抑癌基因NDRG2对人结肠癌细胞系Caco-2增殖的影响
摘要：目的：采用重组慢病毒系统,在过表达和抑制NDRG2（N-myc downstream regulated gene 2）基因后,检测人结肠癌细胞系Caco-2的增殖情况。方法：分别采用NDRG2过表达慢病毒载体pLenti6-NDRG2和NDRG2干涉慢病毒载体pLKO.1-shNDRG2制备病毒并感染Caco-2细胞,经14天耐药的筛选,获得稳定感染的细胞株;采用Real time RT-PCR和Western blot方法明确NDRG2在稳转细胞株中的表达情况,同时采用MTT方法检测细胞的增殖能力,通过流式细胞仪检测细胞周期变化情况。结果：Real time RT-PCR和Western blot结果表明,在慢病毒pLenti6-NDRG2稳定感染的Caco-2细胞中,NDRG2表达上调;pLKO.1-shNDRG2稳定感染的Caco-2细胞中,NDRG2的表达下调。MTT实验结果表明,NDRG2过表达细胞株中细胞的增殖能力下降,而pLKO.1-shNDRG2慢病毒感染Caco-2后细胞的增殖能力明显增加;流式细胞术结果显示,过表达NDRG2使Caco-2细胞在G0/G1期细胞增多而S期的细胞减少,抑制细胞内源性NDRG2后G0/G1期细胞减少而S期细胞增多。结论：通过过表达和抑制NDRG2基因,验证了NDRG2作为抑癌候选基因能够有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖。实时荧光定量PCR检测癫痫发生中大鼠海马MEF2及CDK5的表达
摘要：目的：检测大鼠在癫痫发生过程中不同时间点海马肌细胞增强因子（myocyte enhancer factor,MEF2）mRNA及细胞周期素依赖性激酶5（cyclin-dependent kinase 5,CDK5）mRNA的表达水平,并分析两者之间的相关性。方法：采用锂-匹鲁卡品腹腔注射,建立大鼠慢性癫痫模型,提取海马组织中的总RNA,并逆转录为cDNA,应用Real-time PCR检测MEF2及CDK5 mRNA的表达量。结果：MEF2A/2D mRNA于造模中止后1 d急剧下降,3 d开始上升,至4 w达最高,后渐恢复至正常水平;CDK5 mRNA的表达量在整个癫痫发生过程中均呈上升趋势,4 w达最大,6 w开始下降,8 w恢复至正常水平。结论：MEF2与CDK5均参与了慢性癫痫的形成过程,但两者的表达量在时间上无明显关联性。犬心肌细胞分离方法的改良
摘要：目的：建立高效可靠的成年犬心肌细胞分离方法,获得高产量与高质量的心肌细胞,以便进行犬心肌细胞收缩功能的研究。方法：采用改良的Langendorff灌流胶原酶消化法分离得到左心室心肌细胞。荧光显微镜观察细胞生长状态和形态并利用单细胞收缩动态边缘检测系统测定心肌细胞收缩功能的改变。结果：结果显示,与传统方法相比,即刻分离的心肌细胞状态良好,复钙后的心肌细胞成活率达到70%-80%,转染重组腺病毒β2-EGFP培养48 h,心肌细胞成活率为60%-70%。给予持续电场刺激,心肌细胞可以保持收缩节律和幅度稳定30 min以上。结论：该方法操作简单,分离的活细胞产量高,质量好,节约实验成本和时间,为心血管相关研究提供良好的细胞模型。酪氨酸羟化酶在成年大鼠胰腺中的定位
摘要：目的：酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）是儿茶酚胺类递质合成的限速梅,儿茶酚胺类递质对胰腺内分泌细胞的功能具有重要的调控作用,本研究拟探讨酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）在成年大鼠整个胰腺的具体定位和表达。方法：取雄性成年大鼠胰腺,冰冻组织切片,应用免疫荧光技术观察酪氨酸羟化酶在整个胰腺中的表达分布情况,并进一步运用免疫荧光双标技术鉴定酪氨酸羟化酶是否与胰岛素、胰高血糖素、生长抑素以及胰多肽分别共定位于β细胞;α细胞;δ细胞及PP细胞,进一步确定合成酪氨酸羟化酶确切的细胞类型。