hsa-miR-20a低表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定
摘要：目的：构建hsa-mi R-20a低表达慢病毒载体,检测其在HL-60中表达。方法：采用In-fusion重组交换克隆法设计并合成hsa-mi R-20a前体序列的扩增引物,扩增获得目的片段插入慢病毒GV159中,得到重组的LV-hsa-mi R-20a表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带hsa-mi R-20a的重组慢病毒并测定病毒滴度。取对数生长期HL-60细胞根据病毒滴度及细胞MOI值感染慢病毒,感染后24 h、48 h、72 h、96 h镜下观察荧光表达情况,判断感染效率,q RT-PCR检测HL-60细胞hsa-mi R-20a的表达变化。结果：成功构建LV-hsa-mi R-20a低表达慢病毒载体,其病毒滴度为（8E＋8）TU/m L。该病毒感染HL-60细胞的效率可高达到80%,并可有效降低HL-60细胞hsa-mi R-20a表达水平。结论：成功构建了hsa-mi R-20a低表达慢病毒载体,包被的慢病毒可以在HL-60细胞中实现低表达效果,为后续功能研究奠定了基础。参芪扶正注射液对急性淋巴细胞白血病化疗患者造血和免疫功能的影响
摘要：目的：观察参芪扶正注射液对急性淋巴细胞白血病化疗患者造血及免疫功能的影响。方法：收集96例处于初治诱导缓解治疗阶段的急性淋巴细胞白血病患者,并将其随机分为治疗组和对照组。治疗组48例患者在进行常规化疗的同时给予参芪扶正注射液250 m L,1次/天,共28天;对照组48例患者仅接受常规化疗,两组患者均给予相同的支持对症治疗。治疗结束后,观察两组患者的疾病缓解率、治疗前后造血系统、T和B淋巴细胞亚群的变化情况。结果：化疗结束后,治疗组患者的疾病缓解率为89.6%,对照组为83.3%,两组比较无统计学差异（P〉0.05）;化疗14天及化疗结束后1周,治疗组患者的白细胞、红细胞计数和血红蛋白水平明显高于对照组（P〈0.05）;且化疗结束后1周,治疗组患者的CD3＋、CD4＋及CD4＋/CD8＋含量均明显高于对照组（P〈0.05）。而两组患者治疗前后的血小板计数、CD3-CD19＋含量比较均不具有统计学差异（P〉0.05）。结论：参芪扶正注射液辅助治疗不仅能够改善化疗所致的急性淋巴细胞白血病患者的骨髓抑制,而且能够提高其细胞免疫功能,有助于患者化疗后的恢复。热烈祝贺本刊名誉主编阮长耿教授荣获“法国医学科学院塞维雅奖”!
摘要：近日,＂第四届中法医学研讨会＂在中国西安盛大召开,会议公布了＂法国医学科学院塞维雅奖＂获奖名单。我刊《现代生物医学进展》名誉主编,中国工程院院士、苏州大学博士生导师阮长耿教授凭借其多年来对血液疾病的研究以及中法医学科学合作交流等方面的杰出贡献而获此殊荣,这对我国医学科学事业的发展具有重要意义。＂大鼠二次脑损伤后脑组织SOD及MDA的变化研究
摘要：目的：观察大鼠二次脑损伤后脑组织SOD及MDA的变化,进一步探讨过氧化反应在二次脑损伤机制中的作用。方法：90只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、弥漫性脑损伤组（B组）和二次脑损伤组（C组）,建模成功后,分别于伤后1 h、3 h、6h、12 h、24 h、48 h处死动物,取额叶组织匀浆,分别测定大鼠脑内SOD及MDA的含量。结果：伤后1h开始,B、C组中SOD含量呈现先上升后下降的趋势,并随时间呈持续下降趋势直至伤后24 h,C组较B组下降程度更加明显（P〈0.05）;伤后3 h,B、C组中SOD含量均增高,B组增高程度和速率均高于C组（P〈0.05）。伤后1 h开始,B、C组MDA含量呈升高趋势,并于24小时达峰值,C组升高趋势较B组更显著,伤后6 h、24 h、48 h,C组与B组之间相比统计学差异显著（P〈0.05）。结论：创伤性脑损伤及二次脑损伤后,脑组织内过氧化反应明显加重,SOD及MDA均出现明显变化,二次脑损伤的过氧化反应较脑损伤组更加严重且持续时间更长,且MDA较SOD的变化具有滞后性。乙型肝炎病毒感染Babl/c乳鼠动物模型的研究
