超广谱β-内酰胺酶SHV-18的表达纯化及活性验证
摘要:目的:产超广谱β-内酰胺酶是肠杆菌科细菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制,该类酶主要水解青霉素类、头孢菌素类以及单环酰胺类抗生素。自从1983年第-次有关p内酰胺酶的报道开始,至今已经发现超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的种类超过400种,其中SHV型是最常见的ESBLs类型之一。本研究主要探讨了超广谱β-内酰胺酶SHV-18的原核表达载体的构建、酶的纯化和活性验证。方法:利用肺炎克雷伯菌ATCC700603全基因组为模板,应用分子生物学技术钓取SHV-18基因,构建pET22b(+)-SHV-18表达质粒,经测序鉴定后,转化大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达并亲和纯化,进-步通过抗生素水解实验,检测其水解活性,测定其酶动力学参数。结果:成功构建了可以以裂解上清形式高效表达SHV-18的工程菌。通过亲和纯化最终获得纯度达到90%以上的β-内酰胺酶SI-IV-18。获得的SHV-18蛋白能够水解青霉素G、头孢拉定、头孢唑肟、头孢他啶、头孢吡肟等多个抗生素。结论:获得了对青霉素和头孢菌素类具有水解活性的超广谱β-内酰胺酶SHV-18,并对其酶动力学参数进行了检测。在实验室研究了β-内酰胺酶SHV-18对不同抗生素的水解特性,更加有利与指导临床抗生素的合理使用。基于互信息和自相关函数的睡眠期间心率变异性研究
摘要:目的:研究互信息和自相关函数在睡眠各阶段心率变异性(heart rate variability,HRV)分析中的应用。方法:采用网络公开数据库SleepHeart Rateand Stroke VolumeDataBarhk,将RR序列分为30S一段,并以每30S数据为中心截取5minRR序列作为待分析对象。提取5minRR序列的互信息特征BDM、PDM和自相关函数特征BDC、PDC,然后用统计方法分析各特征在觉醒瓜EM/浅睡/深睡四种睡眠状态下的差异。结果:浅睡和深睡期间,BDM、PDM显著高于觉醒和REM睡眠(P〈0.001)。而BDC显著低于觉醒和REM睡眠(P〈0.001),PDC无显著差异(P〉0.05)。结论:①BDM、PDM和BDC从不同角度反映了不同睡眠阶段下RR序列的特征,它们或许与HRV不同的调节机制有关。@BDM、PDM和BDC可作为辅助HRV睡眠分期的新指标。软骨基质来源定向结构支架复合软骨细胞体外构建组织工程软骨的研究
摘要:目的:探讨采用软骨细胞外基质材料制备的定向结构软骨支架复合软骨细胞,在体外静态培养条件下生成组织工程软骨的可能性。方法:制备牛关节软骨细胞外基质材料,利用温度梯度热诱导相分离技术构建具备垂直定向孔道结构的软骨支架,同时采用传统冷冻干燥方法制备非定向支架,检测两组支架的力学性能;提取兔关节软骨细胞,分别接种两组支架,体外静态培养2周及4周后取材,对构建的组织工程软骨进行组织切片染色、生物化学分析及生物力学检测。结果:定向软骨支架的压缩弹性模量数值明显高于非定向软骨支架,体外培养时定向支架上种子细胞在3-9d内增殖高于非定向支架,差异有统计学意义(P〈0.05);体外静态培养4周后形成的两组新生组织工程软骨进行软骨特异性染色均呈阳性,在定向组新生软骨切片中在垂直方向上可见大量呈规则平行排列的粗大胶原纤维,两组新生软骨的生物化学检测包括总DNA、总GAG及总胶原含量差异无统计学意义(P〉0.05)。定向组织工程软骨压缩弹性模量在2周及4周时均高于非定向组织工程软骨,差异有统计学意义(P〈0.05)。但两组组织工程软骨上述指标均显著低于正常关节软骨(P〈0.05)。结论:软骨细胞外基质材料制备的定向结构软骨支架复合软骨细胞,在体外静态培养条件下能够成功生成具有定向纤维结构的组织工程软骨,并可以有效促进新生软骨组织力学性能的提升,在软骨组织工程中具有良好的应用前景。大鼠动情周期雌激素水平变化对晕动病易感性的影响