结果：①在胰腺腺泡细胞胞浆中存在酪氨酸羟化酶的阳性表达颗粒。②分布于胰腺外分泌腺的神经纤维和胰岛的神经纤维中都有酪氨酸羟化酶的表达。③酪氨酸羟化酶与胰岛的四种内分泌细胞所合成的肽之间均没有共定位关系。结论：在胰腺,酪氨酸羟化酶只存在于胰腺外分泌腺的腺泡细胞胞浆内以及胰腺中的神经纤维中,而胰岛四种内分泌细胞中没有酪氨酸羟化酶,说明胰腺儿茶酚胺类神经递质一方面由胰腺外分泌部的腺泡细胞合成,另一方面来源于神经末梢的释放,而胰岛细胞不能合成儿茶酚胺类递质;该结果为进一步研究胰腺内、外分泌部之间的关系和儿茶酚胺对胰腺分泌功能的调节提供形态学证据。解偶联蛋白-866G/A基因多态性与肥胖关联性的Meta分析
摘要：目的：近年来,关于UCP2-866G/A基因多态性与肥胖关系的研究较多,但各研究的结果不尽一致。本文拟采用Meta分析的方法,对已公开发表的有关UCP2-866G/A基因多态性与肥胖的研究进行系统综合定量分析,以期科学的评价UCP2-866G/A基因多态性与肥胖的关系。方法：本研究运用计算机检索万方全文数据库、中国知网、维普数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed等数据库收集关于UCP2-866G/A基因多态性与肥胖相关的公开发表的文献,选择OR值及其95%CI作为Meta分析指标。利用Stata10.0软件对各研究结果进行异质性检验和效应值合并计算。结果：根据统一的纳入和剔除标准,纳入14篇文献,共有肥胖者5195例,对照组9735人。在总人群中,UCP2-866G/A位点A/G的OR=0.931（95%CI：0.884-0.980）,AA＋GA/GG的OR=0.924（95%CI：0.859-0.994）,AA/GG的OR=0.886（95%CI：0.797-0.985）,GA/GG的OR=0.925（95%CI：0.856-0.999）,有统计学意义。在欧洲人群中,UCP2-866G/A位点A/G的OR=0.912（95%CI：0.857-0.970）,AA＋GA/GG的OR=0.882（95%CI：0.808-0.962）,AA/GG的OR=0.846（95%CI：0.743-0.963）,GA/GG的OR=0.893（95%CI：0.814-0.980）,有统计学意义。但在亚洲人群中均无统计学意义。结论：我们认为-866G/A基因多态性与欧洲人群的肥胖有关,与亚洲人群的肥胖无关。阻断Notch信号的角质形成细胞对成纤维细胞胶原合成的影响
摘要：目的：本课题组前期工作已经证明阻断Notch信号对角质形成细胞的分泌功能有所影响,使其分泌的多种促纤维化因子发生改变。本实验将探讨在复合培养的条件下,通过调节角质形成细胞中的Notch信号,了解其对成纤维细胞collagen-1合成的影响。方法：运用角质形成细胞-成纤维细胞复合培养的模型,于复合培养前3天进行血清刺激或者γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断角质形成细胞中的Notch信号,即在角质形成细胞分化前进行干预。然后提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化,后与成纤维细胞共培养,观察阻断Notch信号后的角质形成细胞对成纤维细胞合成collagen-1的影响。结果：在分化前,给予角质形成细胞血清刺激,在复合培养0小时,Notch-1、Jagged-1表达明显升高（P〈0.05）,在复合培养第一天,p21表达上调、p63表达下降（P〈0.05）,表明在复合培养时,角质形成细胞中的Notch信号明显活化。通过在血清刺激前给予DAPT预处理,在复合培养0小时,角质形成细胞中Notch信号下游分子p21和p63的表达恢复至无血清刺激水平（P〈0.05）,表明DAPT组确实阻断了角质形成细胞中的Notch信号。而DAPT组的成纤维细胞collagen-1的表达相对于血清刺激组明显下降,而与无血清组无明显差异,表明阻断Notch信号后的角质形成细胞在复合培养条件下,确实能够抑制成纤维细胞collagen-1的表达,使其合成collagen-1的量恢复至无血清刺激水平。结论：DAPT能够阻断Notch信号的活化,用阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,能够明显抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原的能力,从而抑制瘢痕的增生。2-甲氧基雌二醇对乳腺癌MCF-7细胞HIF-1α、CXCR4、VEGF表达的影响