摘要：目的：目前HBV感染动物模型各有局限,无法全面研究HBV。拟建立人HBV血清感染Babl/c乳鼠的动物模型,以便于研究HBV感染与乳鼠免疫力低下的相关性。方法：将20只Babl/c乳鼠随机分为实验组、对照组、PBS组及空白组,通过高压水动力尾静脉注射法将人HBV血清、正常人血清、PBS注入各组乳鼠体内,记录接种后乳鼠体温及体质量。于接种后第7、15、30 d采集血清标本,应用ELISA检测HBs Ag、HBe Ag的表达情况,实时荧光定量PCR检测HBV DNA浓度。结果：接种后各组小鼠体温及体质量均无明显变化。实验组中共4只乳鼠可检测到HBs Ag为阳性且维持时间长达30 d,但HBe Ag均为阴性,HBV DNA浓度均未达500 IU/ml;余下各组检测HBs Ag、HBe Ag均为阴性。结论：通过高压水动力尾静脉注射法接种人HBV血清,可成功使Babl/c乳鼠感染HBV。本实验证实乳鼠免疫力低下,HBV血清进入体内未能有效清除,对HBV存在易感性,为建立HBV感染动物模型提供实验依据,可用于研究HBV对免疫状态的影响。下丘脑腹内侧核损毁对大鼠nesfatin-1/NUCB2表达的影响
摘要：目的：观察下丘脑腹内侧核（VMH）损毁对大鼠脂肪组织nesfatin-1/NUCB2表达的影响及其机制。方法：电损毁VMH,观察大鼠体重和脂肪组织变化,采用Western blot检测脂肪组织中nesfatin-1/NUCB2表达改变。腹腔注射6-羟多巴胺（50 mg/kg）以阻断交感神经;持续外周注射卡巴胆碱（180μg/kg）用以模拟VMH损毁,观察其对大鼠皮下脂肪nesfatin-1/NUCB2表达的影响。结果：与对照组和假手术组比较,VMH损毁后大鼠体重明显增加（P〈0.05）,皮下脂肪（P〈0.05）和肠系膜脂肪（P〈0.05）也显著增多;Western blot分析结果显示,nesfatin-1/NUCB2在胰腺和肝脏中表达较多,但皮下、肠系膜脂肪和肩胛间棕色脂肪组织（i BAT）中表达较少,骨骼肌（腓肠肌）中鲜有表达;与对照组和假手术组比较,VMH损毁组大鼠nesfatin-1/NUCB2在肝脏、胰腺、骨骼肌和i BAT中表达无显著差异（P〉0.05）,皮下脂肪（P〈0.05）和肠系膜脂肪（P〈0.05）nesfatin-1/NUCB2表达显著增多与对照组相比,6-羟多巴胺组nesfatin-1/NUCB2表达显著升高（t=3.43,P〈0.05）,而卡巴胆碱组nesfatin-1/NUCB2表达无显著差异（t=0.37,P=0.72）。结论：VMH损毁后大鼠脂肪组织nesfatin-1/NUCB2表达改变可能通过抑制交感神经活动介导。CTLA-4＋49A〉G基因多态性与结直肠癌的相关性研究
