作用24小时。采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,萤光素酶报告基因系统验证缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是否为miR-18a的靶基因,并通过western-blot以及实时荧光定量PCR技术检测相关蛋白和基因的表达。结果:缺氧可促进hPASMCs增殖,使miR-18a表达减少;miR-18a模拟物可抑制hPASMCs增殖,而miR-18a抑制剂可促进hPASMCs增殖;抑制miR-18a可使HIF-1α的表达上调。同时抑制miR-18a和HIF-1α,可使miR-18a对hPASMCs增殖调控的能力消失。结论:缺氧通过抑制miR-18a,上调HIF-1α的表达,促进h PASMCs增殖。
摘要:目的:探讨人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是否参与调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对EGFR-TKIs的敏感性,为非小细胞肺癌的治疗提供新的思路。方法:通过Western blot方法检测EGFR-TKIs敏感细胞H3255和耐药细胞H1975中Mcl-1蛋白的表达水平。分别给予敏感细胞H3255和耐药细胞H1975 EGFR-TKIs处理后检测细胞凋亡情况和Mcl-1蛋白表达水平。设计并合成特异性si RNA下调耐药细胞H1975中Mcl-1的表达,采用脂质体转染后通过流式细胞技术检测细胞的凋亡情况。结果:H3255细胞Mcl-1表达水平明显低于H1975细胞。一代EGFR-TKIs Gefitinib显著降低H3255细胞Mcl-1表达而不能减少H1975细胞Mcl-1表达。H1975细胞经二代EGFR-TKIs Afatinib和三代EGFR-TKIs AZD9291处理后Mcl-1表达明显减少。特异性si RNA下调H1975细胞Mcl-1表达可以促进细胞凋亡。结论:Mcl-1参与了调节NSCLC对EGFR-TKIs的敏感性,可能成为防止或逆转NSCLC对EGFR-TKIs耐药的潜在靶点。
摘要:目的:探讨Complexin蛋白对神经母瘤细胞分化的影响及机制。方法:采用神经母瘤细胞(N2a)作为实验材料,在其中过表达Complexin蛋白以及其突变体后,利用激光共聚焦显微镜拍照并利用Image J软件对N2a细胞的分化比率、突起数量以及突起生长长度进行统计学分析。结果:在N2a细胞中过表达Cpx蛋白后,细胞分化率比对照组(即转染空白对照质粒)增加约2倍。Cpx1-86和Cpxpoorclamp突变体可促进N2a细胞的分化,而Cpx27-134突变体对N2a细胞分化无明显影响。随着时间的延长,过表达野生型Cpx蛋白和其N端缺失突变体都不能显著增加细胞突起的数量;但在转染4天后,过表达野生型Cpx蛋白能显著增加分化细胞的突起长度,而其N端缺失突变体不能引起突起长度的增加。结论:Complexin蛋白主要通过其N端序列促进神经母瘤细胞(N2a)的分化,增加分化后突起的长度,但对突起数量没有明显影响。
摘要:目的:观察不同浓度氧化苦参碱(Oxymatrinem,Oxy)对哮喘大鼠肺组织IL^-10表达的影响,并探讨其作用机制。方法:构建哮喘大鼠模型,将40只清洁级健康雌性SD大鼠随机分成5组,每组8只:A:哮喘组(仅卵蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏)、B:低浓度组(Oxy 50 mg/kg)、C:中浓度组(Oxy 100 mg/kg)、D:高浓度组(Oxy 150 mg/kg)、E:对照组(生理盐水),末次激发24 h后处死全部大鼠,取大鼠肺脏,HE染色观察肺组织病理改变,采用RT-PCR、Western Blot测定各组肺组织中IL^-10基因及蛋白水平的表达。结果:HE结果显示,哮喘组可见大量炎症细胞浸润,气管平滑肌明显增厚。对照组肺泡壁薄且光滑,未见明显炎性细胞的浸润,不同浓度氧化苦参碱药物干预组其肺组织炎症细胞浸润及气管平滑肌病变程度随着用药浓度的增高呈逐渐减轻趋势。RT-PCR以及Western blot检测IL^-10发现,哮喘组、氧化苦参碱低浓度组、氧化苦参碱中浓度组与对照组相比IL^-10的表达均有所减低(P〈0.05),而氧化苦参碱高浓度组与对照组比较,IL^-10的表达无统计学意义(P〉0.05);氧化苦参碱中浓度组、氧化苦参碱高浓度组与哮喘组相比IL^-10的表达均有所增高(P〈0.05),氧化苦参碱低浓度组与哮喘组相比IL^-10的表达无统计学意义(P〉0.05)。结论:氧化苦参碱抑制、控制哮喘发作可能与促进肺组织中IL^-10基因、蛋白的表达相关,且促进程度在一定范围内与浓度呈正比。