摘要:目的:众多的流行病学研究和动物实验表明,晕动病存在明显的性别差异,特别是雌激素对晕动病易感性可能存在某些易化的调节作用,本研究为探讨“异食癖”模型上大鼠动情周期雌激素水平的变化对晕动病易感性的影响。方法:大鼠在不同的动情周期,给予足够的旋转刺激以后,通过摄取高岭土量的变化评价大鼠的晕动病反应,同时测定血浆雌激素(E2和P)水平,观察雌激素水平的变化对晕动病易感性的影响。结果:大鼠体内的雌性激素(E2和P)水平随着动情周期而发生波动,在动情期时,E2水平达到最高,而在动情前期则达到最低。P水平在动情间期和动情前期较高而在动情期与动情后期较低。足够的旋转刺激之后,大鼠的摄取高岭土量显著增加,并且呈现与大鼠动情周期雌激素水平波动的一致性,即动情期时摄取高岭土量最多。结论:大鼠动情周期雌激素水平的升高可能在一定程度上会加重大鼠的晕动病反应。可为进一步探讨雌激素水平与晕动病易感性之间的关系提供参考,从而也可能为发现晕动病新病因的研究打下基础,还可能为晕动病预防策略和措施启发新的应用价值。兔右室流出道室速对L型钙通道α1c蛋白表达的影响
摘要:目的:通过建立右室流出道室速(RVOT-VT)的动物模型,以L型钙通道α1c蛋白作为观察指标,观察RVOT-VT时对L型钙通道α1c蛋白表达的影响,旨在探讨L型钙通道在RVOT-VT中的作用。方法:健康新西兰大耳白兔30只,随机分三组,分别为对照组(10只)、室速组(10只)、室速加维拉帕米干预组(10只)。采用免疫组织化学的方法对三组实验动物的右室流出道心肌组织进行L型钙通道cdc蛋白表达的检测。结果:1、高频刺激主动脉与肺动脉交界处均诱发了起源于右室流出道部位的室速,且室速持续时间均大于4小时。2、室速组L型钙通道α1c蛋白表达量明显下降;干预组L型钙通道α1cc蛋白的表达下降,但与对照组比较无显著差异。结论:1、室速组的心肌L型钙通道α1c蛋白表达发生了重构。2、维拉帕米可以改善心肌L型钙通道α1c蛋白的重构。3、L型钙通道在RVOT-VT发生、持续中起重要作用。HTR2A基因多态性与云南彝族酒精依赖关联性研究
摘要:目的:探讨酒精依赖和云南彝族5-羟色胺2A受体(HTR2A)基因多态之间的关系。方法:采用PCR-RFLP技术对330健康人(对照组)和110名酒精依赖者(病例组)的5-HT2A受体基因的遗传多态性进行检测。结果:在440例样本中共检测到2种等位基因A和G,三种基因型AA,AG,GG.三种基因型在对照组中频率分别是38.5%,55.8%,5.8%;在病例组中的频率分别是30%,63.6%,6.4%。结论:在云彝族人群中,HTR2A基因rs6311(A-1438G)位点与酒精依赖无显著关联,HTR2A基因rs6311(A-1438G)位点在云南汉族和云南彝族酒精依赖组中无显著差异,但是在健康对照组中存在关联性.三氧化二砷对肝癌细胞系SMMC-7721凋亡及 Smac caspase-9、caspase-3 蛋白表达的影响
