利用慢病毒载体构建稳定过表达人VEGF165贷的小鼠巨噬细胞系
摘要：目的：通过构建人血管内皮生长因子165（humanVEGF165,hVEGF165曲的慢病毒载体，感染小鼠单核巨噬细胞RAw264．7，建立稳定高表达人VEGF。65的小鼠巨噬细胞系。方法：将聚合酶链反应（PCR）扩增得到的hVEGF，65和慢病毒载体pLVX．IRES．ZsGreenl双酶切后连接，构建陵病毒表达载体pLVX-hVEGF165-IRES-ZsGreen1。再经双酶切和测序鉴定后，进行病毒包装及浓缩。将该慢病毒载体感染RAW264．7细胞，利用绿色荧光蛋白ZsGreenl进行2次流式分选。用Realtime—PCR、WesternBlot分别检测各组细胞中hVEGF165的mRNA和蛋白表达；ELISA分别检测细胞上清中人VEGF和小鼠VEGF的含量。结果：酶切及测序结果示慢病毒表达载体pLVX-hVEGF165-IRES—ZsGreen1构建正确；流式分选后得到高纯度的ZsGreen1—hVEGF时RAW264．7细胞。Realtime-PCR、WesternBlot显示该细胞特异高表达hVEGF165基因和蛋白（P均〈0．01）。ELISA显示该细胞分泌人和小鼠VEGF均显著增加（P均〈0．01）。结论：成功构建hVEGF165，慢病毒表达载体，并建立稳定高表达hVEGF165的小鼠巨噬细胞系。为深入研究该细胞的功能、机制及应用提供充足稳定的细胞来源。利用405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的流式细胞技术
摘要：目的：探讨流式细胞仪上405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法：SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后，流式细胞仪405nm激光激发检测DNA含量，利用软件计算出处于G0／G1期、S期和G2／M期细胞的百分比，以PI染色法结果作为对照。结果：SW480和A549细胞经Hoechst33342染色后各期的细胞百分比与PI染色法基本一致，无明显差异（P〉0．05结论：405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA结果可靠，可作为紫外检测的替代方法。醒脑静注射液联合血府逐瘀汤对SAH大鼠CRP、TNF-α的影响
摘要：目的：探讨醒脑静注射液联合血府逐瘀汤对蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage，SAH）大鼠c反应蛋白（c．reactionprot．ein，CRP）、肿瘤坏死因子-a（Tumornecrosisfactor-a，TNF-a）的影响。方法：50只大鼠随机分为5组：正常组，模型组，醒脑静组（0．3mL／kg），血府逐瘀汤组（0．3mL／kg），联合用药组（醒脑静联合血府逐瘀汤）。除正常组外，其余4组采用”二次枕大池注血法”建立大鼠SAH模型。从造模成功后的第1d开始给药，连续给药7d。正常对照组及模型组给予等量生理盐水。分别在术前、术后1d、3d、7d、14d取血浆及脑脊液，按ELISA试剂盒说明书分别测定各组血清及脑脊液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、c-反应蛋白（CRP）的含量。结果：（1）术后随着时间推移，SAH大鼠血清及脑脊液中TNF-α及CRP含量逐渐上升，在第7d达到高峰。（2）术后第1d，与正常组比较，模型组中血清及脑脊液中TNF-α、CRP含量均显著上升，差异显著（P〈0．01）；与模型组比较，醒脑静组及血府逐瘀汤组中血清及脑脊液中TNF-α、CRP含量无差异（P〉0．05），而联合用药组中血清及脑脊液中TNF-α含量下降，差异具有显著意义（P〈0．05）。（3）术后第3d、7d、14d，与正常组比较，模型组中血清及脑脊液中TNF-α、CRP含量均显著上升，差异显著（P〈0．01）；与模型组比较，醒脑静组、血府逐瘀汤组及联合用药组中血清及脑脊液中TNF-α、CRP含量下降，差异均显著（P〈0．01），与醒脑静组或血府逐瘀汤组比较，联合用药组中血清及脑脊液中TNF-α、CRP含量下降，差异均显著（P〈0．05）结论：醒脑静联合血府逐瘀汤能有效缓解SAH大鼠cVs，与降低SAH大鼠血清及脑脊中TNF-α、CRP水平有关。脱-γ-羧基凝血酶原的Ba-蛋白芯片法的建立和应用