摘要:目的:观察环境激素壬基酚(Nonylphenol,NP)对金鱼胚胎发育的毒性效应。方法:在繁殖季节选取雌雄健康成年金鱼,采用人工受精的方法获取金鱼受精卵于23℃培养箱孵育。将正常发育的囊胚早期金鱼胚胎(50枚胚胎/培养皿)分别暴露在1μmol·L^-1、4μmol·L^-1、8μmol·L^-1、12μmol·L^-1和16μmol·L^-1的NP实验液中,设空白对照。通过显微成像技术观察NP暴露对金鱼胚胎发育形态、不同发育阶段胚胎死亡率、受精后72小时(72 hpf)孵化率及畸形率的影响。从原肠期开始每隔12 h观察一次。结果:低浓度NP主要影响金鱼胚胎晚期发育,使其尾部脊索弯曲上翘;高浓度NP可导致金鱼胚胎卵凝结、发育延迟、组织坏死、尾部卷曲、体轴缩短并出现血栓。各发育阶段胚胎死亡率和72 hpf畸形率随NP浓度升高而增加,72 hpf孵化率则随NP浓度升高而降低;NP对金鱼胚胎24 h、48 h、72 h的半数致死浓度(LC50)分别为:16.28μmol·L^-1、8.27μmol·L^-1和6.52μmol·L^-1。结论:NP对金鱼胚胎具有明显发育毒性,金鱼胚胎对低浓度NP也具有较高敏感性,在评价环境激素胚胎发育毒性方面具有潜在应用价值。
摘要:目的:观察紫草素联合埃克替尼对肺腺癌耐药细胞H1975增殖的影响,探讨克服耐药可能的作用机制。方法:应用MTT法检测紫草素(1.25~20μmo/L)、埃克替尼(5~100μmol/L)及两药联合干预对H1975细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察紫草素(1.25μmol/L)、埃克替尼(10μmol/L)及联合使用对H1975凋亡作用;Western blot检测不同干预对H1975细胞EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK和凋亡相关蛋白PARP表达水平的影响。结果:MTT检测结果显示,与单药组相比,联合用药组细胞H1975增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P〈0.05);流式细胞术结果显示,联合用药组细胞的凋亡率达到(52.45±3.04)%,较紫草素组细胞凋亡率(22±1.17)%和埃克替尼处理组细胞凋亡率(15.35±5.85)%明显提高,差异有统计学意义(P〈0.05)。Western blot结果显示,单药组下调了p-EGFR、p-Akt蛋白水平的表达,而联合用药组显著抑制了p-ERK、PARP蛋白水平的表达,差异有统计学意义(P〈0.05),EGFR、AKT、ERK蛋白表达无差异(P〉0.05)。结论:紫草素联合埃克替尼能明显抑制H1975细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡;抗肿瘤机制可能与调节EGFR信号通路相关蛋白表达有关。
摘要:目的:探讨血浆同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、高敏c反应蛋白(Hypersensitive C—reactive protein,hs-CRP)在家族性高胆固醇血症(FH)的纯合子和杂合子患者中的水平及其与临床生化指标的相关性。方法:入选在2013.10~2015.7期间在动脉硬化门诊随访、确诊的家族性高胆固醇患者34人(纯合子14例,杂合子20例)。根据FH纯合子、杂合子、健康体检者分成三组,分别测定其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)、空腹血糖(Glu)、Hcy、hs—CRP水平,并比较FH患者血浆LDL-C、非高密度脂蛋白(non—HDL)水平Hey、hs-CRP水平的相关性。