A549肺癌细胞株中癌睾丸抗原的表达及生物学意义研究
摘要：目的：癌睾丸抗原（Gancer．testisantigen，CTA）是一类主要表达于睾丸组织和癌组织，并具有较强诱导体液和细胞免疫应答能力的抗原，可以作为抗肿瘤的理想靶分子。本研究探讨了A549肺癌细胞系中CTA的表达情况及其生物学意义。方法：本研究中选取了A549肺癌细胞株，运用RT-PCR的方法检测了其中九种常见CTA的表达情况，进一步通过AV—PI双染法观察了表柔比星，紫杉醇，卡铂，伊立替康，依托泊苷五种化疗药物对A549细胞的凋亡作用及其调控CTA表达的情况。另外用转化生长因子β1（TGF-β1）处理A549细胞，验证了TGF-β1促进细胞生长的作用，进一步检测此时CTA的表达调控。结果：结果显示MAGEAl。MAGEA3，MAGECl，HCA661在A549细胞系中稳定表达，表柔比星能够强烈诱导细胞发生凋亡，其诱导作用岁浓度增高而增强。表柔比星下调了MAGEAl，MAGEA3，MAGECl的表达，对HCA661的表达无影响。TGF-β1增强了肿瘤细胞增殖能力，与此同时下调HCA661的表达，对MAGEAI，MAGEA3，MAGECI的表达无影响。结论：MAGEAl，MAGEA3，MAGECl，HCA661在肺癌细胞系A549中稳定表达。TGF-β1作用48小时，使HCA661的表达下调，MAGEAl，MAGEA3，MAGECl的表达无变化。表柔比星作用48小时，使MAGEAl，MAGEA3，MAGECl的表达下调，HCA661表达无影响，卡铂，紫杉醇，伊立替康，依托泊苷对CTA的表达无调控，为进一步明确CTA的表达调控机制奠定了研究基础，同时为将HCA661作为临床中诊断与治疗的新靶点提供了可行性。鞭毛蛋白FliC突变体／HPV18L2N融合蛋白的表达与纯化
摘要：目的：人乳头瘤病毒（HPV）的持续性感染导致女性宫颈癌的发生。HPV的次要衣壳蛋白L2可以诱发交叉中和多种型别HPV的中和抗体，但是单独免疫L2诱发的抗体滴度较低。鼠伤寒沙门氏茵鞭毛蛋白FliC是一种有效的佐剂。删除FliC超变区域的突变体可与外源抗原融合表达并且显著增强外源抗原特异性抗体的产生。本研究旨在构建鞭毛蛋白FliC超变区删除突变体与HPV18L2N（aa．13—154）的融合基因，通过大肠杆菌原核表达系统表达F1ic突变体与HPV18L2N的融合蛋白并纯化，为研究鞭毛蛋白的佐剂活性及新型HPV18L2疫苗奠定基础。方法：以鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白编码基因fliC为模板，通过重叠PCR法构建删除fliCD3区域（fliCAD3）、D3＋CD2a区域（fliCAD3CD2a）、D3＋D2区域（fliCAD2D3）的突变体，同时将HPV18L2N基因插入置换突变体的超变区删除区域。含有重组基因的表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经SDS—PAGE及Westernblot鉴定分析。表达的融合蛋白经Ni—Sepharose亲和层祈纯化及Q-Sepharose离子交换层析去除内毒素。纯化后的融合蛋白经Native—PAGE鉴定分析，通过鲎试剂凝胶法测量蛋白溶液中的内毒素含量。结果：构建了pET22b．fliCAD3／18L2N、pET22b—nic△D3cD2a／18L2N、pET22b—fliCAD2D3／18L2N重组载体。重组载体在大肠杆菌以包涵体形式高效表达，且主要以单体形式存在。结论：通过原核表达及层析法纯化，成功获得了无热源、高纯度的鞭毛蛋白FliC突变体与HPV18L2N的融合蛋白，为增强HPVL2免疫原性提供了一种新的途径，为进一步研制HPV18L2疫苗奠定了基础。煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较