摘要：目的：研发建立一种快速、特异性高、低成本的检测血清中脱-γ-羧基凝血酶原（DCP）的蛋白芯片，并通过检测DCP阳性肝细胞肝癌（HCC）血清临床样本对其进行评价。方法：首先采用柠檬酸钡吸附沉淀法去除血清中正常凝血酶原，然后通过双抗体夹心法蛋白芯片检测血清中DCP含量。通过Ba-蛋白芯片法检测41例DCP阳性HCC患者血清和66例健康人血清，进行盲法验证。结果：通过Ecarin．显色多肽底物法证实柠檬酸钡吸附沉淀法能够完全除血清中正常凝血酶原，根据”平均数＋3×标准差”公式设置蛋白芯片的Cut-off值作为阳性判定标准，Ba-蛋白芯片法检测DCP阳性HCC血清的灵敏度为95．1％（39／41），特异度为100％（66／66）。结论：成功建立检测血清中DCP浓度的Ba-蛋白芯片法，为多种标志物联合检测HCC的蛋白芯片的研发提供候选血清标志物。miR-96通过RECK促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭
摘要：目的：研究miRNA-96在结直肠癌转移中的作用及其机制。方法：采用Transwell试验分析结直肠癌LoVo细胞的迁移和侵袭能力，采用荧光素报告基因及蛋白免疫印迹试验研究结直肠癌中miR-96的作用靶点。结果：miR-96抑制剂处理后下调miR-96的表达并抑制LoVo细胞的迁移和侵袭。荧光素报告基因试验显示RECK是miR-96的作用靶点，且RECK沉默能够部分阻碍miR-96抑制剂所导致的LoVo细胞迁移和侵袭减少。结论：miRNA-96可通过作用于RECK促进结直肠癌细胞转移，这可能成为治疗结直肠癌转移的新靶点。不同年龄组人表皮干细胞Integrinβ1表达分析研究
摘要：目的：分析不同年龄组包皮组织中表皮干细胞Integrinγβ1的表达，为组织工程学种子细胞的选用提供依据。方法：利用Dis—paseII和BSA共同作用，分散表皮和真皮组织部分。对不同年龄组分离的表皮干细胞进行Integrinβ1免疫荧光染色，利用流式细胞仪检测不同年龄组Integrinβ1表达的阳性率。结果：不同年龄组分离得到的表皮干细胞形态一致。细胞生长状态和生长速度以7岁年龄组为最佳，其次是16岁年龄组，最后是30岁年龄组。流式细胞仪检测不同年龄组Integrinp1的表达，7岁组阳性率为93％，16岁组阳性率为56％，30岁组阳性率仅为3．5％。结论：随着年龄的增长，皮肤组织中表皮干细胞的含量降低，低年龄段皮肤组织是组织工程学种子细胞的良好选择。金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长及凋亡的影响
摘要：目的：研究金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长及凋亡的影响及其可能的机制。方法：取对数生长的肺癌A549细胞，分为对照组、紫杉醇组、金松双黄酮组、金松双黄酮联合紫杉醇组。采用MTT法研究金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长的影响；流式细胞术检测细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法检测A549细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果：金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞的生长抑制率高达64．81％，显著强于单纯紫杉醇作用组（P〈0．05），且两药合用可显著升高肺癌A549细胞的凋亡率（P〈0．01），并抑制凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白的表达，上调Bax的表达。结论：金松双黄酮联合紫杉醇能够增强紫杉醇对肺癌A549细胞生长的抑制作用，促进细胞凋亡，其作用机制可能与调节凋亡基因Bcl-2、Bax的蛋白表达有关。MTHFR及PAI基因多态性与新生儿早产易感性的关系
摘要：目的：探讨MTHFR基因、PAI-1基因多态性与新生儿早产的关系。方法：选自2014年1月-2015年1月期间我院住院患儿285例并分为四组。抽取研究对象静脉血进行目的基因MTHFR基因C677T、PAI基因的提取、扩增及检测。结果：MTHFR基因C677T扩增片段198bp，经限制性内切酶作用后形成野生CC型（片段198bp）、纯合子突变TT型（175bp、23bp）以及杂合子突变CT型（23bp、175bp以及198bp）；PAI基因扩增片段142bp，经限制性内切酶作用后形成三中基因型，分别为4G／4G型（96bP、46bp）、5G／5G型（22bp、46bp以及74bp）以及4G／5G型（22bp、46bp、74bp以及96bp）。早产儿童与足月儿童MTHFR基因677位点T等位基因分布差异显著（P〈0．05），早产儿童与足月儿童PAI基因启动子675位点4G等位基因分布无显著性差异（P〉0．05）。结论：早产发生的易感性与多方面因素有关，其中遗传因素方面MTHFR基因677位点T等位基因多态性可能与新生儿早产相关，而PAI基因启动子675位点基因的多态性与新生儿早产的发生无显著相关。重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293EBNA1细胞中的瞬时表达优化
