部分股骨移植：一个新的带血管的骨髓移植模型
摘要：目的：大鼠后肢移植是带血管的骨髓移植的主要模型,同时含有骨髓和骨髓微环境,有利于免疫耐受的诱导。但其成分复杂,为研究其中骨髓的作用,构建一个成分相对单一的带血管的骨髓移植模型。方法：以MHC不相符的近交系Lewis和BN大鼠分别作为供体或受体,将含血管蒂的供体2/3股骨移植到受体腹股沟区,显微吻合供受体间的股动静脉。实验分为3组：同基因移植组Lewis→Lewis;排斥组Lewis→BN;免疫抑制组Lewis→BN,术后给予环孢素A。通过大体和病理学检查观察各组移植物存活情况,外周血流式监测排斥组和免疫抑制组的嵌合水平。结果：术后7 d,排斥组排斥反应显著,骨髓细胞明显减少、坏死,外周血嵌合水平几乎为0,而同基因移植组股骨存活良好,骨髓HE染色大致正常,可见髓腔内有大量的嗜碱性骨髓细胞;术后60 d,同系移植组和免疫抑制组的大体观察及组织病理学大致相同,均证实移植物存活良好,同时流式可见免疫抑制组术后7、28、60 d外周血中存在供体特异性的嵌合。结论：带血管蒂的部分股骨移植物是一个简便可靠的带血管的骨髓移植模型,嵌合分析表明其具有诱导耐受的潜能,有利于阐明异体复合组织中骨髓对免疫耐受诱导的作用和机制。应用高分辨率熔解曲线分析石蜡标本中KRAS基因突变（英文）
摘要：目的：KRAS基因在结直肠癌患者突变率为30%～50%,并且KRAS基因状态与抗EGFR抗体疗效的密切相关。常用的直接测序法其检测灵敏度低、容易出现假阴性结果。采用高分辨率溶解曲线分析法检测结直肠癌中KRAS基因突变,探索其应用于临床检测的可行性。方法：本文收集20例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本,应用高分辨率熔解曲线方法检测KRAS基因突变（2,3号外显子）。将KRAS基因突变型DNA（p.G12D）和野生型DNA梯度混合稀释,突变型DNA浓度分别为40%、20%、10%、2%,进行高分辨率熔解曲线方法进行检测,并将扩增产物进行直接测序,比较两种方法的灵敏度。结果：在20例结直肠癌患者中检出5例2号外显子突变,p.G12D 2例,p.G12V 2例,p.G13D 1例,3号外显子未检出突变。HRM方法检测基因突变的检出限可达2%,直接测序法检测基因突变的检出限为20%。结论：HRM法比直接测序法灵敏度高,能精确检测出结直肠癌石蜡标本中低浓度的KRAS突变,有望应用于临床基因突变检测。叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送系统的制备
摘要：目的：构建靶向肿瘤组织的药物输送系统,是解决目前临床肿瘤化疗问题的有效途径之一。我们拟开展叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送系统的制备及其表征。方法：以丁二酰化肝素为载体,通过碳二亚胺法将叶酸和丁二酰化肝素连接,制备肝素-叶酸偶联物,然后通过物理方法将紫杉醇包裹在肝素-叶酸偶联物中,在水溶性条件下体系自组装成肝素-叶酸-紫杉醇纳米粒。应用核磁共振氢谱（1H NMR）,动态光散射（DLS）和扫描电子显微镜（SEM）对构建的纳米药物结构进行表征,同时观测其在水溶性条件下的自组装行为。结果：成功制备了肝素-叶酸-紫杉醇纳米药物输送系统,检测表明药物系统带有8.5%（w/w）的叶酸并负载9.6%（w/w）的药物,SEM检测表明形成了球状的纳米颗粒,DLS表明粒子的粒径在了86 nm左右。结论：我们成功制备了叶酸受体介导的负载紫杉醇的纳米药物输送系统,在进一步开展的生物活性的检测中,希望通过叶酸受体的靶向作用,引导药物定向分布在肿瘤组织,从而提高化疗药物的治疗效果同时降低其对正常细胞的毒副作用,为开发新型靶向药物输送系统提供基础。一种同时分离培养大鼠肝细胞及肝枯否细胞技术的建立