摘要:目的:研究三氧化二砷(As203)对人肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用及对Smac、caspase-9、caspase-3表达的影响。方法:人肝癌细胞SMMC-7721经As20,处理,共分为四组,分别为空白对照组、低剂量组、中等剂量组、高剂量组。分别采用MTT、Hoechst33258染色法、Annexin V-FITC/PI双染法观察其对SMMC.7721细胞增殖的抑制,凋亡细胞核的形态学变化,以及诱导凋亡作用;采用Westemblot法检测凋亡相关蛋白Smac、caspase-9、caspase-3表达的变化。结果:MTT显示:As203在体外能明显抑制SMMC-7721的生长,具有时间剂量依赖关系,与空白对照组相比,其余三组细胞生存率明显下降,差异均有统计学意义(P〈0.05);Hoechst33258显示细胞呈明显的凋亡细胞形态学特征,具有剂量依赖性;AnnexinV-FITC/PI双染法显示:As203作用24小时可诱导SMMC-7721细胞凋亡,且呈剂量依赖性,与空白对照组相比(2.69±0.58),其余三组(4.01±0.58)、(5.99±1.69)、(9.26±2.34)差异均有统计学意义(P〈0.05);Westernblot显示:As2O3作用SMMC-7721细胞24小时,Smac、caspase-9、caspase-3表达上升,呈剂量依赖性,与空白对照组相比,其余三组蛋白表达量明显增加,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:-定量的As203能抑制SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Smac、caspase-9、caspase-3表达有关。线粒体通透性转换孔在缺血预处理脑保护中的作用及机制
摘要:目的:线粒体通透性转换孔通透性改变是导致缺血再灌注损伤的原因,线粒体功能的致命性改变最终引起细胞凋亡,本研究旨在观察线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)在缺血再灌注及缺血预处理脑保护中的作用;方法:将体外培养8天的海马神经元细胞分为五组,正常对照组(A组),缺血再灌注组(B组),缺血预处理+缺血再灌注组(C组),苍术苷+缺血再灌注组(D组),缺血预处理+苍术苷+缺血再灌注组(E组)。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位,Western-blot检测Bcl-2,Bax的表达。结果:与A组比较,其余四组线粒体膜电位均降低,神经元凋亡率升高(P〈0.05);与B组比较,c组线粒体膜电位升高,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达上调,Bax表达下调(P〈0.05);与c组比较,E组粒体膜电位降低,神经元凋亡率升高,Bcl.2表达下调,Bax表达上调(P〈0.05)。结论:我们在细胞及分子生物学水平对MPTP及缺血预处理的研究后发现,缺血预处理能有效减轻海马神经元缺血再灌注损伤,抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡,其机制与抑制MPTP的开放有关。蒲公英抗肿瘤活性部位的GC-MS分析研究
摘要:目的:考察蒲公英提取物对MCF-7增殖作用的影响,研究蒲公英抗肿瘤活性部位的化学成分。方法:采用MTT法比较蒲公英水提物、醇提物和不同极性提取物对MCF-7增殖的影响;以气相色谱.质谱(GC-MS)联用技术对具有抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖的部位进行分离和鉴定。结果:蒲公英水提物和醇提物对MCF-7细胞均有抑制作用,体外最大抑制率分别达到92.95%、93.59%,蒲公英不同极性溶剂提取物中,氯仿部位抑制MCF-7的增殖,且抑制作用高于醇提和水提物,乙酸乙酯和石油醚部位促进MCF-7的增殖。从蒲公英氯仿提取物中鉴定出80种化合物,占其总量的98.07%。结论:蒲公英氯仿部位具有抗肿瘤活性,为蒲公英抗肿瘤活性成分的研究提供了依据,拓展了筛选中药活性成分的方法。一种白细胞介素-2缓释微球制备新方法及体外表征
