太白银莲花皂苷B对胶质瘤细胞生长抑制的研究
摘要：目的：太白银莲花皂苷B（AnemonetaipaiensissaponinB）是第一次从太白银莲花中经过系统化学分析和分离鉴定的皂苷之一，所以它的生物学效应目前仍然不清楚。在本研究中，我们首次体外研究太白银莲花皂苷B对胶质瘤细胞系的生物学效应，观察它对胶质瘤细胞增殖的的抑制作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定太白银莲花皂苷B对胶质瘤细胞生长曲线的影响，Hoechst33342细胞核染色后荧光显微镜观察，采用光学显微镜观察细胞的形态学变化。结果：MTT实验结果显示太白银莲花皂苷B对胶质瘤细胞U87MG和U251MG有强烈的生长抑制作用，且具有剂量依赖性，应用SPSS18．0统计软件得出太白银莲花皂苷B对U87MG细胞72h的抑制浓度为IC25=5．2μmol／L，IC50=6．7μmol／Land IC75=8．7μmol／L，U251细胞的抑制浓度为IC25=6．2μmol／L，IC50=7．9μmol／Land IC75=10．5μmol／L。Hoechst33342细胞核染色荧光显微镜观察以及光学显微镜下细胞形态观察显示出典型的凋亡细胞形态学特征，经过皂苷B处理后，细胞皱缩成圆球形，细胞核碎裂或者致密浓染，向核膜边缘聚集，染色质浓缩为半月状、车轮状或者马蹄状，凋亡小体出现。这些特征在24h时更明显。结论：体外实验初步显示，太白银莲花皂苷B对U87MG和U251MG细胞具有明显的增殖抑制作用，并具有促凋亡作用。SD大鼠原代胰岛细胞分离、纯化及培养技术的改进
摘要：目的：探讨大鼠胰岛细胞分离、纯化及培养的方法，并评价其生物学功能。方法：选用8-10周龄健康SD大鼠，采用胆总管逆行注射预冷胶原酶P溶液，37℃水浴静止消化，30目不锈钢筛网过滤，Ficoll400非连续密度梯度离心纯化。分离后的胰岛用DTZ染色计算胰岛产量，胰岛素释放试验评价其生物学功能。结果：胰岛细胞分布于Ficoll400浓度为23％～20％和20％～11％的界面之间。DTZ染色呈红色细胞团，胰岛产量为（606±56）IEQ／胰腺。纯度高达80-90％，活率≥90％，胰岛素释放功能良好。结论：胶原酶P溶液原位消化，Ficoll400纯化是一种高效简便的胰岛分离方法，分离的胰岛细胞数量多、纯度高及活性好。跨膜型TNF-α与NF-κB在三阴性乳腺癌中的表达及其意义
摘要：目的：探讨跨膜型TNF-α与磷酸化NF-κB在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化法检测52例三阴性乳腺癌与30例非三阴性乳腺癌组织中跨膜型TNF-α与磷酸化NF-κB的表达，并分析其与三阴性乳腺癌各临床指标的相关性。结果：跨膜型TNF-α与磷酸化NF-κB在三阴性乳腺癌中的阳性表达率分别为82．7％（43／52）和67．3％（35／52），均显著高于非三阴性乳腺癌，差异具有统计学意义（P〈0．05）。在三阴性乳腺癌中，跨膜型TNF-α及磷酸化NF-κB的表达与肿瘤大小和淋巴结转移与否显著相关（P〈0．05），且跨膜型TNF-α与磷酸化NF-κB的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论：跨膜型TNF-α及磷酸化NF-κB高表达可能预示着TNBC更差的化疗敏感性和预后，有望成为TNBC预后的重要预测因子。跨膜型TNF-α通过激活磷酸化NF-κB激活其下游的抗凋亡和促增殖因子，与三阴性乳腺癌的发生发展有关。褪黑素对蛛网膜下腔出血后继发性脑损伤及认知功能的影响及其机制研究