摘要：目的：建立简便、经济的同步分离培养肝细胞及kupffer细胞的方法。方法：采用肝脏原位灌洗结合离体胶原酶灌注消化的方法获得总细胞悬液,差速离心分离肝细胞及肝非实质细胞,经多次低速离心可分离肝细胞,经percoll密度梯度离心以及选择性贴壁法得到纯化的kupffer细胞。台盼蓝染色鉴定细胞活力。使用倒置相差显微镜、HE染色、PAS染色及白蛋白免疫组织化学染色对培养肝细胞的形态及功能进行检测。使用光学显微镜、荧光显微镜及CD68免疫荧光染色鉴定分离的kupffer细胞。结果：体外成功的同步分离培养了肝细胞及kupffer细胞,肝细胞产率为1.37±0.53×108/大鼠,kupffer得率为3.45±0.41×106/g肝脏。细胞存活率及纯度都可达90%。肝细胞培养24 h后呈典型肝细胞形态,7天后仍具有糖原合成和白蛋白合成能力。贴壁后的kupffer细胞呈典型的星型或三角形,且其标志分子CD68免疫荧光染色阳性。结论：应用改良的原位灌注方法可以很好的同时分离具有活性及功能的肝细胞和kupffer细胞。免疫球蛋白G（IgG）对急性颈髓损伤大鼠模型神经炎症反应的抑制效应
摘要：目的：探讨免疫球蛋白（immunoglobulin G,IgG）对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）模型神经炎症的抑制效应。方法：60只雌性Wistar大鼠接受C7-T2椎板切除术后随机分为三组,空白对照组,盐水安慰剂组,IgG治疗组,每组各20只动物。创建盐水安慰剂组和IgG治疗组动物的C7-T1节段脊髓损伤模型,空白对照组动物不进行SCI模型的创建。盐水安慰剂组以单剂量0.4g/kg体重在SCI模型重建后15 min静脉注射入动物体内,而安慰剂组动物静脉注射1 mL无菌盐水。实验动物SCI模型创建后4h处死动物进行细胞因子和趋化因子的酶联免疫检测,24 h处死动物采用western blot技术进行MMP-9的蛋白表达检测分析。结果：SCI后4 h,相比空白对照组,盐水安慰剂组动物的TNF-α,IL-1β及IL-6等炎性介质的表达水平显著升高,IgG治疗组的炎性介质水平也有一定程度升高,但均显著低于盐水安慰剂组,差异有统计学意义（P〈0.05）;盐水安慰剂组和IgG治疗组的MCP-1和CINC-1的蛋白表达水平均显著高于空白对照组（P〈0.05）,但相比IgG治疗组,盐水安慰剂组的MCP-1的蛋白表达水平显著更高（P〈0.05）而CINC-1的蛋白表达水平在安慰剂组和IgG治疗组间差异无统计学意义（P〉0.05）。SCI后24 h,安慰剂组动物的MMP-9水平显著升高,而空白对照组动物标本中未检测到MMP-9表达。而IgG治疗组动物的MMP-9水平显著低于盐水安慰剂组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：SCI大鼠采用IgG治疗后会显著降低TNF-α,IL-1β,IL-6,MCP-1以及MMP-9等介质的表达水平,表明IgG在SCI中可能具有神经保护效应。在青岛汉族人群中INSIG1rs9769826单核苷酸多态性与血糖水平有关,与血脂水平无关（英文）
摘要：目的：探讨青岛汉族人群中INSIG1rs9769826单核苷酸多态性与血糖和血脂的关系。方法：随机选取217名年龄在35-86岁健康的青岛汉族居民作为受试者。应用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性检测技术（PCR-RFLP）对INSIG1基因rs9769826多态性进行基因分型,用协方差分析的方法分析rs9769826多态性与血糖和血脂的关系。结果：INSIG1基因rs9769826位点AAAG GG基因型的频率分别为70.04%,36.73%和3.23%,INSIG1基因rs9769826多态性与空腹血糖水平之间差异有显著意义（P〈0.001）,与血脂水平差异无显著意义。结论：INSIGIrs9769826突变基因G与空腹血糖升高有关。基于新一代测序技术的mtDNA突变检测方法学的建立