摘要:目的:开发一种白细胞介素-2(m-2)长效缓释微球剂型。方法:采用S/O/W法制备了白介素-2因子多糖微粒的PLGA微球,考察了微球的表面形态、粒径分布等,并且运用ELISA方法考察了微球的体外释放效果。结果:本方法制备的白介素-2因子微球光滑圆整,粒径分布较均匀,体外缓释达32天,累积释放率近90%。结论:本方法制备的白介素-2因子微球,不仅具有有效地保护IL-2蛋白活性,同时实现长效缓释的目标,是一种可行的蛋白缓释方案。奥沙利铂或5-FU对人肝癌HepG2细胞低氧低血清损伤后的增殖的影响
摘要:目的:探讨奥沙利铂或5.Fu单药对经低氧低血清损伤的人肝癌HepG2细胞增值的抑制作用。方法:体外培养HepG2细胞,建立低氧低血清细胞模型,分组选用奥沙利铂、5.F1J、奥沙利铂+低氧、5-FU+低氧、奥沙利铂+低血清、5-FU+低血清、奥沙利铂+低氧低血清、5.Fu+低氧低血清,48h后MTT法检测不同浓度的奥沙利铂或5-Fu对低氧、低血清和低氧低血清组的细胞增殖情况。结果:奥沙利铂或5.Fu对HepG2细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖关系(P〈0.05),细胞低氧低血清损伤同时奥沙利铂或5.Fu处理后的抑制率明显高于单独用药组(P〈0.01)。结论:奥沙利铂或5-Fu可抑制HepG2细胞的增殖,低氧低血清处理后,抑制作用更强。PLGA微球复合明胶组织工程支架缓释蛋白药物的研究
摘要:目的:研究PLGA微球复合明胶支架对蛋白药物的释放影响。方法:将模型蛋白BSA通过复乳法制备成缓释PLGA微球,然后将微球埋置于明胶支架中,形成担载蛋白的PLGA微球复合明胶组织工程支架。考察复合支架体外蛋白释放行为,并用MicroBCA法定量测定释放的BSA量,采用β-半乳糖苷酶催化ONPG的方法检测制备前后蛋白的活性,并与不含PLGA微球直接担载蛋白的支架做对照。结果:PLGA微球复合支架蛋白的包封率能达到73.2%,其中第一天释放20%,对蛋白活性的保持达到70%以上。结论:微球复合明胶支架可以改善一般组织工程支架蛋白药物的突释,提高蛋白药物在制剂,贮存,释放过程中的稳定性。羟基磷灰石/柞蚕丝素(HA/TSF骨仿生纳米纤维的生物学性能研究
摘要:目的:柞蚕丝素(tussah silk fibroin,TSF)和羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)均具有良好的生物活性和生物相容性,是组织工程研究的热点i,但结构单一及微米级的材料所表现出的性能简单,不能满足人们对生物材料支架性能的要求,本课题将两者按不同比例进行复合,探讨不同皮芯比例羟基磷灰石/柞蚕丝素(HA/TSF)的骨仿生纳米纤维的生物学性能。方法:首先利用同轴静电纺丝技术,以TSF水溶液为皮,HA水溶液为芯,制备不同皮芯比例的HA/TSF骨仿生纳米纤维,然后将人成骨肉瘤细胞(MG-63)种植在不同皮芯比例的HA/TSF纳米纤维上。在不同的时间点分别通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态学变化;通过四甲基偶氮噻唑蓝比色(Four methyl azo thiazole blue colorimetric, MTT)法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测法观察细胞在材料表面的增殖和分化,从多角度来评价材料的生物学性能。结果:通过形态学观察,SEM观察以及MTT检测,发现除空白对照组外,各组样品均显示良好的生物相容性,均能促进细胞的黏附、增殖,尤以HA/TSF为2:1时最明显;通过MG-63细胞的ALP活性检测,发现当HA/TSF比例为2:1时,最能促进细胞ALP活性的表达,有利于诱导成骨细胞的分化。结论:皮芯结构的HA/TSF骨仿生纳米纤维具有良好的生物学性能,且二者在自然界来源丰富,价格便宜,为临床骨组织缺损修复的应用奠定了一定的实验基础多甲氧基黄酮对人胶质母细胞瘤细胞系生物学特性的影响