摘要：目的：探讨2-甲氧基雌二醇（2-Methoxyestradiol,2ME2）对乳腺癌MCF-7细胞生长及缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-induciblefactor1α,HIF-1α）、趋化因子受体-4（CXC chemokine receptor-4,CXCR4）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度2ME2对MCF-7细胞的增殖抑制作用;Hoechest 33258染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR、Western blot分别检测不同浓度2ME2对乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白表达水平的影响。结果：2ME2可较强的抑制MCF-7细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;经2ME2作用48h后MCF-7细胞表现出典型的凋亡形态特征;不同浓度2ME2作用于MCF-7细胞48小时后,随着药物浓度的增加细胞中HIF-1α、CXCR4、VEGF在mRNA及蛋白表达水平逐渐降低,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）。结论：2ME2可通过降低HIF-1α、CXCR4、VEGFmRNA及蛋白表达,抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及肿瘤血管生成和侵袭转移相关因子的表达。比较口服不同亲和力重组耻垢分支杆菌调节免疫的差异
摘要：目的：Th1与Th2的平衡紊乱是过敏性哮喘的免疫学基础,本研究通过给予小鼠口服免疫不同亲和力屋尘螨抗原Der p2重组耻垢分枝杆菌,来比较其调节免疫应答的差异。方法：1,分别给予6-8周BALB/c小鼠口服接种Mycobacterium Smegmatis（M.S）、pCW-Der p2-rM.S及pCW-Der p2-PEB1-rM.S,在末次免疫后第14、28、56天分别用夹心ELISA法测定小鼠血清及脾脏淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2及IL-4的含量。结果：夹心ELISA结果显示,无论是血清还是脾脏淋巴细胞培养上清中,各组IFN-γ、IL-2水平逐渐升高,IL-4水平逐渐降低,8周时更明显,pCW-Der p2-PEB1-rM.S组与M.S、pCW-Der p2-rM.S组相比有明显统计学差异。体外给予Der p2蛋白刺激后,pCW-Der p2-rM.S及pCW-Der p2-PEB1-rM.S组变化更加明显,而M.S组无明显变化。结论：小鼠口服免疫pCW-Der p2-PEB1-rM.S能明显提高Th1型免疫反应,与pCW-Der p2-rM.S组相比有统计学学差异。三种不同亲和力重组耻垢分枝杆菌经口服后均能诱导小鼠产生Th1型免疫应答,且pCW-Der p2-rM.S及pCW-Der p2-PEB1-rM.S诱导产生的Th1优势应答具有Der p2抗原特异性。本研究弥补了粘膜型疫苗低亲和力的不足,为新型口服疫苗的制备和改进创造了条件。纤维蛋白凝胶联合磷酸钙骨水泥复合物的生物学研究