摘要：目的：大量研究证实线粒体DNA（mtDNA）突变与肿瘤发生及进展密切相关,但使用传统测序方法难以高通量、高精确度的检测mtDNA突变,为此本研究建立了基于新一代测序技术的mtDNA突变检测方法。方法：提取肝癌患者癌、癌旁组织以及外周血细胞总DNA,利用PCR技术对线粒体基因组进行富集并对PCR产物进行平末端、粘性末端连接或对PCR引物进行氨基修饰,构建mtDNA测序文库。经Illumina HiSeq 2000平台测序后利用生物信息学方法与人类mtDNA参考序列进行比对,并进行测序数据分析。结果：通过对不同质量基因组DNA进行评估后,发现三对引物法适用于大部分DNA样本的mtDNA富集。进一步我们发现PCR引物的氨基修饰可显著提高测序数据覆盖均一性,降低测序成本。结论：本研究利用新一代测序技术通过对线粒体DNA富集方法以及测序覆盖度均一性进行优化,建立了一套灵敏、特异、高通量的mtDNA突变检测策略,为mtDNA突变与疾病研究提供了新方法。不同浓度的5-氮杂胞苷对RPMI8226细胞系的诱导凋亡作用分析
摘要：目的：探讨不同浓度的5-氮杂胞苷对RPMI 8226细胞系的诱导凋亡作用。方法：对RPMI 8226细胞系采用5-氮杂胞苷0μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L处理24 h、48 h、72 h,并对RPMI 8226细胞系处理后进行刮痕实验,12 h后对细胞迁移进行比较。结果：在作用24h、48h时,随着作用浓度的增加,RPMI-8226细胞的抑制率出现明显的增加,但在作用72 h时,我们发现10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L其对RPMI-8226细胞的抑制效果无明显的差异性;刮痕实验后12 h后其出现差异性,其中药物浓度越大其对RPMI-8226细胞的运动迁移能力越弱。结论：DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷可对RPMI-8226细胞的凋亡具有良好的诱导效果,同时可抑制RPMI-8226细胞的增殖以及迁移。白介素18启动子区基因多态性与儿童EV71感染相关性研究（英文）
摘要：目的：研究白介素18基因启动子多态性与儿童EV71感染遗传易感性的关系。方法：收集EV71感染患儿177例,单纯HFMD组127例,HFMD并脑炎组50例,提取外周血DNA,用序列特异性引物-聚合酶链反应（SSP-PCR）技术及基因测序法检测IL-18启动子区-137G/C、-607A/C位点的基因多态性。结果：EV71感染患儿与健康儿童IL-18-607基因型以CA为主,AA、CC次之,EV71感染患儿AA基因型、A等位基因分布频率显著高于健康儿童。EV71感染HFMD并脑炎组患儿AA基因型分布显著高于单纯HFMD组患儿,差异有统计学意义。EV71感染患儿与健康儿童IL-18-137基因型以CC为主,CG次之,GG占少数。该位点基因型及等位基因在EV71感染组与健康儿童、单纯HFMD与HFMD并脑炎组的分布无显著差异。结论：IL-18基因多态性与EV71感染相关,IL-18-607AA基因型、A等位基因携带儿童更易感染EV71病毒,且AA基因型患儿易并发脑炎,-607AA基因型可能为EV71感染的易感基因型。-137C/G位点基因多态性与EV71感染无相关性。玻璃化法与低温冷冻法保存兔关节软骨异体移植的实验对比研究