摘要：目的：优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293EBNA1瞬时表达，提高重组抗体表达量。方法：将HEK293EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养，筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞，瞬时表达重组抗体；使用Modde软件进行实验设计（DOE），优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化，获得目标抗体，用快速免疫荧光灶抑制试验（RFFIT）测定抗体活性，用BCA法测定纯化抗体浓度。结果：293SFMII为适宜的HEK293EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例（P=0．00000），其次为质粒浓度（P=0．00086），最后为PEI（P=-0．00257）。优化的转染条件为：质粒用量0．61μg/10^6细胞，轻重链比例2：1，PEI2．67μg／10^6细胞，优化后抗体表达量有显著提高（P=0．007）。结论：通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达，抗体表达量提高了至少50倍。右美托咪啶对神经痛大鼠脊髓背角pERK、pCREB表达的影响
摘要：目的：评价右美托咪啶对神经病理性痛大鼠脊髓背角神经元磷酸化胞外反应激酶（phosphoryltion of extracellular regulated proteinkinases，pERK）、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（phosphoryltion of Camp response element bound protein，pCREB）蛋白表达的影响。方法：健康成年雄性Wistar大鼠54只，6～8周龄，体重180-220g，采用随机数字表法，将其分为3组（Il=18）：假手术组（s组）、慢性神经病理性痛组（C组）和右美托咪啶组（D组）。S组仅分离坐骨神经但不结扎，C组和D组采用结扎坐骨神经的方法制备大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤（chronicconstriction injury，CCI）的神经病理性痛模型，D组于术后即刻开始至处死前1d腹腔注射右美托咪啶50μg／kg，1次，d，s组和C组注射等容量生理盐水。于术前1d、术后3、7、14d时以缩足阈值（pawwithdrawal threshold，P、ⅣT）测定大鼠机械痛阈和辐射热的缩足潜伏期（pawwithdrawl latency，PWL）测定大鼠的热痛阈，并于术后测定痛阈后灌注处死大鼠，取L4．6脊髓组织，采用免疫组织化学法检测脊髓背角神经元pERK、pCREB的表达水平。结果：与s组比较，c组和D组术后3、7、14d时MWT降低，TWL缩短，脊髓背角pERK、pCREB表达上调（P〈0．05）；与c组比较，D组术后3、7、14d时MWT升高，T、TWL延长，脊髓背角pERK、pCREB表达下调（P〈0．05）。与术前1d比较，c组和D组术后3、7、14d时MWT降低，TWL缩短：与术后3d时比较。C组和D组7、14d时MWT降低，TwL缩短，脊髓背角pERK、pCREB表达上调（P〈0．05）。结论：右关托咪啶可减轻大鼠慢性神经病理性痛，抑制pERK、pCREB的表达可能是其作用机制之一。胃癌靶向治疗中靶向肽2PEG-（GEBP11）3的获取及其生物学活性评价
摘要：目的：获取GEBP11（肿瘤血管靶向肽）三聚体，即2PEG-（GEBP11）3，以期提高GEBP11短肽的受体亲和力及特异性、血液循环。方法：通过PEGylation和多聚化修饰合成2PEG-（GEBP11）3，通过人脐静脉内皮细胞与胃癌细胞SGC7901体外共培养以获的胃癌血管内皮细胞的部分特性，在对两者进行结合特异性的检验。结果：成功获取2PEG-（GEBP11），；GEBP11和2PEG-（GEBP11），的IC50值分别为451．7±3．8，52．6±3．4nmol／L（n=3），三聚体GEBP11短肽的受体结合活性几乎是单体的10倍。结论：细胞竞争性结合实验和放射自显影提示2PEG-（GEBP11）3与Co—HUVECs的亲和力高于单体，且标记过程对GEBP11短肽与Co-HUVECs的亲和力无明显影响，具有良好的生物学活性。改良单层胰肠吻合术在胰十二指肠切除术带蒂大网膜包埋中的应用