摘要：目的：探讨褪黑素对蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage，SH）后神经元细胞凋亡、坏死及继发性认知功能障碍的影响。方法：选择80只成年健康雄性SD大鼠，随机分为四组：正常组（n=20）、单纯SAH组（n=20）、SAH＋安慰剂治疗组（n=20）和SAH＋褪黑素治疗组（n=20），经大鼠自体尾动脉（股动脉）非肝素化动脉血在20S内注入视交叉池建立蛛网膜下腔出血模型，褪黑素注射剂量为150mg/kg，1次／12h，在蛛网膜下腔出血建模后48h处死各组部分大鼠，取血凝块周围的皮层脑组织（额颞底）做标本，通过TUNEL荧光染色及Fluoro—JadeB荧光染色测定神经元凋亡及坏死的情况，各组剩余大鼠在SAH后48小时开始通过Morris水迷宫试验测试其认知功能。结果：SAH组大鼠的活动功能评分、Morris水迷宫试验的逃避潜伏期及总路程、神经元细胞凋亡和坏死的百分比均较正常对照组大鼠显著升高（P〈0．01），而褪黑素治疗组以上指标均显著低于安慰剂治疗组（P〈0．05），但SAH组和安慰剂组之间以上指标比较均无统计学意义（P〉0．05）。结论：褪黑素可能通过减少神经元细胞的凋亡和坏死改善蛛网膜下腔出血后大鼠的认知功能障碍。碳／碳材料含硅羟基磷灰石涂层体外成骨细胞相容性研究
摘要：目的：成骨细胞在碳／碳复合材料表面羟基磷灰石涂层上有良好的长入，该实验在羟基磷灰石（hydroxyapatiteHA）涂层中掺入硅后，研究成骨细胞对该涂层的生物活性，为临床骨科应用提供实验基础。方法：本研究采用化学液相气化沉积／水热法在碳／碳材料表面制备了含硅羟基磷灰石（silicon-hydroxyapatiteSi—HA）涂层。在体外成骨细胞相容性的研究中，以HA涂层为对照，通过甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetrazoliumMTT）法测定细胞增殖反应和对细胞毒性反应，碱性磷酸酶（alkalinephosphataseALP）测定细胞的分化，扫描电镜观察细胞生长形态，免疫荧光显影技术测定细胞的长入。结果：在HA涂层中引入硅后，Si-HA涂层和HA涂层在第2天、第4天的成骨细胞增殖实验表明前者的细胞长入数较后者多，两者的差异有统计学意义，而Si-HA涂层浸泡液中的ALP活性下降较HA涂层而言更明显，两者的差异有统计学意义，电镜扫描及荧光染色均提示在Si-HA涂层中成骨细胞的增值数更多。结论：在HA涂层中引入硅后，改变了涂层自身的晶体结构及表面电荷，同时诱导成骨细胞分泌胶原，使得成骨细胞更好的贴壁生长和增殖，成骨能力增加。在临床骨科植入物表面涂层改性上有很好的应用前景。壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒对于肝组织严重出血模型的止血效果
摘要：目的：建立SD大鼠肝脏严重出血模型，考察壳聚糖-三聚磷酸钠（TPP）纳米粒的止血效果对于实质性器官严重出血的止血效果。方法：24只SD大鼠各分3组，每组8只，分为阴性对照组、壳聚糖-TPP组（NP组）和正常组，其中阴性对照组和NP组的大鼠建立肝脏严重出血模型。NP组，将壳聚糖-TPP纳米粒喷射到伤口，直至将整个伤口覆盖。阴性对照组，不使用任何止血材料处理创面。术后15天，用SEM和TEM观察NP组和阴性对照组的肝组织的微观结构。结果：通过组织学检查发现壳聚糖-TPP纳米粒在治疗严重伤口时能加速肉芽和大量胶原蛋白的生成，这正是伤口愈合初期的标志。结论：壳聚糖-TPP纳米粒对于严重出血的实质器官可发挥优良的止血性能，并能促使伤口愈合。成人骨性Ⅱ类不同垂直骨面型上气道及舌骨形态位置的三维研究