摘要：目的：观察玻璃化法保存同种异体软骨移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与低温冷冻法作比较。方法：18只健康成年日本大白兔,其中6只用于异体骨软骨柱的制备,另外12只随机分成2组,每组各6只。软骨移植物标本取材后,采用低温冷冻法和玻璃化法保存2 w。同种异体骨软骨移植物相应复温后移植于兔膝关节软骨缺损模型的相应软骨缺损区。移植术后12 w处死动物,移植区软骨组织后固定、切片、脱钙及石蜡包埋。采用苏木精-伊红染色及蕃红-O染色后进行组织学观察及Mankin评分。结果：玻璃化组软骨移植区颜色与周围正常软骨组织基本一致,软骨完整,无坍陷及裂纹;镜下观察可见其组织深层透明软骨样组织,浅层软骨区可见纤维样软骨组织,细胞成熟,大量分泌软骨基质。低温冷冻组软骨移植区表面欠光整,存在裂隙及轻度坍陷;镜下观察可见少量纤维样软骨组织,大部分为纤维结缔组织,细胞排列相对紊乱,软骨基质分泌量少。两组的组织学Mankin评分分别为9.6±2.4和3.0±1.0,低温冷冻组显著高于玻璃化组（t=2.014,P=0.000）。结论：采用玻璃化法保存兔同种异体软骨移植物是一种可行的方法。相比低温冷冻法,玻璃化法保存的同种异体软骨其移植术后,软骨修复区的组织更接近正常软骨。周期性张应力对面颌肌细胞Na~＋/K~＋-ATPase功能活性影响
摘要：目的：本研究在成功构建面颌肌细胞体外培养一力学刺激模型的基础上,探讨机械张应力对细胞内Na＋水平和面颌肌细胞Na＋/K＋-ATPase功能活性的影响。方法：本实验采用Blua法,对SD大鼠乳鼠面颌肌细胞进行体外原代培养、鉴定并绘制生长曲线;取第3代细胞接种于细胞加力板上,采用Forcel四点弯曲加力装置,对细胞分别施加1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h的张应力刺激,后测定细胞内Na＋水平变化和Na＋/K＋-ATPase功能活性改变。结果：（1）Na＋水平变化：与对照（不加力）组相比,加力1h细胞内Na＋显著增加（P〈0.05）,并随加力时间延长逐渐降低,加力至12h时降到正常水平,再延长加力时间Na＋无明显变化。（2）Na＋/K＋-ATPase功能活性变化：分别施加不同时间的周期性张应力后,Na泵的活性在加力8小时后才开始增加（0.5725mmolPi/mgPr.hr）,随加力时间延长进一步增加,48小时后达到最大值（0.8963mmolPi/mgPr.h）。结论：周期性张应力刺激会引起细胞内Na＋的改变,并可以增加骨骼肌细胞Na＋/K＋-ATPase的活性。PLGA人工抗原提呈细胞载体的制备
摘要：目的：目前常用的载体材料,在体内很难降解,限制了其在体内的应用,本文通过用PLGA微球制备人工抗原提呈细胞（AAPC）载体,对其功能进行验证。希望此方法能弥补传统方法的不足。方法：将软脂酸偶联到亲和素上,然后按照传统的复乳法来制备PLGA微球,并且通过使用荧光素（FITC）标记、生物素化的牛血清蛋白（BSA）对其功能进行验证。结果：通过该方法可以得到表面固定生物素的PLGA微球,并且证明软脂酸修饰并未影响到亲和素分子和生物素的结合,生物素化的BSA分子可以有效的结合到微球的表面。结论：PLGA微球表面很难引进合适的化学基团,导致其不能像聚苯乙烯微球那样通过化学反应来将亲和素分子固定在微球的表面上,通过将软脂酸偶联到亲和素分子上,可改变其表面很难引进合适的化学基团的不足,用其微球可用于制备AAPC载体。人工抗原提呈细胞是免疫学研究领域的新思路,可在基础免疫研究和临床治疗方面发挥较大的作用,但作为一门新兴技术,在制备、效果评价及应用方面需要逐渐完善和成熟,用PLGA微球为载体构建,弥补了磁珠、聚苯乙烯不能在体内降解的不足,且安全无毒,可供参考。二烯丙基二硫作用于K562细胞后凋亡相关基因的差异表达