摘要：目的：探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）＋49 A〉G位点多态性与结直肠癌发生的相关性,为早期预测结直肠癌的发生提供临床参考依据。方法：选取结直肠癌病例231例未实验组和正常健康体检者325例为对照组,取其空腹外周静脉血提取DNA后,采用聚合酶链式反应（PCR）技术对CTLA-4基因第1外显子区＋49位点DNA进行扩增,产物用限制性片段长度多态性（RFLP）方法检测CTLA-4第1外显子区＋49A〉G位点的多态性,比较两组杂合子AG和纯合子AA、GG基因型发生的频率、A等位基因与G等位基因的分布,分析CTLA-4＋49 A〉G位点多态性与结直肠癌发生的相关性。结果：两组间CTLA-4基因外显子1区＋49A〉G位点杂合子AG和纯合子AA、GG基因型发生的频率以及A等位基因与G等位基因的分布比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：CTLA-4基因外显子1区＋49 A〉G基因多态性与我省汉族人群结直肠癌的发病无显著相关性。慢病毒转染对鼻咽癌细胞5-8F增殖迁移的影响
摘要：目的：探讨慢病毒转染对鼻咽癌细胞株5-8F增殖、迁移的影响,以验证慢病毒转染是否能有效的应用于鼻咽癌细胞的增值及迁移相关研究。方法：以红色荧光标记的慢病毒为转染载体,选定不同的MOI值转染鼻咽癌5-8F细胞株,扩大培养后筛选纯化,流式细胞仪检测转染效率。以最佳MOI值转染后的5-8F（RFP-5-8F）细胞为实验组,未转染的亲代5-8F为空白对照组,取对数生长期未转染的亲代5-8F和红色荧光标记的慢病毒转染的5-8F（RFP-5-8F）细胞进行MTT、划痕实验,观察细胞镜下形态,了解细胞转染前后生长曲线,细胞迁移能力的变化。结果：流式细胞仪检测5-8F细胞慢病毒转染效率大于95%,转染最佳MOI值为30,镜下荧光强度适中。实验组与对照组比较,转染前后5-8F细胞光镜形态相似,生长曲线一致,差异无统计学意义（P=0.997）,划痕实验显示5-8F与RFP-5-8F细胞迁移能力一致,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：慢病毒转染后鼻咽癌细胞能真实有效的的反应原细胞的增值及迁移能力,可以很好的应用于鼻咽癌增殖及其转移机制的相关研究。RNA特异腺苷脱氨酶1（p150亚型）抑制肝细胞脂质合成
摘要：目的：在油酸诱导的肝细胞脂肪变模型中,检测RNA特异腺苷脱氨酶1 p150亚型（ADAR1-p150）高表达细胞系中脂肪合成的变化。方法：利用本课题组前期摸索的油酸刺激人胚胎肝细胞L-02细胞系脂肪变的条件,q RT-PCR和Western-Blot检测油酸刺激组和对照组ADAR1-p150表达变化;将构建成功的ADAR1-p150过表达慢病毒载体GV166-ADAR1-p150及空载体病毒GV166-control感染L-02细胞,检测感染细胞中ADAR1-p150的m RNA和蛋白表达水平;通过油红O染色和BODIPY染色观察L-02 ADAR1-p150和L-02 control细胞中脂滴形成,并进一步利用高内涵系统检测其荧光强度,对脂滴合成作定量分析。结果：L-02细胞在油酸刺激后ADAR1-p150的m RNA和蛋白水平降低;成功构建ADAR1-p150过表达慢病毒载体GV166-ADAR1-p150及空载体病毒GV166-control,q RT-PCR及Western-Blot检测显示病毒转染GV166-ADAR1-p150后ADAR1-p150在细胞中的表达水平显著升高;油红O染色和BODIPY染色发现L-02 ADAR1-p150较L-02 control细胞胞质中脂滴数量减少。高内涵筛选系统检测提示L-02 ADAR1-p150组中脂滴的荧光强度明显较L-02 control组低。结论：成功构建ADAR1-p150过表达稳定转染L-02细胞系,并证实高表达ADAR1-p150能够抑制脂肪合成。脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞的实验研究