摘要:目的:多甲氧基黄酮(PMFs)因其抗氧化、抗癌、抗炎及抗动脉粥样硬化等多样的生物学活性受到国内外学者的广泛关注,但其在神经胶质瘤治疗中的潜在作用尚未见报道。本研究对多甲氧基黄酮处理人胶质母细胞瘤细胞系对其生物学特性的影响,初步探讨PMFs在神经胶质瘤治疗中的潜在应用。方法:不同浓度(0,20,40,60,80,100μg/mL)的PMFs处理人胶质母细胞瘤细胞系U251不同时间后.分别用Annexinv/PI双染法检测细胞凋亡的变化,MTT法检细胞活力的变化,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:随着多甲氧基黄酮的浓度及处理时间的增加,细胞的增殖明显受到抑制,同时诱导细胞大量凋亡,促使细胞生长停滞于G2/M期;此外,多甲氧基黄酮剂量依赖性的抑制胶质瘤细胞的侵袭。结论:PMFs能剂量和时间依赖性降低人胶质母细胞瘤细胞系U251的,同时显著诱导细胞瘤的凋亡和侵袭能力,提示PMFs可能对神经胶质瘤的高增殖性和侵袭性有一定的抑制作用,因此可能具有成为治疗神经胶质瘤药物的潜在应用价值。血清Hcy、FA、VitB12水平及H.pylori感染与脑梗死的相关性研究
摘要:目的:探讨脑梗死(cerebral infarction,CI)患者血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、叶酸(folate,FA)、维生素B12(Vitamin B12,VitBl2)水平及幽门螺杆菌(H_pylori)感染与脑梗死的关系,为预防和治疗脑梗死提供参考依据。方法:选择本科收治的132例脑梗死患者和同期81例健康对照者为研究对象,检测和比较其血清同型半胱氨酸(Hey)、叶酸(FA)、VitB12水平及HP-IgG抗体。结果:(1)脑梗死患者H.pylori的感染率为50.76%,显著高于健康对照组(35.80%)(X2=0.54,P〈0.05);(2)脑梗死患者血清Hey[(20.02±8.84)μmol/L]和FA水平[(14.47±6.38)ng/mL)]与健康对照组[(12.36±4.97)μmol/L,(16.82±11.43)ng/mL)]比较,均具有显著差异(P〈0.01,P〈0.01);而VitB12水平与健康对照组比较无统计学意义(P〉0.05);(3)脑梗死患者中,HP-IgG阳性的患者Hey水平[(24.20±8.81)μmol/L]明显高于HP-IgG阴性的患者[(15.71±6.53)μmol/L](P〈0.01),血清FA水平[(14.59±7.54)ng/mL)]明显低于于HP-IgG阴性的患者[(14.43±4.98)ng/mL](P〈0.05),而两组之间VitBl2水平比较无明显差异(P〉0.05);HP—IgG阳性的脑梗死患者Hey水平[(24.20±8.81)bLmol/L]与HP—IgG阳性的健康对照组[(13.25±5.24)μmol/L]相比,差异显著(P〈0.05),FA,VitB12水平低于健康对照组,但并无显著差异(P〉0.05).结论:脑梗死患者H.pylori的感染率高于健康人群;H.pylori感染可能影响脑梗死患者Hey的代谢,导致Hey水平升高,促进了脑梗死的发生和发展。17β-雌二醇和跑台运动对去卵巢大鼠骨组织及子宫ERα蛋白表达影响的对比研究