摘要：目的：在生物浸出中，微生物群落结构分析有着重要意义，而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解决这一问题，本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法，煮沸裂解法和试剂盒法，寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法。方法：分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA，从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果；用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌，通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性。结果：相同处理量（108个）的革兰氏阳性菌（1株）、革兰氏阴性菌（4株）、古菌（1株）经两种方法提取的基因组DNA差异较大，煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯，其OD260／OD280的值更接近1．8-2．0（纯DNA的OD260／OD280在1．8—2．0之间），前者所提DNA回收率最大可达后者的16．7倍；煮沸裂解法只需较少菌（102个）便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度，比试剂盒法灵敏。结论：两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增，此外，前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大，而后者随茵浓度增大，所提DNA量增加有限，因此，在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法，为实验节约成本和时间。周期性静水压对人软骨细胞活性的时间依赖性影响
摘要：目的：目前软骨细胞体外研究多为动物模型，本研究以正常成人软骨细胞研究对象，探讨在适当强度、类型的周期性静水压下不同持续时间对软骨细胞活性的影响，探究人软骨细胞体外培养、构建组织工程软骨合适的时间参数。方法：将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为4组：4h组、8h组、12h组、对照组。应用高压恒温静水压加压系统，充入含有95％的空气和5％的CO2混合气体，以2MPa压力大小对3个实验组进行周期性加压，分别每天加压4h、8h、12h，三组加压时间均为10d。10d后倒置相差显微镜下观察4组细胞形态，甲苯胺蓝及II型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定，并对II型胶原免疫细胞化学染色行半定量分析。MTT法分析各组软骨细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：3个实验组细胞增殖均快于对照组（P〈0．05），与对照组相比4h组、8h组均抑制凋亡，12h组促进凋亡。12h组第6代细胞开始细胞形态即逐渐发生改变。结论：软骨细胞的增殖和凋亡水平对静水压的作用时间具有依赖性。在2MPa静水压力下，8h组更适合细胞生长，细胞活性更强。为进一步构建组织工程软骨人类模型及组织工程软骨的临床应用提供了一定的实验基础。鼠伤寒沙门菌pStSR100质粒对生物膜形成的影响