摘要：目的：研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide DADS）作用于人白血病K562细胞后凋亡相关基因的差异表达,为进一步探讨DADS诱导K562细胞凋亡的分子机制提供基础。方法：采用瑞士-吉姆萨和Hoechst 33342染色观察细胞形态学变化。运用基因芯片技术检测40 mg/LDADS作用于K562细胞24h后凋亡相关基因的差异表达,选择其中上调基因GADD45A、下调基因HO-1运用RT-PCR技术进行验证。结果：40 mg/L的DADS作用于K562细胞后出现凋亡所具有的典型形态学变化。40 mg/L DADS作用K562细胞24 h后有14个凋亡相关差异表达基因。GADD45A、HO-1基因表达情况与基因芯片结果一致。结论：DADS可能通过多个基因和多条信号转导通路共同作用诱导人白血病细胞K562凋亡。幽门螺杆菌23s rRNA基因突变与克拉霉素耐药性关系的研究
摘要：目的：通过对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）23s rRNA基因突变位点分析,观察23s rRNA各突变点与克拉霉素耐药的关系。方法：分离培养HP、提取DNA、扩增其23s rRNA基因片段及测序;运用Clustal W软件进行序列比对找出突变点。选用GenBank中已全基因组测序的35株HP,根据其mutY、ppa、efp和ureI 4个管家基因建立Neighbour-joining树,根据进化树结果将35株HP分为欧非和东亚菌群;观察各突变点与菌群分布的关系。结果：与耐药有关的A2143G突变率为32.8%,T2182C突变率为90.6%但与耐药无关,其碱基分布具有菌群差异：东亚菌群以C碱基为主,欧非菌群以T为主（P〈0.05）,其他可能与耐药有关的各位点分别为A2223G（6.25%）、T2190C（1.6%）、C2195T（1.6%）。结论：青岛地区HP克拉霉素耐药率为32.8%并表现为23s rRNA基因A2143G突变,而2182位点突变是由于菌群分布差异导致的与克拉霉素耐药无关。关节镜下应用带跟骨异体跟腱联合重建前交叉韧带及内侧副韧带
摘要：目的：探讨关节镜下应用带跟骨异体跟腱联合重建前交叉韧带（anterior cruciate ligament,ACL）及内侧副韧带（medial colateral ligament,MCL）和恢复膝关节前内侧稳定性的效果。方法：选择2007年1月至2010年1月收治符合纳入标准的27例A CL合并MCL损伤患者。其中男18例,女9例;年龄16～48岁,平均32.5岁;右膝15例,左膝12例。患者在排除手术禁忌后,均在关节镜下采用带跟骨异体跟腱一期联合重建ACL和MCL。患者受伤至手术时间7~14天,平均10天。结果：术后2周所有患者切口均I期愈合。所有病例获得长期随访,随访时间24～32个月,平均26个月。术后24个月,Lysholm评分由术前的32.10±4.35升至86.25±4.12分,国际膝关节文献委员会（IKDC）评分由术前的33.27±4.25分,升至82.46±4.13分,术前与术后Lysholm评分及I KDC评分均有显著差别（P〈0.05）。结论：关节镜下应用带跟骨异体跟腱一期联合重建治疗膝关节脱位能够较好的恢复患者膝关节前内侧稳定行,近期效果良好。α-硫辛酸联合空气波压力治疗老年糖尿病周围神经病变疗效观察