摘要：目的：研究成人骨性Ⅱ类不同垂直骨面型上气道与舌骨形态及位置的差异。方法：随机选择60名成人骨性Ⅱ类患者，男女比例1：1，依据GoGn-SN角分为三组（高角组、均角组及低角组），在自然头位下拍摄CBCT，运用MIMICS软件对上呼吸道及舌骨进行三维建模并测量21项相关指标，分析不同垂直骨面型之间上气道各段之间及舌骨形态、位置的差异。结果：不同垂直骨面型之间鄂咽上界平面矢状径长度（PNSL）存在显著性差异（P〈0．05），上气道各段高度（UTH、ETH）及宽度（PNSW、UTW、ETW）之间比较无统计学差异（P〉0．05）。高角组上气道鄂咽下界及舌咽下界矢状径长度（UTL、ETL）与均角和低角组均存在显著差异（P〈0．01），随着垂直骨面型增大，呈现高角〈均角〈低角的趋势。高角组上气道鄂咽及舌咽体积明显小于均角和低角，差异有统计学意义（P〈0．05）。舌骨形态及位置在不同垂直骨面型之间无差异（P〉0．05）。结论：不同垂直向生长方式对上气道产生影响较大，而对舌骨的生长发育无影响。Nurr-1基因转染促进脂肪干细胞的神经分化
摘要：目的：研究孤儿核受体相关基因1（Nurr-1）对脂肪干细胞（adiposetissue．derivedstemcells，ADSC）向神经元方向分化的潜在作用。方法：流式细胞术与成骨、成脂诱导技术鉴定脂肪干细胞；Nurrr-1基因转染脂肪干细胞后，应用神经特异性标志物MAP-2，β-tubulin的免疫荧光染色评估其向神经方向分化的能力。结果：流式细胞术结果表明培养的细胞CD29，CD44表达90％以上，CD45，CD90表达均低于1．5％，经过诱导后，油红O、茜素红S染色均呈阳性，表明所培养的细胞为脂肪干细胞；慢病毒转染Nurr-1基因后，免疫荧光染色检测MAP-2，β-tubulin的免疫荧光强度显著增加；RT-PCR结果显示Nurr-1转染的脂肪干细胞的MAP-2、β-tubulin、NF200的表达量显著提高。结论：Nurr-1基因转染能促进脂肪干细胞向神经方向分化，为神经损伤和神经退行性病变的治疗提供了新途径。Notch信号途径在Bregs发育及口服耐受中的作用
摘要：目的：调节性B细胞（Bregs）是近年来确认的一类具有负向免疫调节功能的B细胞亚群，在免疫反应中通过IL-10发挥调节功能，又称为B10细胞，其表型为CD19＋ CD5＋CD1dhigh，在多种疾病中发挥重要的调节作用，但关于Bregs的发育及发挥调节功能的具体机制尚不明确。Noah信号途径是调控细胞双向亚群和双向功能分化的重要信号途径，在T／B细胞分化、CD4／CD8细胞等细胞发育中发挥重要的作用，但其在B10细胞发育及其免疫应答中调控作用尚不明确。本研究利用特异性在B细胞剔除Notch信号分子RBP-J基因的小鼠，分析Notch信号对Bregs发育及口服耐受的影响。方法：将CD19-Cre小鼠与RBP-Jflox小鼠交配，获得CD19-Cre／RBP—Jf／f基因型小鼠，流式细胞仪分析该小鼠CD19＋CD5＋CD1dhighBl0细胞及体外刺激后产生IL—10的B10细胞数量；制备口服免疫耐受模型，分析Notch信号缺失对B10细胞发育和功能的影响。结果：B细胞特异性敲除RBP-J基因的小鼠的CD19＋CD56CD1dhighBregs数量及体外刺激后产生IL-10的B10细胞数量比杂合子小鼠显著降低；且在口服免疫耐受模型中血清IgE水平显著升高。结论：Notch信号敲除后，脾脏Bregs及其产生IL-10减少，在口服耐受中不能产生耐受，Notch信号可能促进Bregs发育．并通过IL-10参与调控口服耐受。苏铁珊瑚根共生念珠藻ITS序列多拷贝研究