结果:FH组的TC、LDL.C、non.HDL、Hcy水平显著高于正常对照组(P〈0.05)。FH根据基因型亚组分析中,青少年纯合子组HDL—C[(0.78±0.21)vs(1.25±0.40)mmol/L]小于杂合子组(P〈0.001),而TC[(16.11±2.66)vs(7.30±2.54)mmol/L]、LDL-C[(14.06±2.22)vs(5.25±2.16)mmol/L]、non—HDL[(15.33±2.60)vs(6.05±2.61)mmol/L]、Hcy[(19.3±11.58)vs(11.29±3.42)μmol/L]水平显著高于杂合子组(P〈0.05)。Pearson相关性分析显示,FH患者血浆LDL-C、non—HDL水平与Hcy水平呈正相关(P〈0.05),而与hs—CRP无相关性。结论:FH患者,特别是青少年的纯合子患者,与对照组相较,具有较高的TC、LDL—C和Hcy水平,并且与血浆LDL—C、non—HDL水平呈正相关。FH患者hs-CRP的水平高于健康人,但差异无统计学意义,与血浆LDL—C、non—HDL水平也无明显相关性。
摘要:目的:探究微创穿刺引流术治疗颅内血肿患者临床疗效。方法:选取2014年1月至2014年10月我院收治的颅内血肿患者100例,给予微创穿刺引流术治疗。治疗结束后,随访一年,记录观察100例颅脑损伤患者ADL评分、并发症、血肿清除率、存活率以及死亡率。结果:①治疗后一年内,患者ADL评分,I级43例,Ⅱ级31例,Ⅲ级14例,Ⅳ级4例,Ⅴ级3例;②手术一周后,患者血肿清除率≥90%者91例,60%≤血肿清除率〈90%者7例,血肿清除率〈60%者2例;③100例患者中并发肺炎6例,并发脑梗死4例,并发应激性溃疡5例;④手术后一年内,死亡患者5例,生存患者95例。结论:微创穿刺引流术能有效降低颅内血肿患者并发症的形成,恢复神经缺损功能,降低死亡率,提高生存率。在临床用以治疗颅内血肿患者具有较好的前景。
摘要:目的:比较顺式阿曲库铵和阿曲库铵在小儿全麻中对气道功能的影响。方法:选取72名3-9岁患儿,男42例,女30例,采用随机表法将其分为观察组和对照组,每组36例。两组麻醉诱导都采用异丙酚,芬太尼,咪达唑仑。观察组使用顺式阿曲库铵0.15mg/kg,对照组组阿曲库铵0.5 mg/kg,比较两组小儿在插管后5 min、10 min、15 min、20 min患儿P(ET)CO2、P-PEAK、听诊呼吸音(粗、细湿啰音)、SPO2变化四项指标来研究顺式阿曲库铵和阿曲库铵对呼吸系统的影响。结果:观察组注药后5 min、10 min、15 min、20 min时间点P(ET)CO2,P-PEAK变化趋势不明显,听诊呼吸音、SPO2无明显变化(P〉0.05)。对照组在注药后的4个时间段P(ET)CO2、P-PEAK、听诊呼吸音、SPO2有显著变化,随时间延长,P(ET)CO2,P-PEAK有明显增高,SPO2逐渐下降情况(P〈0.05)。观察组和对照组相比,5 min、10 min、15 min、20 min各时间点观察组SPO2高于对照组,PETCO2、P-PEAK明显低于对照组,啰音发生的概率低于对照组,各时间点各项指标比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:顺式阿曲库铵术中对小儿气道功能影响较小,肌松作用理想,可广泛应用于小儿临床麻醉。
摘要:目的:探讨心力衰竭患者血小板平均体积(MPV)的水平及其与B型钠尿肽(BNP)的相关性。方法:选取2013年10月到2015年10月入住南京鼓楼医院心内科的患者294例,分为非心力衰竭组(n-HF)92例、慢性心力衰竭组(CHF)69例、急性心力衰竭组(AHF)133例,回顾性分析其MPV、血小板计数(PLT)、BNP等数据。结果:AHF组BNP(1298.43±856.25 pg/m L)、CHF组BNP(198.54±118.72 pg/m L)均明显高于n-HF组(88.91±76.93 pg/m L)(P〈0.05),且AHF组BNP显著高于CHF组(P〈0.05);AHF组MPV(11.37±0.91 f L)与CHF组MPV(11.21±1.18 f L)均明显高于n-HF组(10.70±1.05 f L)(P〈0.05),但AHF组与CHF组MPV相比没有统计学差异(P=0.532)。将AHF组与CHF组合并为心衰(HF)组,其BNP(922.72±920.55 pg/m L)及MPV(11.31±1.01 f L)明显高于n-HF组(P〈0.05)。MPV与BNP的相关系数r=0.257,相关程度极弱。结论:心力衰竭患者MPV明显高于非心衰者,提示MPV水平可能有助于心力衰竭的诊断,但MPV与BNP基本不相关,且MPV在急性心力衰竭者与慢性心力衰竭者中没有差异。