摘要：目的：探讨通过化学诱导的方法,诱导脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞,为组织工程神经寻找一种新的种子细胞来源。方法：通过酶消化法,分离获得原代脐带间充质干细胞。体外培养至第3代（P3）,以1×103/cm2接种于培养瓶中,待细胞长至亚融合状态,吸弃培养液,加入含β-巯基乙醇的培养液预诱导24 h。然后,加入含有全反式维甲酸的培养液进一步诱导72 h。最后,加入含有胶质细胞生长因子的培养液,作用两周。对诱导后的脐带间充质干细胞用免疫荧光及RT-PCR法,进行形态观察和表型鉴定。结果：经过上述诱导过程,脐带间充质干细胞的形态,由开始时的扁平、片状、多极,类似成纤维细胞状,逐渐变为长梭形,双极或三极,类似许旺细胞。同时,表达许旺细胞特异性标志S-100、P75;而且S100,P75的m RNA水平也明显上调,并且可以观测到GFAP的m RNA条带。结论：化学诱导法,可以将脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,有望为组织工程神经提供一种新的许旺细胞来源。卵巢上皮性癌中干扰素介导的跨膜蛋白1的表达意义
摘要：目的：探讨干扰素介导的跨膜蛋白1（Interferon-induced transmembrane protein 1,IFITM1）基因在卵巢上皮性癌中表达的相关性及其意义。方法：应用Western blotting检测正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤和卵巢上皮性癌组织中IFITM1蛋白表达。免疫组织化学检测12例正常卵巢、21例卵巢良性肿瘤、18例卵巢交界性肿瘤和85例卵巢上皮性癌组织中IFITM1的蛋白表达,同时分析IFITM1表达状况与临床病理因素之间的相关性。结果：Western blotting显示卵巢上皮性癌和卵巢交界性肿瘤中IFITM1表达水平明显高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤。免疫组化显示在正常卵巢组织中IFITM1阳性表达率为41.7%（5/12）,在卵巢良性肿瘤组织中71.4%（15/21）,在卵巢交界性肿瘤组织中为72.2%（13/18）,在卵巢上皮性癌中为77.6%（66/85）,IFITM1蛋白表达强度在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤、上皮性卵巢癌间的比较有统计学意义（P〈0.05）。IFITM1蛋白表达与病理类型、肿瘤分化程度、肿瘤FIGO分期有关（P〈0.05）,与淋巴结转移、腹水无明显相关性。化疗敏感组和耐药组的IFITM1表达强度间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：IFITM1在正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤和卵巢上皮性癌组织中的表达依次升高,并与卵巢癌以铂类为基础的化疗耐药性产生有相关性,为进一步研究IFITM1在卵巢癌诊治及化疗中的应用前景提供依据。川芎嗪对急性髓性白血病KG-1a细胞表面标志物的影响