摘要：目的：研究苏铁珊瑚根共生念珠藻16SrDNA-23SrDNA基因间隔序列（ITS）拷贝数。方法：提取苏铁珊瑚根共生念珠藻全DNA，PCR扩增其16SrDNA．23SrDNA基因间隔序列（ITS）克隆并测序；采用ClusterX1．83对所得序列进行比对，用DNAman软件对比对结果进行人工校正；采用割胶回收电泳检测、菌液PCR及混合模板PCR扩增三种方法验证ITS—L2。结果：ITS—S（420bp）不含任何氨基酸编码序列，ITS-LI（676bp）包含一个异亮氨酸和一个丙氨酸编码序列；ITS—L1和ITS—L2在琼脂糖凝胶电泳检测时长度分别为676bp和1000bp，而谱带经克隆测序后结果表明ITS—L1和ITS—L2碱基序列和长度几乎相同，仅有两个碱基发生变异。结论：ITS-L2为假阳性，可能是由ITS—S和ITS—L1形成的异源双链；苏铁珊瑚根共生念珠藻含有两种类型的ITS拷贝，一种是含有tRNAIle和tRNAAla编码序列的ITS，另一种是不含tRNAIle和tRNAAla编码序列的ITS。STAT3小干扰RNA的构建及对缺氧复氧人肾小管上皮细胞凋亡的影响
摘要：目的：构建信号转导与转录因子3（STAT3）小干扰RNA（siRNA）表达载体，并观察其对缺氧复氧后人肾小管上皮细胞（HKC）凋亡的影响。方法：设计3对人STAT3siRNA靶序列，用DNA重组技术克隆至质粒pRNAT-U6.1／neo中，构建重组质粒pRNAT-U6．1-STAT3siRNA，检测并筛选出最佳抑制效率的siRNA质粒栽体。重组质粒转染至缺氧复氧后HKC细胞，Westernblotting和RealTime-PCR测定STAT3蛋白和mRNA表达量，流式细胞仪测定细胞凋亡，间接荧光法测定Bcl-2和Bax表达的变化。结果：靶向STAT3基因表达的质粒栽体构建成功，并筛选出抑制效率最佳的重组质粒。缺氧复氧后HKC细胞STAT3表达、凋亡率和Bax／Bcl-2比值增加；缺氧复氧后HKC细胞转染重组质粒后STAT3表达、凋亡率和Bax／Bcl-2比值明显降低。结论：成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3的重组质粒载体。该载体可有效抑制缺氧复氧后HKC细胞中STAT3信号转导通路的活化，并进一步通过上调Bcl-2、下调Bax蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡。右心导管法测大鼠肺动脉压力的改良
摘要：目的：目前常用的测量大鼠肺动脉压力的右心导管法存在一定的缺陷，且很难得到典型的压力曲线图。本实验对大鼠经颈外静脉插管与测压的方法进行改良，同时与已有报道的实验结果进行比较，并提供正常SD大鼠右心房、右心室及肺动脉的压力参考值及典型的压力曲线图，以协助研究人员判断导管位置，及时调整导管的深度和方向，快速测出肺动脉压力。方法：雌雄不分的清洁级SD大鼠共30只，体重180-230g，6～7周龄。应用自制的末端呈一弧形的PE-10管，采用改良后的右心导管法，经颈外静脉插入大鼠心腔及肺动脉，检测并计算大鼠右心房、右心室和肺动脉的收缩压、舒张压及肺动脉平均压。