慢病毒介导的小鼠PINK1基因RNAi载体的构建及在NIH3T3细胞中的筛选
摘要：目的：构建筛选靶向特异PINK1-siRNA慢病毒表达载体,感染小鼠胚胎细胞（NIH3T3）验证该病毒载体的敲减效率,为研究帕金森病的发病机制奠定基础。方法：构建2对靶向小鼠PINK1-siRNA序列（KD1和KD2）,将这2对序列连接在GV118上,将重组载体和病毒包装的辅助质粒共转染293 T细胞,获得慢病毒颗粒,再将该病毒颗粒转染入NIH3T3细胞,用qRT-PCR验证细胞内PINK1 mRNA表达水平以验证敲减效果。结果：筛选出可以用于后续实验的高效靶向KD2序列,并成功转染到小鼠NIH3T3细胞中,在感染复数（MOI）为50时,KD2的沉默效果最好,敲减率达到66.4%。结论：成功构建了高效靶向小鼠PINK1-siRNA慢病毒载体,其可稳定转染小鼠NIH3T3细胞,可高效抑制PINK1 mRNA的表达。为下一步利用其感染神经细胞或注入动物脑内,进一步研究PINK1基因在帕金森病发病过程中的作用环节和机制提供了分子生物学的技术基础。小鼠脑潜伏巨细胞病毒激活模型的建立
摘要：目的：我们建立了小鼠脑潜伏巨细胞病毒激活模型,来实现小鼠脑内潜伏的巨细胞病毒（MCMV）的激活,并对潜伏MCMV激活时程进行分析,确定MCMV即刻早期蛋白基因1（ie1）基因转录,完成对ie1基因转录和活病毒产生量时程动力学的分析,以及为进一步阐明原始MCMV在脑中潜伏的细胞类型提供模型。方法：采用出生后两天的BALB/c幼鼠,经右侧耳和眼连线为底边的正三角形的中心将Smith Strain MCMV 500 PFU/5μL注射进入右侧脑室,培养至16周。之后,将脂多糖（LPS）依15μg/kg体重（接近致死量）分别经腹腔和侧脑室内注射,对照组注射生理盐水。于注射后的1日,2日,5日,7日,14日和21日分别在LPS组和对照组中选取5只小鼠取脑。应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和高敏感性病毒空斑实验（结合病毒空斑实验和RT-PCR）测定MCMV即刻早期蛋白1（IE1）mRNA的表达以及活病毒产生定量分析。结果：LPS组中,可于14日和21日的脑内检测到IE1 mRNA的转录,敏感性病毒空斑实验只在14日和21日出现细胞病毒效应（CPE）,病毒量约为4.29×104 PFU/μL和5.20×105PFU/μL,相应对应MEF细胞匀浆物的RT-PCR结果检测到7,14,21日有IE1 mRNA转录。结论：该实验成功建立了小鼠脑潜伏巨细胞病毒激活的模型,并证实和分析了即刻早期蛋白基因ie1在潜伏MCMV激活过程中的表达和时程。该模型的建立将为进一步阐明MCMV在脑中潜伏细胞类型以及MCMV在急性感染、潜伏和重激活过程中对中枢神经细胞的影响提供研究平台,并为人巨细胞病毒（HCMV）的临床研究提供实验依据。七氟醚、异氟醚对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响
摘要：目的：观察不同浓度的七氟醚（Sev）、异氟醚（Iso）对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及对顺铂化疗敏感性的影响。方法：体外培养骨肉瘤MG63细胞。用噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度七氟醚和异氟醚对MG63细胞增殖的影响。平板克隆形成检测不同浓度七氟醚和异氟醚对MG63细胞克隆形成率的影响。流式细胞术检测细胞凋亡。结果：七氟醚、异氟醚对骨肉瘤MG63细胞增殖有一定抑制作用（P〈0.05）,相对其它浓度5.1%Sev和2.6%Iso抑制作用更明显（P〈0.05）。七氟醚、异氟醚对骨肉瘤MG63细胞克隆形成有抑制作用（P〈0.05）。不同浓度Sev、Iso促进MG63凋亡作用不明显（P〉0.05）。2.5%Sev、2.0%Iso使骨肉瘤MG63细胞对顺铂诱导的凋亡率降低（P〈0.05）。结论：不同浓度的七氟醚、异氟醚可抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖及克隆形成,高浓度的七氟醚、异氟醚对其增殖抑制作用更明显。七氟醚和异氟醚不促进骨肉瘤MG63细胞的凋亡,但可以降低其对顺铂化疗敏感性。毛蕊异黄酮抑制SIRT1促乳腺癌细胞MCF-7凋亡