摘要：目的：鼠伤寒沙门菌在多种表面形成的生物膜对其致病性和引起食物中毒等方面起着重要作用，本研究探讨鼠伤寒沙门菌pStSR100质粒对细菌在不同材质表面生物膜形成的影响。方法：用LB（Lufia—Bertani，LB）培养基和TSB（TryptoseSoyaBroth，TSB）培养基分别将携带pStSR100质粒的野生株在96孔板与放置无菌小圆玻片的24孔板中静态培养48h，用结晶紫半定量法确定生物膜形成的适宜培养基。将野生株与消除质粒的突变株，用结晶紫半定量法和激光共聚焦显微镜（ConfocalLaserscanningmicroscopy，CLSM）观察其在聚苯乙烯培养板和小圆玻片表面形成生物膜的差异。结果：用LB培养时细菌生物膜的形成能力高于用TSB培养，LB培养基更适宜生物膜形成；结晶紫半定量法结果表明野生株比突变株在小圆玻片表面形成生物膜的能力明显增强，而在聚苯乙烯培养板表面两者则无明显差异；CLSM观察发现，野生株在小圆玻片表面形成融合成片的大克隆，突变株仅形成较小克隆。结论：鼠伤寒沙门菌pStSR100质粒能促进该茵在亲水性材质表面生物膜的形成，但其对该菌在疏水性材质表面生物膜的形成未见明显影响，这一新发现为进一步研究鼠伤寒沙门菌生物膜形成的调控机制，研制抗感染材料提供了理论和实验依据。姜黄素抑制小鼠脉络膜新生血管的实验研究
摘要：目的：观察姜黄素对激光诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidalneovascularization，CNV）形成的影响。方法：60只雄性C57BL／6小鼠，随机分为对照组、10mg／kg姜黄素治疗组、30mg／kg姜黄素治疗组，每组20只。采用激光诱导产生小鼠CNV模型。由光凝前3天开始，至光凝后14天，两个治疗组每天分别给予腹腔注射相应剂量的姜黄素，对照组腹腔注射二甲亚砜溶液（溶剂）。光凝后第3天通过免疫组化和ELISA检测血管内皮生长因子（vesselendothelialgrowthfactor，VEGF）的表达；第14天通过组织学检查以及荧光素标记的葡聚糖的血管灌注检测CNV的面积，荧光血管造影评价CNV的渗漏程度。结果：光凝后第14天，组织学检查显示姜黄素能够有效缩小激光诱导的CNV；荧光素标记的葡聚糖血管灌注后测量色素上皮-脉络膜铺片上CNV的面积，和对照相比，姜黄素能显著减小激光诱导的CNV的面积（P〈0．05）；荧光血管造影显示姜黄素能有效抑制CNV的渗漏（P〈O．05）。和10mg／kg姜黄素治疗组相比，30mg／kg姜黄素治疗组小鼠CNV面积缩小和渗漏程度减弱（P〈0．05）。光凝后第3天，VEGF免疫组化和ELISA结果显示姜黄素显著抑制色素上皮一脉络膜复合体中VEGF（P〈0．01）的表达，高刺量组有更强的抑制作用（P〈0．01）。结论：姜黄素可以有效地抑制小鼠CNV的形成，下调VEGF的表达可能是姜黄素抑制CNV的作用机制之一。因此我们推测姜黄素对并发CNV的AMD患者可能具有治疗作用。新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型的制作研究
摘要：目的：通过对动物模型的制作模拟新生儿围产期缺氧缺血性脑损伤，研究其脑组织病理变化，为新生儿缺氧缺血性脑损伤的病理生理的研究以及进一步有效的治疗提供实验基础。方法：将40只7d新生昆明小鼠分四组，分别为正常组（A组）、单侧颈总动脉结扎组（B组）、单侧颈总动脉结扎＋缺氧组（C组）和双侧颈总动脉结扎组（D组）。单侧颈总动脉结扎组（B组）行右侧颈总动脉结扎；单侧颈总动脉结扎＋缺氧组（C组）行右侧颈总动脉结扎后将其置于20℃的恒温50mL密闭容器中，分不同的时间将其取出；双侧颈总动脉结扎组（D组）行双侧颈总动脉结扎，各组术后均送回母鼠身边继续母乳喂养，三天后再作病理检测。结果：行单侧颈总动脉结扎加缺氧60min时，小鼠结扎侧皮质及海马区出现病理改变，随着缺氧时间延长（90rain、100min、120min）病变范围逐渐扩大，病理改变越明显。结论：本实验显示单侧颈总动脉结扎同时缺氧一定时间可以导致小鼠脑组织损伤，脑细胞发生病理改变，且皮层及海马区域的神经细胞对缺氧缺血最为敏感，从而为进一步研究新生儿缺氧缺血性脑损伤提供了较为可靠的模型。音频刺激与光耦合激发蝗虫趋光响应的效应