摘要：目的：探讨川芎嗪对急性髓性白血病KG-1a细胞表面标志物的影响。方法：通过体外细胞培养技术,利用中药有效成分单体干预细胞生长,运用MTT法及流式细胞术检测了经川芎嗪干预后的KG-1a细胞表面标志物CD34、CD33、CD123与CD7、CD56、CD44表达。结果：川芎嗪干预KG-1a细胞48小时后,细胞表面标志物CD34＋CD33＋、CD34＋CD123＋、CD33＋CD123＋表达率较对照组明显减少（P〈0.05）,但是对于CD34＋表达率无明显作用,同时,川芎嗪干预KG-1a细胞48小时后,KG-1a细胞表面标志物CD7、CD56、CD44荧光强度与对照组比较明显降低（P〈0.05）,但是对KG-1a细胞表面标志物CD7、CD56、CD44表达率无明显影响,与对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：川芎嗪逆转白血病耐药作用,除能够降低MDR、P-gp高表达外,能够降低白血病干细胞特异性表面标志物CD34＋CD123＋、CD34＋CD33＋、CD33＋CD123＋、CD7、CD56、CD44表达水平,从白血病干细胞水平逆转多药耐药。不同场强下IRE的肿瘤消融作用及对抗肿瘤免疫的影响
摘要：目的：探讨不同电场强度的不可逆电穿孔（IRE）对于肿瘤的消融效果以及其所引起的肿瘤免疫反应。方法：将B16黑色素瘤细胞接种于C57小鼠,制作黑色素瘤小鼠模型,应用不可逆电穿孔仪对肿瘤进行消融,通过测量肿瘤生长大小研究不同场强下的消融效果。通过CD4、CD8a免疫组化染色初步了解不同场强激发的免疫反应的强弱,从而选择最佳消融参数。结果：随着电场强度增加,肿瘤消融效果逐渐趋于理想,然而平板电极夹之间过高电场引发的热效应则不利于后续抗肿瘤免疫反应的激活。选择合适的电场,通过增加电击组数可以达到良好的治疗效果。结论：IRE对肿瘤的消融优势在于它能够很好的激活机体的抗肿瘤免疫反应,因此,选择合适的电场增加电击组数可以起到很好的抗肿瘤作用,具有很好的应用前景。肿瘤淋巴管入侵与无淋巴结转移膀胱癌复发及预后的相关性分析
摘要：目的：分析肿瘤淋巴管入侵与无淋巴结转移膀胱癌复发和预后之间的关系。方法：选取临床资料完整的膀胱癌病例72例,分为淋巴结转移组（32例）和无淋巴结转移组（40例）。采用Spearman相关分析探讨淋巴管入侵与膀胱癌复发和预后的相关性,应用Kaplan-Meier法描绘生存曲线,Cox比例危险度模型筛选影响膀胱癌患者预后的因素。结果：在72例膀胱癌组织中,淋巴管入侵的阳性率是48.6%（35/72）,淋巴管入侵的阳性率随肿瘤分期和分级增加而显著升高（P〈0.05）;淋巴结转移组的淋巴管入侵阳性率为68.8%（22/32）,显著高于无淋巴结转移的32.5%（13/40）。淋巴管入侵与膀胱癌的临床分期、分级、淋巴结转移以及无淋巴结转移膀胱癌复发均显著相关（P〈0.05）。淋巴管入侵阴性的患者的五年总体生存率显著高于淋巴管入侵阳性者,淋巴管入侵是无淋巴结转移膀胱癌复发和预后不良的危险因素。结论：肿瘤淋巴管入侵与膀胱癌临床分期和淋巴结转移密切相关,并影响膀胱癌患者的总体生存率,可作为无淋巴结转移膀胱癌复发和预后的预测因素。自身抗体引起的ABO血型正反定型结果不一致
摘要：目的：对因自身抗体引起ABO血型正反定型结果不一致的疑难血标本进行血型鉴定和分析,探讨其原因和解决办法。方法：先用直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）确定ABO血型正反定型结果不一致的原因是由于自身抗体的存在,然后做吸收放散试验、抗体筛选试验等排除自身抗体的干扰以便血型的正确判定。结果：ABO血型正反定型结果不一致因自身抗体引起的有10例,其中温抗体7例,冷抗体3例,温抗体同时同种抗体阳性2例,冷抗体同时同种抗体阳性2例。结论：自身抗体会影响ABO血型的正确判定,选用合适的试验进行分析判断以提高血型鉴定的准确性。硝苯地平控释片联合替米沙坦对老年高血压患者动态血压及左室舒张功能的影响