摘要：目的：探讨毛蕊异黄酮促乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。方法：MTT检测低、中、高（10μM,50μM,100μM）剂量的毛蕊异黄酮对细胞活力的影响;Tunel检测毛蕊异黄酮对细胞凋亡的影响;Western blot检测SIRT1,p53和cleaved caspase-3的蛋白表达;Real-time PCR检测caspase-3 mRNA的表达。结果：毛蕊异黄酮能够剂量依赖性地降低细胞活力,100μM剂量组的毛蕊异黄酮显著地促进肿瘤细胞凋亡并降低SIRT1,增加p53和cleaved caspase-3的蛋白表达。SIRT1抑制剂烟酰胺（Nicotinamide,NAM,300μM）组与毛蕊异黄酮处理组相比显著地抑制SIRT1的蛋白表达,p53和cleaved caspase-3蛋白表达水平进一步增加;SRT1720（SIRT1特异性激动剂）与毛蕊异黄酮共孵育组逆转SIRT1蛋白表达,降低p53和cleaved caspase-3的蛋白水平。结论：毛蕊异黄酮促进肿瘤细胞MCF-7的凋亡,部分可能是通过降低SIRT1的表达水平,从而增加p53和cleaved caspase-3的蛋白表达促进细胞凋亡。氧化低密度脂蛋白促进培养的人肾小球系膜细胞LOX-1表达
摘要：目的：研究氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）对人肾小球系膜细胞植物血凝素样受体（lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor,LOX-1）表达。方法：不同浓度的Ox-LDL和培养的人肾小球系膜细胞共孵育,应用Real-time PCR和Western Blot方法检测Ox-LDL对人肾小球系膜细胞LOX-1表达的影响。结果：Ox-LDL剂量和时间依赖性促进人肾小球系膜细胞LOX-1mRNA和蛋白表达。Ox-LDL 40μg/mL刺激细胞0-24小时,于12小时达峰值。Ox-LDL 10、20、40、60μg/mL分别作用于细胞12小时,40μg/mL组达到峰值,为基础值的3.73倍。Ox-LDL 40μg/mL刺激细胞0-24小时,LOX-1蛋白24小时达高峰,Ox-LDL 10、20、40、60μg/mL分别作用细胞24小时,40μg/mL组细胞LOX-1蛋白达到峰值,为基础值的1.81倍。结论：Ox-LDL在一定浓度范围内剂量和时间依赖性促进人肾小球系膜细胞LOX-1表达。不同生境具有抗肿瘤活性的海洋真菌筛选
摘要：目的：为了测定海口沿海海域不同生境的海洋真菌抗肿瘤状况。方法：我们从海口西海岸沿线、南渡江入海口处以及演丰红树林三个不同生境分离到162株海洋真菌,通过MTT比色法测定海洋真菌代谢产物对黑色素瘤B16的抑制活性。结果：其中75.93%的海洋真菌代谢产物对B16细胞增殖有不同的抑制作用,来自西海岸沿线生境的真菌有77.36%具有抑制B16生长作用,来自入海口生境的真菌为77.27%,来自红树林的真菌为70.58%,并且不同生境的真菌代谢物的细胞毒性强弱也有明显的区别。结论：不同生境的真菌具有不同的抗肿瘤作用,筛选具有某种活性海洋真菌菌株时,可以选择容易产某种活性成分的目的生境。改良皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型
摘要：目的：采用改进的皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症的疾病模型,在保证成模的前提下,使皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型更加简单易操作,且成模效果更明显,术后易寻找病灶。方法：取性成熟期雌性SD大鼠10只,体重约250±5 g,术前五日连续给予苯甲酸雌二醇注射0.04 mg/每天,然后采用改良的皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,既将大鼠自体双侧子宫切下,取其中一侧子宫种植至皮下血供较丰富处,术后第十日起连续五日给予苯甲酸雌二醇注射,于术后四周可观察腹部皮下病灶。结果：造模四周后见皮下种植的皮肤处有明显的圆形突起,切开皮肤可见种植的一侧子宫完整成活,与周围界限清晰,病灶明显易见,血运丰富。结论：实验结果证明此种方法较文献提供的皮下种植法更为简单易操作,省去了分离子宫内膜与肌层的步骤,且有病灶明显术后易寻找病灶的优点。vFLIP激活Jurkat细胞表达HIV抑制因子的研究