摘要：目的：探讨带蒂大网膜包埋的改良单层胰肠吻合法重建消化道的胰十二指肠术的临床疗效。方法：回顾性分析2012年9月-2014年12月在我院行胰十二指肠切除术带蒂大网膜包埋改良单层胰肠吻合术的34例患者的临床资料。统计患者的手术时间、胰肠吻合时间、术后出血量、住院时间以及并发症的发生情况。结果：（1）手术平均时间（2．9±1．4）h，胰肠吻合平均时间（14±2．1）min，术后平均出血量（380＋60）mL。所有患者经治疗后均治愈出院，住院时间平均（13．0±2．4）天。（2）术后并发症发生率为8例（23．5％），其中胰瘘2例（5.8％），为A级胰瘘；腹部感染3例（8．8％）；腹腔出血2例（5．8％）；胃排空延迟1例（2．9％）。无手术死亡者，无因严重并发症需要再次手术者。术后病理学诊断胰头癌18例，胆总管下癌8例，壶腹部癌5例，十二指肠乳头癌3例。结论：带蒂大网膜包埋的改良单层胰肠吻合能够减少术后胰瘘、出血、感染等并发症，提高手术成功率，值得临床进一步推广。胫前减张切口结合锁定加压钢板内固定治疗老年胫腓骨远端骨折的疗效
摘要：目的：探讨胫前减张切口结合锁定加压钢板（LCP）内固定治疗老年胫腓骨远端骨折的临床效果。方法：选择2014年3月-2015年3月本院收治的老年胫腓骨远端骨折患者100例，根据手术方式不同分为减张组和内固定组。减张组行胫前减张切1：7结合锁定加压钢板内固定术，内固定组行锁定加压钢板内固定术。观察并比较两组患者的手术时间、术中出血量、住院时间、骨折愈合时间、并发症的发生率以及AOFAS评分。结果：两组手术时间、术中出血量及住院时间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；减张组患者骨折愈合时间短于内固定组，并发症的发生率低于内固定组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；两组患者AOFAS评分比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。减张组患者的手术优良率高于内固定组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：胫前减张切口结合LCP内固定治疗老年胫腓骨远端骨折的临床效果显著，值得推广应用。HV—CBP对急性重症胰腺炎患者机体免疫功能的影响
摘要：目的：探讨连续性高容量血液净化（HV—CBP）对急性重症胰腺炎患者免疫功能的影响及其临床效果。方法：选取我院消化科收治的急性重症胰腺炎患者220例，根据治疗方案不同分为对照组及试验组。对照组给予常规治疗，实验组在常规治疗基础上应用HV-CBP治疗。观察并比较两组患者治疗前后血清淀粉酶、脂肪酶、CRP、TNF-α及T淋巴细胞亚群的变化情况。结果：试验组体温、腹痛、黄疸症状恢复时间及住院天数均较对照组明显缩短（P〈0．05）；治疗后试验组血清淀粉、脂肪酶、CRP、TNF-α水平明显低于对照组，而CD4＋/TCD8＋比率明显高于对照组，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：HV-CBP对急性重症胰腺炎患者的临床症状、炎性刺激、病情进展及免疫功能具有良好的改善作用。CEA、CA19-9与CA72-4用于诊断老年胃癌的临床价值研究
摘要：目的：探讨CEA、CA19-9以及CA72—4诊断老年胃癌的临床价值。方法：对192例经活检确诊为老年胃癌患者的血清CEA、CA19．9以及CA72-4水平进行分析，比较不同TNM分期老年胃癌患者的血清CEA、CA19—9以及cA72-4阳性率，并评价血清CEA、CA19-9以及cA72-4水平诊断老年胃癌的敏感性和特异性。结果：TNM3期及4期的胃癌患者CEA以及CA19-9阳性率明显高于1期及2期胃癌患者，而TNM1—4期的胃癌患者CA72．4的阳性率都明显高于CEA以及CA19-9。以6．5ng／mL、30U／mL以及4ng／mL分别作为CEA、CA19-9以及CA72．4的上限临界值，其诊断老年患者的胃癌的敏感性分别为15．6％、1913％以及29．2％，特异性分别为98．9％、97．2％以及98．0％，曲线下面积分别为0．59、0．62以及0．66。结论：CEA、CA19-9以及CA72．4对于诊断老年胃癌都有较好的特异性，但敏感性一般，尤其对于早期胃癌，CEA及CA19—9敏感性较差，CA72-4敏感性要优于二者。颈部低度迷走神经刺激对老年房颤患者血清CRP、TNF-α及MMP-9／TIMP-1水平的影响