摘要：目的：研究硝苯地平控释片联合替米沙坦对老年高血压患者动态血压以及左室舒张功能的影响。方法：选择我院2012年12月至2013年11月收治的轻、中度老年高血压合并左室舒张功能不全的患者84例为研究对象,并将其随机分为两组。对照组给予硝苯地平控释片30~60 mg/d,观察组在对照组的基础上,加用替米沙坦40 mg/d,降压未达疗效者,改为80 mg/d,疗程12周。期间观察和比较两组患者的动脉血压波动情况、左心室舒张功能及疗效。结果：对高血压的控制,观察组总有效率显著高于对照组（P〈0.05）,显效率高于对照组,但无统计学意义（P〉0.05）。动态血压监测及血压负荷结果提示两组治疗后的24 h收缩压平均值（24hm SBP）、24 h舒张压平均值（24hm DBP）、日间收缩压平均值（dm SBP）、日间舒张压平均值（dm DBP）、夜间收缩压平均值（nm SBP）、夜间舒张压平均值（nm DBP）均显著低于治疗前,且观察组显著优于对照组（P〈0.05）。两组的左心室射血分数（LVEF）、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、舒张期左室后壁厚度（LVPWD）、舒张期室间隔厚度（IVST）水平均较治疗前有所改善,但差异无统计学意义（P〉0.05）;观察组各指标水平优于对照组,但差异亦无统计学意义（P〉0.05）。结论：硝苯地平控释片联合替米沙坦治疗老年高血压有助于更加有效地控制其动态血压波动,且在一定程度上可改善左心室舒张功能。锁定板微创技术治疗老年人股骨远端骨折的临床效果观察
摘要：目的：探讨锁定板MIPO技术治疗老年人股骨远端骨折的临床效果。方法：回顾性分析2009年1月-2012年12月运用锁定板MIPO技术治疗老年人股骨远端骨折患者的临床资料,评估骨折类型、骨折愈合时间、6个月时的膝关节活动度和膝关节功能评分及临床并发症的发生情况。结果：共纳入33例老年人股骨远端骨折患者,平均年龄72岁,其中2例随访失败。87%的股骨远端骨折是关节外骨折;骨折平均愈合时间为12.56（8~29）周;术后6个月时平均活动范围超过105°：伸0°~30°,屈90°~140°;术后6个月的平均膝功能评分89.5;治疗过程中无植入失败、骨折不愈合和感染发生;术后早期发生下肢深静脉血栓（DVT）7例（22.6%）,均在膝关节水平以下。结论：锁定板结合MIPO技术是一种治疗老年人股骨远端骨折安全有效的方法,但要注意预防术后DVT的发生。非小细胞肺癌患者血液高凝状态的临床调查
摘要：目的：调查影响非小细胞肺癌患者高凝状态的临床相关因素。方法：对2011年3月至2012年11月入住北京军区总医院肿瘤科的195例非小细胞肺癌患者的高凝状态特征进行调查,并分析其与临床相关因素如年龄、性别、病理特征、ECOG评分、中心静脉置管、化疗、放疗、临床分期和合并疾病的关系。结果：195例NSCLC患者中,170例（87%）出现不同程度的凝血指标异常,42例（21.5%）出现PLT升高,78例（40%）出现FIB升高,12例（6.2%）出现TT延长,45例出现（23.1%）PT缩短,60例出现（30.8%）D-D升高,15例出现（7.7%）APTT缩短。NSCLC患者的高凝状态与其年龄、放疗、中心静脉置管均无关（P〉0.05）。而男性TT值显著高于女性,腺癌NSCLC患者FIB值显著高于鳞癌和其它类型NSCLC患者,ECOG≤2的NSCLC患者PT、FIB的水平显著高于ECOG〉2者,接受化疗的NSCLC患者APTT、PT水平均显著低于未化疗者,Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者FIB水平显著高于Ⅰ~Ⅱ期NSCLC患者,合并其它疾病的NSCLC患者TT、PT水平均显著低于无合并疾病者（P〈0.05）。结论：NSCLC患者易发生高凝状态,可能与其性别、病理类型、ECOG评分、化疗、临床分期及合并疾病有关,如何进行抗凝治疗以改善患者的生存质量还需要进一步研究。