摘要：目的：检测KSHV编码的vFLIP蛋白对Jurkat细胞HIV抑制因子表达的影响。方法：本研究首先构建真核表达载体pIRES2-EGFP-vFLIP,再将其电穿孔至Jurkat细胞,然后使用实时荧光定量PCR技术检测Jurkat细胞中A3G、A3F、CCL5等HIV抑制因子的表达水平,从而探讨vFLIP抗HIV/AIDS的作用及机制。结果：成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-vFLIP,电转染效率达到40%左右。与对照载体转染组相比,vFLIP转染组内Jurkat细胞中CCL5、A3G、A3F及Mx2基因的表达分别上调了6.71、2.20、1.52及14.47倍。结论：vFLIP蛋白可以激活Jurkat细胞内某些HIV抑制因子的表达,提示其具有一定的抗HIV/AIDS作用。金黄色葡萄球菌LukF-PV基因的原核表达及血清特异性抗体的检测
摘要：目的：在大肠杆菌中表达金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）LukF-PV基因,纯化重组蛋白并以其为抗原检测儿童SA感染者血清特异性IgG抗体,分析不同部位SA感染患者血清LukF-PV抗体水平。方法：将Luk F-PV克隆至pET-28a（＋）载体,IPTG诱导重组蛋白表达、His柱纯化重组蛋白后,用间接ELISA检测儿童SA感染者与健康对照者血清特异性IgG抗体水平。结果：成功表达纯化LukF-PV蛋白,儿童SA感染组与健康对照组血清特异性抗体均值分别为（0.309±0.063）、（0.505±0.261）,具有统计学意义（P〈0.05）。不同部位来源标本的感染者中血液组和扁桃体组抗体OD均值分别为（0.634±0.225）、（0.481±0.264）与健康对照组有显著差异（P〈0.05）,其余各组与健康对照组无显著差异（P〉0.05）。抗体阳性率统计分析中血液组分别与脑脊液组、扁桃体组、咽拭子组、痰液组有统计学意义（P〈0.05）,其余各组间均无显著差异（P〉0.05）。结论：LukF-PV成功表达纯化,,儿童SA感染组LukF-PV特异性IgG抗体显著高于健康对照组,其中来源于血液和扁桃体部位的SA感染者抗体水平与健康者有显著差异,尤以血液感染者最显著。异氟烷预处理对小鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带炎性小体NALP3表达的影响
摘要：目的：研究吸入麻醉药异氟烷预处理对小鼠急性脑梗死缺血半暗带的保护作用,探讨NALP3（NACHT-LRR-PYD-containing Protiein-3 inflammsome）其中发挥的作用。方法：将45只ICR小鼠分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I/R）,异氟烷预处理组（Iso）,每组数字15只。其中假手术组仅分离血管,缺血再灌注组采用线栓法制备缺血再灌注小鼠脑缺血半暗带模型,异氟烷预处理组造模前吸入2.0%异氟烷2 h。再灌注24 h后处死小鼠,激光共聚焦检测脑组织内NALP3的表达分布;蛋白免疫印迹（Western blot）法和荧光实时定量PCR（Polymerase Chain Reaction）法检测脑缺血半暗带中NALP3、NF-κB的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测脑缺血半暗带中IL-1β的表达。结果：脑组织内NALP3的表达主要集中于脑缺血半暗带中,正常组织与梗死区NALP3表达较少;脑缺血再灌注后,I/R组小鼠脑缺血半暗带中NALP3、NF-κB的蛋白表达水平升高,mRNA表达水平显著升高,与sham组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;异氟烷与处理后,Iso组小鼠脑缺血半暗带中NALP3、NF-κB的蛋白表达水平降低,mRNA表达水平显著降低,与I/R组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;ELISA检测结果显示,I/R组脑缺血半暗带中IL-1β表达水平较Sham组升高了4倍,而异氟烷预处理组的小鼠脑缺血半暗带IL-1β表达水平较I/R组降低36%,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：异氟烷预处理可抑制NALP3的表达及炎症因子IL-1β的分泌,这种抑制作用可能与异氟烷抑制NF-κB的表达有关。血清乳酸评估对危重患者预后的临床研究