摘要：目的：探讨颈部低度迷走神经刺激对老年房颤患者血清C反应蛋白（CRe）、肿瘤坏死因子-α（TNV—α）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的影响。方法：选取我院收治的老年房颤患者126例，根据治疗方法的不同分为两组。对照组63例，予常规治疗，日1次，7天为1个疗程，治疗2个疗程；实验组63例，在对照组的基础上加以颈部低度迷走神经刺激术。治疗后，观察并比较两组患者的CRP、TNF-α及MMP-9、TIMP-1的变化情况。结果：治疗后，两组患者的血清CRP、TNF-α、MMP-9及TIMP-1均较治疗前显著降低，且实验组显著低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。实验组治疗后6个月内房颤的发生率显著降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：颈部低度迷走神经刺激能够有效降低老年房颤患者的复发率，这可能与其降低血清CRP、TNF—α，MMP-9、TIMP-1的水平有关。阳和汤联合西药抗结核药物治疗骨结核的临床效果观察
摘要：目的：观察阳和汤加减联合西药抗结核治疗骨结核的临床效果。方法：收集我院2013年5月至2014年7月确诊的骨结核患者64例进行前瞻性研究分析，采用完全随机分组法分为观察组（阳和汤加减联合西药抗结核治疗组）32例和对照组（单纯西药抗结核治疗组）32例，并对所有患者进行随访，观察对比两组治疗效果。结果：观察组中有2名患者于治疗过程中查肝肾功异常，自动退出治疗，其余患者均完成治疗。在分别经过阳和汤加减联合西药抗结核治疗以及单纯西药抗结核治疗后，两组患者各项指标均较本组治疗前有显著好转，体温、血沉、C反应蛋白水平均下降，且差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组相比，观察组各项指标好转更显著，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。两组患者均无明显不良反应；观察组治疗好转率93-3％显著高于对照组68．6％，且差异有统计学意义（P〈0．05）；观察组患者发热消失、血沉恢复正常、脓肿吸收以及骨质密度恢复时间明显早于对照组，且差异均有统计学意义（P〈0．05）；观察组患者平均住院时间（26．43±5．78天）明显短于对照组（38．17＋8．91天），且差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：阳和汤加减联合西药治疗骨结核较常规单纯西药治疗有较大优势，可有效提高患者好转率，缓解临床症状，缩短住院时间，值得临床上广泛推荐应用，以提高患者预后水平及生活质量。阿托伐他汀早期干预对2型糖尿病合并高血压患者血脂及炎症因子水平的影响
摘要：目的：探讨早期阿托伐他汀钙片干预对2型糖尿病合并高血压患者血脂水平和炎症指标的影响。方法：选择2014年5月-2015年5月我院收治的2型糖尿病合并高血压患者130例，根据治疗方法不同，将患者分为研究组和对照组，每组各65例。对照组采取常规降压及降糖药物治疗，研究组在此基础上应用阿托伐他汀钙片。观察两组患者治疗前后血脂水平、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）、白介素-6（1L-6）及白介素．18（IL-18）的变化情况。结果：治疗后，两组患者胆固醇（TC）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平均较治疗前降低，且研究组显著低于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；两组患者治疗前后的甘油三脂（TG）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL．C）水平比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗后，两组患者hs—CRP、IL-6及IL-18水平均较治疗前降低。且研究组显著低于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；两组不良反应的发生率比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：阿托伐他汀钙片可以有效改善2型糖尿病合并高血压患者的血脂水症，降低血清炎症因子的表达，值得临床推广应用。