摘要：目的：研究光声耦合和对照光激发蝗虫趋光响应试验，为蝗虫的光电诱导捕集治理及趋光增益调控激发技术提供理论基础。方法：依据蝗虫趋光机理和声频刺激激发蝗虫的响应特性，利用LED光源、声频播放设备和蝗虫行为试验装置，进行了蝗虫对光声耦合和光谱光照趋光响应的对比测定，并探讨了光声耦合对蝗虫趋光效果影响的机理。结果：（1）蝗虫光声感受器对光能和声能接受和神经处理方式的不同，光谱光照和声频耦合刺激激发蝗虫生物活性和趋光v向应的双重叠加效应，增强了蝗虫的趋光活性，强化了蝗虫的趋光行为，提高了蝗虫的趋光响应，达到了推拉驱动蝗虫趋光响应的效应；（2）在光声耦合激发蝗虫趋光响应峰值上，蝗虫对不同声刺激的敏感性参数不同；（3）蝗虫对声刺激敏感参数接受的容限性，导致光谱光照在蝗虫诱导响应行为中起主导作用，而声刺激则起驱动激发蝗虫趋光响应的增益效应。结论：光谱光照和声刺激的合理布置和组合，能够有效提高蝗虫的趋光诱导响应效果。抗人β-HCG单克隆抗体的制备及化学发光检测方法的建立
摘要：目的：制备人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）单克隆抗体，建立人β-HCG双抗体夹心CLIA检测方法。方法：用人β-HCG抗原免疫小鼠，通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株，然后将细胞株扩大培养并纯化上清液获得抗体，测定抗体亲和力、特异性及表位，最后建立双抗体夹心CLIA方法。结果：获得4株抗人β-HCG的杂交瘤细胞株（β-1—1、β-2—1、β-3—1、β-4—1）。用β-1—1和β-2—1建立的双抗体夹心法的检测范围为0．5mlU／mL．800mlU／mL，灵敏度0．23mIU／mL，检测结果的相对偏差均在±10％内，回收率在90％以上。结论：本研究最终成功制备了抗人β-HCGmAb，建立了定量检测人β-HCG的双抗体夹心CLIA方法，为β-HCG检测及疾病的诊断奠定基础。肺炎支原体感染小鼠体内IL-6、IFN-γ、IL-5的水平及克拉霉素的影响
摘要：目的：研究肺炎支原体感染小鼠血清及支气管肺泡灌洗液中细胞因子的水平，了解克拉霉素治疗对细胞因子的影响。方法：将昆明小鼠分为感染组、正常组及药物治疗组，建立小鼠肺炎支原体感染模型成功后，药物组用克拉霉素（6g·kg^-1·d^-1）进行治疗，连续5天。在肺炎支原体感染模型建立后的第8天，检测三组小鼠的血清及支气管肺泡灌洗液中IL-6、IFN-γ、IL-5水平。结果-相比较于正常组，感染组小鼠支气管灌洗液和血清中的IL-6、IFN-γ、IL-5均显著升高（P〈0．05）。而克拉霉素的使用能使IL-6、IFN-γ降低（P〈0．05），但对IL-5水平无影响。结论：肺炎支原体感染使小鼠IL-6、IFN-γ、IL-5水平增高，克拉霉素治疗有一定疗效。1950MHz射频电磁场对SRA01／04细胞周期和凋亡的影响
摘要：目的：研究显示射频电磁场与白内障的发生关系密切，为了评价晶状体上皮细胞在射频电磁场诱导的白内障发生中的作用，本实验探讨了1950MHz射频电磁场暴露对人眼晶状体上皮细胞株（SRA01／04）细胞周期与凋亡的影响。方法：将处于对数生长期的SRA01／04细胞暴露或假暴露于频率为1950MHz，比吸收率（SAR）为2．79W／kg的射频电磁场中，每天暴露1h，每周暴露5天，连续暴露4周。暴露结束后立即收集细胞，显微镜下观察细胞形态变化，噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活力，流式细胞仪（FCM）检测细胞周期与凋亡。结果：与假辐照组相比，暴露组细胞形态未见明显变化；细胞存活力、细胞周期分布及细胞凋亡率亦无显著改变（P〉0．05）。结论：1950MHz射频电磁场暴露4周对SRA01／04细胞的形态、活力、周期以及凋亡均无明显影响，提示在本实验条件下1950MHz射频电磁场不会诱发白内障的发生。中性粒细胞／淋巴细胞比值与药物支架内再狭窄关系