摘要：目的：研究血清乳酸评估对危重患者预后的意义,为后期临床诊断提供参考。方法：选取2012年3月—2014年4月我院收治的危重患者78例,对其血清乳酸进行评估,根据评估结果分为观察组与对比组,40例患者血清乳酸在监测过程中升高为观察组,38例患者血清乳酸监测持续正常为对比组。分析两组患者不良预后与临床变化,同时将观察组存活与死亡患者的血清乳酸监测情况进行评估。结果：观察组多器官功能不全者32例,休克31例,死亡22例;对比组多器官功能不全者15例,休克3例,死亡8例。观察组进入重症监护病房后,死亡组乳酸值为（6.21±2.51）mmol/L,乳酸峰值为（8.87±2.59）mmol/L,0.5天乳酸清除率为（23.21±18.54）mmol/L;存活组乳酸值为（2.21±1.89）mmol/L,乳酸峰值为（4.12±2.15）mmol/L,0.5天乳酸清除率为（44.78±26.58）mmol/L。结论：血清乳酸评估对危重患者预后具有十分重要的意义。下肢大段感染性骨缺损的治疗
摘要：目的：探讨应用骨搬运、自体腓骨瓣移植辅助皮瓣移植等技术治疗下肢大段感染性骨缺损的疗效。方法：对2006年6月至2012年6月收治的43例男性、20例女性下肢大段感染性骨缺损患者的治疗效果进行回顾性研究。所有患者均在彻底清创基础上分别应用骨搬运技术和自体腓骨瓣移植技术进行骨缺损的同期修复。其中,采用骨搬运技术治疗28例,采用腓骨瓣移植技术治疗35例,包括单纯腓骨瓣14例、腓骨皮瓣移植9例、腓骨瓣＋股前外侧皮瓣移植12例。结果：63例患者术后获6~26个月（平均17.2个月）的随访。除3例感染未能控制外,其余60例患者下肢畸形或残缺均得到矫正,负重力线、肢体外观及功能基本恢复,未出现严重并发症。参照Johner-wruhs疗效评定标准：优28例,良23例,可6例,差6例,优良率为81.0%。结论：下肢大段感染性骨缺损往往涉及骨、肌肉、皮肤软组织等诸多环节,应根据病情需要采用综合的治疗方式,以保存患者的肢体功能、减少手术次数、缩短治疗时间和节省治疗费用。经脐单孔腹腔镜辅助整形术治疗急性胆囊炎的临床效果
摘要：目的：探讨单孔腹腔镜辅助整形术（TUES）对急性胆囊炎患者腹壁美观及其肝功能的影响。方法：选取我院急性胆囊炎择期手术患者130例,随机分为观察组和对照组。观察组采用经脐单孔腹腔镜胆囊切除术联合整形术,对照组采用三孔腹腔镜胆囊切除术。观察并比较两组手术时间、术后疼痛评分、切口满意度及肝功能指标的变化情况。结果：与对照组比较,观察组患者手术时间长,术后疼痛评分低,患者对切口美观满意度高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。两组住院日无显著差异（P〉0.05）。两组患者术前ALT、AST和ALP水平无显著差异（P〉0.05）。两组患者术后ALT、AST和ALP水平均高于术前,组内比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。观察组患者术后ALT、AST和ALP水平低于对照组,组间比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：单孔腹腔镜辅助整形术能够改善急性胆囊炎患者病情,提高腹壁美观效果,而且对肝功能影响较小,值得临床推广。血清血管生成素相关生长因子水平与子痫前期发病的关系