摘要：目的：探讨α-硫辛酸联合空气波压力治疗仪治疗老年糖尿病周围神经病变的临床疗效。方法：将2010年1月至2012年6月我院收治的60例老年糖尿病周围神经病变患者随机分成对照组和治疗组两组,每组各30例。对照组患者单独用α-硫辛酸300 mg加入生理盐水250 mL中静滴,每日1次;而治疗组采用相同剂量的α-硫辛酸治疗,并联合空气波压力治疗仪,每次45分钟,1次/日。观察和比较治疗前及治疗2周后两组患者自觉症状、运动神经传导速度及感觉神经传导速度的差异。结果：对照组和治疗组的治疗总有效率分别为63.3%和86.7%,治疗组显著高于对照组,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后,两组患者的运动和感觉神经传导速度均较治疗前提高,且治疗组的神经传导速度较对照组提高更明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：α-硫辛酸联合空气波压力治疗老年糖尿病周围神经病变的疗效较单用α-硫辛酸更好,且简便安全,值得临床推广。强化谷氨酰胺的低氮低热量肠外营养支持在存在营养风险的胃癌术后应激期的临床应用
摘要：目的：本研究旨在探讨存在营养风险的胃癌患者根治术后应激期采用低氮低热量（HNHC）及谷氨酰胺强化的低氮低热量（GEHN）营养支持方案的临床应用价值。方法：NRS评分（3～5分）的胃癌患者89例,随机分为3组。术后分别给予传统热氮量支持方案（TPN）、HNHC及GEHN 6天。监测血糖水平,营养指标,免疫指标,及术后恢复情况。结果：（1）.术后血糖水平HNHC组的明显优于TPN组,在术后第1、2、3天组间差异有统计学显著性意义。（2）.术后短期三组均存在负氮平衡,HNHC与TPN组比较各营养指标变化情况无统计学差异。HNHC与GEHN组比较：术前1天至术后第3天,转铁蛋白的下降幅度GEHN组明显低于于HNHC组;术后第3天至第6天、术前1天至术后第6天,GEHN中四种蛋白回升幅度明显大于HNHC,差异均存在统计学意义。（3）.术后三组免疫指标,TPN组与HNHC组无统计学显著性差异,GEHN组有优于前两组的倾向,其中CD3变化存在统计学差异。（4）.SIRS的发生数HNHC组少于TPN组,GEHN组术后排气时间明显较HNHC组快。结论：与传统TPN相比,HNHC在存在术前营养风险的胃癌患者术后应激期短期应用安全可行。HNHC方案术后应激期血糖水平稳定,全身炎症反应综合症低。GEHN方案能有效改善术后氮平衡、提高免疫水平、缩短肠蠕动恢复时间。GEHN是值得临床推广的术后应激期肠外营养支持方案。Oct4在晚期浆液性卵巢癌中的表达及意义
摘要：目的：卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤,肿瘤干细胞理论认为卵巢癌中存在肿瘤干细胞,并且肿瘤干细胞是肿瘤复发、转移、耐药的罪魁祸首。Oct4是细胞干细胞特性的重要标志之一。本文旨在探讨Oct4蛋白在晚期浆液性卵巢癌的表达情况,并分析其表达水平与患者临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化法检测101例晚期浆液性卵巢癌中Oct4蛋白的表达情况,并结合临床资料分析Oct4蛋白的表达水平在晚期浆液性卵巢癌患者中的意义。结果：晚期浆液性卵巢癌患者中Oct4阳性表达率为87.1%（88/101）,其表达水平和患者的年龄、病理分化程度、淋巴结转移情况及临床分期无明显相关性（P〉0.05）,但是其高表达与化疗耐药明显相关（P=0.023）。结论：我们的研究证明Oct4在晚期浆液性卵巢癌中有较高表达,并且Oct4的表达与卵巢癌化疗后复发有关;理论上支持在晚期浆液性卵巢癌中可能存在肿瘤干细胞,且比例较高,肿瘤干细胞的比率和卵巢癌化疗耐药相关。Oct4可能是晚期浆液性卵巢癌治疗的新靶点。