摘要:目的:对腹腔镜下行卵巢囊肿剥除术患者在手术前和手术后的AMH(anti-mullerian hormone,抗苗勒氏管激素)和bFSH(basic Follicle-stimulating hormone,基础促卵泡刺激素)含量进行测定,分析其临床意义和价值。方法:将2012年1月~2014年1月期间来我院妇产科就诊的34例卵巢巧克力囊肿患者作为研究组,上述患者经相关检查均身体状况符合腹腔镜手术的要求,并选取同期36例非巧囊患者作为对照组,2组患者均实施腹腔镜下卵巢囊肿剥离术进行治疗,并分别在手术前和手术完毕时对患者的AMH和bFSH水平进行测定。结果:研究组与对照组患者在手术完毕后AMH含量[(2.02±2.11,2.77±1.62)ng/m L]同手术前[(2.88±2.30,3.08±1.81)ng/m L]对比具有明显降低,具有统计学差异,(P〈0.05),研究组患者降低水平更为显著;研究组手术完毕b FSH含量(6.83±1.80)μU/m L明显高于术前(6.29±2.11)μU/m L,具有统计学差异(P〈0.05),而对照组患者术后血清bFSH含量同术前比较并未明显上升,无统计学差异(P〉0.05)。结论:行腹腔镜卵巢囊肿剥除术能够使患者的卵巢储备能力下降,测定AMH较b FSH能够更好的反应出卵巢手术后卵巢储备状况。
摘要:目的:探讨左旋氨氯地平联合综合性心理干预治疗高血压伴围绝经综合征患者的临床治疗效果,为临床治疗提供参考。方法:按照随机数字表法将2014年7月-2015年7月三峡大学仁和医院收治的113例高血压伴围绝经综合征患者分为两组,观察组(n=57例)采用左旋氨氯地平联合综合性心理干预,对照组(n=56例)仅予以左旋氨氯地平治疗。治疗1个月后,采用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和抑郁量表(HAMD)评分对两组患者的主要症状改善进行评估,测量两组治疗前后卵巢功能指标促黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、血清促卵泡成熟激素(Follicle stimulating hormone,FSH)以及雌激素(Estrogen,E2),并比较两组患者治疗后的临床疗效。结果:两组患者治疗后的LH、FSH以及E2水平均较治疗前明显改善,且观察组改善的幅度明显优于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。两组治疗后的HAMA、HAMD评分均较治疗前降低,且观察组降低的幅度明显优于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。观察组治疗后的临床疗效优于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:左旋氨氯地平联合综合性心理干预可明显改善患者的负性情绪和提高临床治疗效果,有较高的临床推广价值。
摘要:目的:探讨心包剥离术对老年慢性缩窄性心包炎心钠素(ANF)与内皮素(ET)变化的影响。方法:收集我院收治的慢性缩窄性心包炎患者66例,随机分为对照组和实验组,每组各33例,患者均给予相应治疗,对照组给予相应强心、扩血管药物,实验组患者行心包剥离术,治疗结束后,对所有患者的ANF、ET、血压以及临床治疗效果进行检测并比较。结果:与治疗前相比,治疗后两组患者ANF、ET、舒张压以及脉压水平均下降,收缩压水平升高(P〈0.05);与对照组相比,实验组患者ANF、ET、舒张压以及脉压水平较低,收缩压水平较高(P〈0.05);实验组患者治疗总有效率较高(P〈0.05)。结论:心包剥离术能够降低慢性缩窄性心包炎患者ANF、ET、舒张压以及脉压水平,升高收缩压水平,临床疗效较好,对临床有指导意义。