摘要：目的：探讨经皮冠状动脉支架植入术前中性粒细胞／淋巴细胞比值（Neutrophil-to-LymphocyteRatio，NLR）与患者药物支架（DrugElutingStent，DES）植入后发生支架内再狭窄（In—StentRestenosis，ISR）的关系。方法：回顾性分析2012年01月至2012年10月间有DES植入史并再次入院接受冠脉造影的92例患者（平均年龄65．22±9．73岁）的血液学检查、既往冠脉造影结果及再次冠脉造影结果。根据DES植入前的NLR的四分位点将所有入选患者分为3组：最低三分位组（n=31，0．91-1．83），中间三分位（n=30，1．87—2．63），最高三分位（n=31，2．66—4．67），比较3组间ISR发生率有无差异。结果：再狭窄发生在最低NLR三分位的有3例（9．68％），发生在中间NLR三分位组的有2例（6．67％），而有4例（12．90％）发生在NLR最高三分位组（P=0．714），3组之间的差异无统计学意义。结论：因稳定或不稳定型心绞痛而植入药物支架的患者，其术前NLR同支架术后ISR的发生无明显相关性。NLR不能作为DES植入后发生再狭窄的预测指标。大黄联合抗生素治疗脑出血合并肺部感染的临床疗效观察
摘要：目的：观察大黄联合抗生素治疗脑出血后肺部感染的临床疗效。方法：96例急性高血压脑出血血肿清除术后并发肺部感染患者随机分为治疗组（56例）和对照组（40例）。对照组应用抗生素治疗，治疗组在抗生素治疗的基础上加用大黄6g，以温开水100mL调匀后经胃管鼻饲，每日2次，共治疗7天。治疗结束后比较和评价两组的治疗效果效果。结果：治疗组患者肺哆音消失的时间、炎症消散的时间和平均治愈天数分别为3．52±1．81、10．32±3．25、10．73±3．26天，较对照组（分别为10．86±3．43、13．51±2．66、14．73±3．11）均显著缩短，差异有显著统计学意义（P〈0．01）。治疗组和对照组治疗总有效率分别为94．64％和85％，差异有统计学意义（P〈0．05）。两组不良反应的发生率比较无统计学差异（P〉0．05）。结论：大黄联合抗生素治疗脑出血术后合并肺部感染，可缩短治疗时间，提高疗效，且无严重不良反应。梗阻性低位直肠癌保肛手术可行性探讨
摘要：目的：探讨梗阻性低位直肠癌保肛治疗（直肠癌前切除术（dixon手术））的可行性及术后肠瘘的防治。方法：回顾性分析我科2009年1月．2012年1月梗阻性低位直肠癌的保肛治疗（dixon）24例手术患者（梗阻性保肛组）临床资料及非梗阻性低位直肠癌保肛治疗（dixon）的24例患者（非梗阻性保肛组）临床资料，比较梗阻性与非梗阻性低位肠梗阻保肛治疗的临床疗效，分析梗阻性低位肠梗阻保肛治疗的可行性。结果：梗阻性保肛组住院天数：11．9天，非梗阻性肠梗阻保肛组8．7天P〈0．05；梗阻性保肛纽发生肠瘘：4例（16．7％），非梗阻性肠梗阻保肛组发生肠瘘：1例（4.2％）P〈0．05，经充分引流后肠痿愈合，无1人死亡，两组术后至出院期间死亡人数：0例；梗阻性保肛组肠功能恢复（以排气排便为指标）：5．1天，非梗阻性保肛组肠功能恢复：3．8天，P〈0．05；术后6个月腹泻便秘患者两组相同为24人；术后6个月梗阻性保肛组肿瘤复发6人（25％），非梗阻性保肛组肿瘤复发5人（20．8％），P〉0．05。结论：梗阻性低位肠梗阻保肛治疗住院期疗效较非梗阻性保肛组差，中远期疗效无明显差异。梗阻性低位直肠癌可行保肛治疗。替吉奥治疗结肠癌的研究