摘要:目的:雌激素受体α(ERα)作为雌激素调节骨效应的主要受体在雌激素对骨量和骨代谢的调节中发挥重要的作用,为此本研究比较了17β-雌二醇(E2)和跑台运动对去卵巢大鼠骨组织和子宫ERα蛋白表达影响的异同。方法:将40只健康3月龄雌性SD大鼠,按体重分层后随机分为假手术、去卵巢、雌激素和运动四个组。手术1周后,雌激素组大鼠每周按体重颈部皮下注射三次17β-雌二醇,每次25μg/kg体重。运动组每周进行4次45min、速度18m/min、坡度5°的跑台训练。连续给药或运动处理14周后。采用放射免疫法和免疫组织化学法分别检测血清E2水平以及胫骨和子宫ERα蛋白表达的变化。结果:大鼠去卵巢后,子宫重量、子宫重量指数和血清E2水平显著下降,补充外源性17β-雌二醇后,三项指标均显著增加;但运动处理只能增加血清E2水平,对子宫重量和子宫重量指数均无显著影响。子宫EIh蛋白免疫组化结果显示:ERα在去卵巢组子宫内膜腔上皮、腺上皮及基质中的表达显著低于假手术组,而在雌激素组中的表达高于去卵巢组,运动组各部位ERα表达虽有所增加,但是增加的程度远低于雌激素组。胫骨近端ERα蛋白免疫组化结果显示:去卵巢后,胫骨近端骨骺端软骨细胞的细胞核内ERα表达减少,运动和雌激素干预后,胫骨近端ERα表达增加。结论:运动和雌激素处理均能刺激去卵巢大鼠子宫和骨组织ERα蛋白的表达,但运动处理无雌激素处理增加子宫重量的副作用。可见在绝经后骨质疏松的预防中,运动处理可能要优于雌激素处理。双倍剂量氯沙坦治疗IgA肾病中蛋白尿疗效评价
摘要:目的:探讨双倍剂量氯沙坦氯沙坦在IgA肾病(IgA nephropathy,teAN)中降低蛋白尿的临床疗效。方法:选取40例经肾穿刺病理诊断为IgAN的患者,随机分为2组,A组18例采用单剂量(50mg,qd)氯沙坦;B组22例用双倍剂量(100mg,qd)氯沙坦,观察8周后两组的血压、实验室指标:血肌酐、尿素氮、血钾、24h尿蛋白、内生肌酐清除率(creatinine clearancerate,CCr)等以及临床症状,并作安全性评价。结果:B组患者24h蛋白尿下降(0.91±0.33g/24h),A组患者蛋白尿下降(0.21±0.22g/24h),B组24h蛋白尿下降率明显高于A组(P〈0.05)。双倍剂量氯沙坦在IgAN治疗中未出现不良反应,包括高血钾、咳嗽、低血压或水肿等。结论:双倍剂量氯沙坦在治疗IgAN中降蛋白尿的疗效较单剂量明显,应用安全,耐受性好,无明显不良反应。关节腔注射联合周林频谱仪治疗对类风湿关节炎合并骨关节炎的体会
摘要:目的:探讨关节腔注射联合周林频谱仪对类风湿关节炎合并骨关节炎的疗效及护理体会。方法:将本院90例类风湿关节炎合并骨关节炎患者随机分成3组,所有患者治疗前均进行全身情况评估以及相应的常规护理措施.对照A组30例予以玻璃酸钠20mg关节腔内注射,观察A组30例使用玻璃酸钠关节腔内注射联合周林频谱仪患处照射,平均时间(19±4.5)min,照射距离以皮肤感觉温热为宜。观察B组30例在观察A组治疗方案基础上实施康复训练。三组均以15d为一疗程,疗程结束后比较各组患者临床总有效率、血液流变学变化情况以及不良反应的发生率。结果:(1)治疗后观察组临床症状总有效率较对照组比较具有统计学差异(P〈0.05),观察组优于对照组,治疗后观察B组临床症状总有效率较观察A组比较具有统计学差异(P〈0.05),观察B组优于观察A组;(2)治疗后三组血流速度(Vs)、平均血流速度(Vd)、舒张末期血流速度(Vm)均较治疗前升高(P〈0.05),其中观察组升高幅度较对照组明显(P〈0.05);观察组中观察B组优于观察A组(P〈0.05);(3)三组不良反应发生率比较无统计学差异(P〉0.05)。结论:玻璃酸钠关节腔内注射联合周林频谱仪对类风湿关节炎合并骨关节炎疗效肯定,能快速改善患者临床症状,科学良好的康复护理干预是促进疗效的关键。