结果：右心房压力波动较平缓，呈小波浪形；右心室压力曲线波动大，骤升骤降；肺动脉压力曲线有重搏波。正常SD大鼠右心房舒张压为（2．03±2．56）mmHg，收缩压为（2．82±1．85）mmHg；右心室舒张压为（5．72±3．99）mmHg，收缩压为（18．73±4．80）mmHg；肺动脉舒张压为（15．27±2．64）mmHg，收缩压为（18．49±2．53）mmHg，肺动脉平均压为（16．34±2．32）mmHg。右心室收缩压与肺动脉收缩压无明显差异（P〉0．05）。结论：改良后的方法可准确到达大鼠肺动脉，提供的压力参考值及曲线图有助于研究人员顺利完成测压实验。白藜芦醇对急性痛风性关节炎大鼠的影响
摘要：目的：观察白藜芦醇对急性痛风性关节炎大鼠的影响。方法：选取Wista大鼠36只，随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇中剂量组、白藜芦醇高剂量组，各组相应采用生理盐水、秋水仙碱、白藜芦醇低、中、高剂量灌胃7天（1次／日），模型组及各实验组于灌胃第四天把25g／mL（0．05mL）浓度的尿酸盐溶液注射到大鼠踝关节腔内，制备急性痛风性关节炎模型，正常对照组大鼠关节腔内注射生理盐水0．05ml，72h后留取踝关节关节液及关节滑膜，应用ELISA法观察关节液中IL-1β、CXCL10的变化。关节滑膜用10％福尔马林固定待做病理。结果：与模型组比较，白藜芦醇能显著降低关节液中IL-1β、CXCL10水平（P〈0．05），病理结果显示，白藜芦醇可减轻急性痛风性关节炎大鼠踝关节组织的水肿和炎性细胞浸润。结论：急性痛风性关节炎发病过程中IL-1β，CXCL10明显增高，白藜芦醇可有效抑制急性痛风性关节炎发作，且该作用呈一定的剂量依赖性。MDA-DHPLC技术在PGS中的应用
摘要：目的：评估丙二醛变性高效液相色谱法在胚胎移植过程中的临床价值。方法：收集我院生殖中心2010年2月-2012年3间未做移植的废弃胚胎，由D2胚胎培养到D3胚胎期，提取遗传物质并进行PRC扩增，采用高形态学评分的D3作为对照，高效液相色谱法测定遗传DNA过氧化产物丙二醛（MDA）的含量。结果：多核Ⅰ组D2期卵裂球核≥2个，共24枚胚胎，DNA过氧化产物丙二醛（MDA）的含量5．32±0．19μmol／L，对比正常胚胎0．67±0．08μmol／1有显著差异（P〈0．05）。多核Ⅱ组D2期卵裂球核=2，共19枚胚胎，MDA的含量4．12±0．22μmol／L，对比正常胚胎0．67±0．08μmol／1有显著差异（P〈0．05）。Ⅰ组与Ⅱ组间没有统计学差异。然而，空泡胚胎与非空泡胚胎之间MDA并没有差异。结论：多核D2期胚胎培养到D3期会产生很高异常率，因此临床上应减少使用此种进行移植。胃癌患者血清IL-17、IL-6和TGF-β1水平及其临床意义
摘要：目的：探讨胃癌患者外周血中白介素17（IL-17）、白介素6（IL-6）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达水平及其临床意义。方法：选择2009年1月-2010年1月我院收治的50例胃癌患者（观察组）及同期50例健康对照者（对照组）为研究对象，采用ELISA法检测和比较其外周血中IL-17、1L-6和TGF-β1的水平，并分析胃癌患者外周血中IL-17、IL-6和TGF-β1水平与其临床病理特征之间的相关性。