摘要：目的：探讨替吉奥治疗结肠癌的疗效。方法：75例经病理组织学确诊的结肠癌患者，分为A、B、C组。A组：替吉奥联合奥沙利铂（艾恒）25例。B组：5-Fu／LV联合奥沙利铂（艾恒）25例。C组：替吉奥单药治疗25例。观察疗效、疾病控制率及不良反应。结果：A组、C组与B组对比，不良反应发生率明显降低。A组有效率48％，疾病控制率88％。B组有效率28％，疾病控制率84％。C组有效率32％，疾病控制率80％。结论：替吉奥是结肠癌辅助化疗联合用药及单药治疗老年结直肠癌较好的治疗药物。侧脑室旁白质病变患者认知功能损害的特点研究
摘要：目的：脑白质病变与老年认知功能障碍关系密切，尤其是深部白质病变更是血管性认知功能损害的常见危险因素，但临床上对于侧脑室旁白质病变与认知功能损害的关系研究较少，本研究旨在探讨侧脑室旁白质病变患者认知功能损害的特点。方法：选取2011年2月．2012年10月住院健康查体者159例，根据有无侧脑室旁白质病变分为脑白质病变组及对照组，根据侧脑室白质病变严重程度分为轻度组及中重度组。所有患者分别进行蒙特利尔认知评估表（MontrealCognitiveAssessment，MoCA）中文版、简易精神状态检查表（MiniMentalStateExamination，MMSE）和画钟测验（clockdrawingtest,CDT）评估。结果：脑白质病变组MMSE量表总分、CDT、MoCA量表总分及视空间、计算力、延迟回忆及空间执行功能分低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；白质病变中重度组MMSE、MoCA量表总分及计算力得分低于轻度组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：本研究显示侧脑室旁白质病变患者总体认知功能评分明显低于对照组，中重度患者的计算力下降尤为突出，提示我们侧脑室旁白质病变是导致患者总体认知功能下降及计算力损害的危险因素，临床上应该提高对于侧脑室旁白质病变的重视。冠状动脉支架植入术后行冠脉旁路移植术
摘要：目的：总结15例冠状动脉支架植入术后行冠状动脉旁路移植术的临床经验。方法：回顾分析行冠状动脉支架植入术后行冠状动脉旁路移植术15例患者的资料，男10例，女5例，平均年龄（61±5）岁。行冠状动脉支架植入术后再行冠状动脉旁路移植术时间间隔（24±4）月，冠状动脉内置入支架3-6枚，左室射血分数为43％-64％，其中〈50％为3例。全组行体外循环下冠状动脉旁路移植术3例，行非体外循环心脏跳动下冠状动脉旁路移植术12例。结果：全组共行动脉桥吻合13支，静脉桥33支；围术期并发低心排综合征3例，肺部感染4例，胸腔内出血行胸腔闭式引流术2例，本组患者无死亡病例。术后平均住院日（13±4）天。结论：对冠状动脉内支架植入术后再狭窄或（和）冠状动脉再血管化不足的病例进行冠状动脉旁路移植治疗，可使冠状动脉达到充分再血管化，提高冠心病患者生活质量及预后。奥美拉唑联合法莫替丁治疗反流性食管炎的临床效果分析
摘要：目的：观察并分析奥关拉唑联合法莫替丁治疗反流性食管炎的临床效果。方法：选取2008年5月至2012年5月在本院确诊并治疗的反流性食管炎患者45例，随机平均分为三组。联合用药组（15例）：每日早餐前口服20mg奥关拉唑，睡前口服20mg法莫替丁；奥关拉唑组（15例）：每日口服两次奥美拉唑，每次20mg；法莫替丁组（15例）：每日口服两次法莫替丁，每次20mg。每组的治疗时间均为8周。在内镜指导下观察并比较三组患者的胸痛、反酸和烧心等主要病征的改善情况，综合评价三种治疗方法的临床疗效。结果：联合用药组较其他两组获得的疗效更明显，患者的症状得到较好的改善，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：奥美拉唑联合法莫替丁能够有效地抑制胃酸的分泌，对于反流性食管炎的，临床治疗具有良好的效果。