摘要：目的：探讨血清血管生成素相关生长因子（AGF）水平与子痫前期发病的关系。方法：选择2013年1月至2014年12月间在我院进行产前检查并行剖宫产终止妊娠的子痫前期患者42例作为研究组,同期收住的正常妊娠孕产妇30例作为对照组。应用双抗体酶联免疫吸附法检测血清AGF水平,应用RT-PCR法测定胎盘组织AGF mRNA水平。结果：研究组收缩压、舒张压及血清AGF水平显著高于对照组,分娩孕周显著小于对照组,新生儿出生体重显著低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。研究组胎盘AGF mRNA水平显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。多因素Logistic分析显示,孕产妇胎盘AGF mRNA水平与血清AGF水平、孕产妇收缩压、舒张压呈正相关（r=0.605,0.428,0.403,P均〈0.05）。结论：子痫前期患者血清AGF水平异常,胎盘AGF表达异常,提示AGF可能与子痫前期发病有关。右美托咪定在血管外科介入手术麻醉中的应用
摘要：目的：探讨靶控输注不同浓度右美托咪定对血管外科介入手术的效果。方法：选择周围血管疾病成年患者60例,随机分为I、II、III三组,每组20例。各组右美托咪定靶控输注浓度分别为0.2μg/kg/h,0.3μg/kg/h和0.4μg/kg/h,术中监测并记录各组手术开始前（T1）,手术开始10 min（T2）,手术开始30 min（T3）,手术开始60 min（T4）四个时间点的平均动脉压（MAP）,心率（HR）,血氧（Sp O2）,脑电双频指数（BIS）。结果：T2、T3、T4时平均动脉压Ⅰ组与Ⅱ组比较P〈0.05,Ⅰ组与Ⅲ组比较P〈0.05。T2时Ⅲ组与Ⅰ、Ⅱ组比较P〈0.05,T3、T4时Ⅱ、Ⅲ组与Ⅰ组比较均P〈0.05。结论：右美托咪定靶控输注浓度为0.3μg/kg/h和0.4μg/kg/h时,对血管外科介入手术能产生良好的镇静作用,并且可保证术中循环的稳定。妊娠期糖尿病孕妇血糖水平与新生儿体质量的相关性
摘要：目的：探究妊娠期糖尿病（GDM）孕妇产前血糖水平与新生儿质量的关系。方法：选取2012年6月至2014年6月我院分娩的GDM孕妇97例为研究对象,按照随机数字表法将患者随机分为严格组（50例）和宽松组（47例）,选择同期血糖正常孕妇50例作为对照组;分析孕妇血糖水平与新生儿出生质量的关系。结果：对照组血糖水平、新生儿质量以及巨大儿的发生率均明显低于宽松组和严格组（P〈0.05）;严格组的血糖水平、新生儿质量以及巨大儿的发生率均明显低于宽松组（P〈0.05）;孕妇血糖水平与新生儿质量存在显著的正相关（r=0.72,P〈0.05）。结论：产前孕妇血糖水平与新生儿质量存在显著的正相关,对GDM患者产前进行严格的血糖控制有助于降低巨大儿的发生率,有利于母体和新生儿的健康。483例儿童扁桃体腺样体肥大分离菌的分布和药敏特征
摘要：目的：分析儿童手术切除的扁桃体腺样体分离菌的分布及药敏特征,为其临床预防和治疗提供指导。方法：将483例扁桃体腺样体进行细菌培养,分析潜在致病菌组成及其药敏特征。结果：扁桃体和腺样体的细菌培养阳性率分别为66.43%和52.88%,主要病原菌及其分离率分别为金黄色葡萄球菌（20.71%）、流感嗜血杆菌（15.11%）、肺炎链球菌（10.97%）、A群链球菌（6.42%）,金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率达82%,21%菌株为MRSA,流感嗜血杆菌β-内酰酶检测阳性率为30.92%,复方新诺明和氨苄西林耐药率较高,分别为50.69%和30.14%,肺炎链球菌对青霉素耐药率为32.08%,红霉素、四环素、复方新诺明耐药率高,分别为81.13%、79.25%和69.81%,A群链球菌对青霉素仍然100%敏感,红霉素、克林霉素、四环素的耐药率高,分别为83.87%、77.42%、58.06%。结论：扁桃体和腺样体主要分离菌有金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、A群链球菌,不同检出菌的耐药性差异明显,临床可根据常见检出分离菌的分布及药敏特征预防和治疗感染。热烈祝贺本刊主编申宝忠教授荣获国家科技进步二等奖
摘要：2015年1月9日,＂2014年国家科技奖励大会＂在北京人民大会堂举行,国家主席、国务院总理等领导人出席会议并为获奖代表颁奖。本刊主编、哈尔滨医科大学附属第四医院院长、国家＂973计划＂项目首席科学家--申宝忠教授主持并领导＂多功能分子成像肿瘤诊疗关键技术及应用＂项目荣获国家科学技术进步奖二等奖,该奖项是我国科技进步奖类唯一的一项分子影像学研究领域成果。