结果：观察组患者外周血中IL-17、IL-6和TGF-β1的水平分别为（8．51±2．68）pg／ml、（7．81±5．41）pg／ml和（1093．42±831．21）pg／ml，均明显高于健康对照组（P〈0．01）。胃癌患者的血清IL-17、TGF-β1的水平与其年龄、性别、临床分期、有无淋巴结转移、分化程度、肿瘤部位及大小均无明显相关性（P〉0．05）；而血清IL-6的水平与肿瘤的大小相关（P〈0．05），但与其他临床病理特征无关（P〉0．05）；血清IL-17水平与IL-6、TGF-β1的水平均无明显相关性（P〉0．05）。结论：血清IL-17、IL-6和TGF-β1水平的升高与胃癌的发生有关，但IL-6和TGF-β1可能不是血清中IL-17生成的诱导因子。老年原发性高血压患者血压晨峰与早期肾损害的临床观察
摘要：目的：探讨老年原发性高血压患者血压晨峰与早期肾损害的关系。方法：选择我院收治的94例老年原发性高血压患者进行24小时动态血压监测，并根据监测结果，将患者分为晨峰组62例和非晨峰组32例，检测和比较两组的血肌酐和尿素氮、12小时尿微量蛋白、尿β2微球蛋白、空腹血糖、血脂等指标。结果：老年高血压患者晨峰组12小时尿微量蛋白、尿β2微球蛋白均显著高于非晨峰组（P〈0．05）；晨峰血压与12小时尿微量白蛋白（r=0．374）、尿β2微球蛋白（r=0．456）呈显著正相关。结论：老年原发性高血压患者血压晨峰与早期肾损害有关，治疗高血压的同时重视控制晨峰血压有重要意义。靶剂量美托洛尔对老年糖尿病并慢性心衰的疗效及安全性分析
摘要：目的：探讨靶剂量美托洛尔治疗合并糖尿病的慢性心衰患者的临床疗效及安全性。方法：选取154例老年糖尿病并慢性心衰患者，随机分为观察组与对照组，每组77例，观察组患者予靶剂量美托洛尔及常规治疗方案，对照组仅按常规治疗方案进行治疗，比较两组患者治疗前后NYHA分级、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室射血分数（LVEF）、6min步行距离及用药安全性。结果：与治疗前相比，观察组与对照组两组患者NYHA分级、LVESD、LVEDD、LVEF、6min步行距离均有明显改善（P〈0．05）；与对照组患者治疗后相比，观察组患者治疗后以上指标改善更加显著（P〈0．05）。在随访的6个月内，观察组心脏事件发生率为3．90％，明显低于对照组的14．29％（P〈0．05）。两组患者平均空腹血糖、糖化血红蛋白不存在显著性差异（P〉0．05），观察组血脂、血糖、肝功能、肾功能等指标均未发生显著变化。结论：靶剂量美托洛尔治疗合并糖尿病的慢性心衰患者时，可显著改善患者的心功能及活动耐量，临床疗效好，安全性高，耐受性良好。急性脑梗死患者并发医院肺部感染的影响因素分析
摘要：目的：探讨急性脑梗死患者并发医院肺部感染的相关影响因素，为临床的预防与治疗提供指导依据。方法：回顾性分析我院神经科2011年1月-2013年8月收治入院的526例急性脑梗死患者的临床资料。结果：在全部526例急性脑梗死患者中，并发医院肺部感染的有79人，占15．0％。分析显示，高龄、吸烟史、糖尿病、意识障碍、吞咽困难、低蛋白血症等原因是并发肺部感染的危险因素。而从这些感染者的痰液中共分离出病原菌98株，包括铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、白假丝酵母菌等。结论：急性脑梗死患者易并发医院肺部感染，其危险因素主要有高龄、吸烟史、糖尿病、意识障碍、吞咽困难、低蛋白血症等。