摘要：目的：研究纤维蛋白凝胶联合磷酸钙骨水泥复合物的生物力学性能,为临床应用科学依据。方法：将磷酸钙骨水泥作为对照组,纤维蛋白凝胶和磷酸钙骨水泥作为复合支架材料研究组,利用细胞培养技术将两组材料分别与BMSC细胞系共同培养,动态观察细胞生长情况;结果：两种材料均有类似的细胞粘附、伸展。细胞在磷酸钙骨纤维蛋白凝胶复合材料上粘附比在磷酸钙材料上粘附多,细胞伸出较多丝样伪足与孔隙的边缘连接,数量大为增加,连接成片,相互拥挤,有大量基质形成。MTT结果有明显差异（P〈0.05）,与磷酸钙骨材料上的细胞ALP比较,磷酸钙骨/纤维蛋白凝胶复合材料ALP明显增高,差异显著,有统计学意义（P〈0.05）。结论：用全骨髓法分离培养的兔BMSCs体外扩增快,取材容易,在成骨诱导下能分化为成骨细胞,适合作为骨组织工程的种子细胞。且纤维蛋白凝胶联合磷酸钙骨水泥复合物具有良好的生物力学性能,具有良好的骨传导能力、力学特性,是很好的骨移植替代材料。肿瘤及创伤等疾患引起的骨缺损修复问题一直来都是骨科医生面临的一个难题,倍受医学界的关注。本论文研究用纤维蛋白凝胶联合磷酸钙骨水泥复合物的方法修复骨缺损,会成为一种全新的治疗模式,为骨缺损修复的临床治疗提供了理论科学依据。利用环介导恒温扩增法快速检测溶组织梭菌
摘要：目的：利用环介导恒温扩增技术（LAMP）,设计快速检测溶组织梭菌的方法,研究其反应特性,以期能应用于气性坏疽溶组织梭菌感染的临床现场检验。方法：通过基因比对与引物设计,设计针对溶组织梭菌的环介导恒温扩增检测方法。然后检测该方法对溶组织梭菌及其他干扰菌的扩增情况,对其特异性进行评价。检测该方法对不同浓度溶组织梭菌的扩增情况,对其灵敏度进行评价。最后与全自动细菌培养法进行比较,评价其与常规检测方法的可比性。结果：本LAMP检测方法只针对溶组织梭菌有扩增,对其他15种菌不扩增,显示出良好的特异性。对溶组织梭菌的最低检测限为1×101CFU/ml,显示其灵敏度较高。与全自动细菌培养法相比,有良好的可比性（P〈0.05）,很高的灵敏度（92.6%）、特异性（98.1%）及准确度（97.3%）。结论：本试验设计出了针对溶组织梭菌的LAMP检测方法,该LAMP检测方法具有良好的特异性较高的灵敏度,能够用于溶组织梭菌的临床现场检验。后肢远程缺血预处理对小鼠全脑缺血再灌注的保护作用及机理
摘要：目的：探讨肢端远程缺血预处理（limb remote ischemic preconditioning）对小鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：36只雄性C57小鼠,随机分为3组,即假手术组、对照组和LRPC预处理组,每组12只,假手术组分离双侧颈总动脉不结扎;对照组分离颈总动脉后结扎双侧颈总动脉,20 min后松线;LRPC组首先暴露双侧股动脉,然后结扎1 min,松开5 min,进行3个循环,最后结扎颈总动脉20min后松线。观察和比较各组小鼠海马神经元形态,MPO及炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-10含量的变化。结果：再灌注24 h后,LRPC可明显抑制神经元形态的改变（P〈0.05）,减少MPO、IL-1β和TNF-α含量,而增加抗炎因子IL-10的含量。结论：LRPC可显著减轻脑缺血再灌注损伤,可能与其降低海马组织TNF-α,IL-1β的含量,增加IL-10的含量有关。黄芪皂苷IV对LPS诱导大鼠心肌损伤的保护作用及机制
摘要：目的：研究黄芪皂苷IV对LPS诱导的大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法：心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶（LDH）的释放,肌酸激酶（CK）的含量被测量来判断心肌细胞损伤的程度。对超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的释放以及Sirt1的蛋白表达进行评估。结果：1,3和10μM黄芪皂苷IV可显著降低LPS诱导的心肌细胞LDH,CK和MDA的生成;黄芪皂苷IV可剂量依赖性地增加SOD的活性,减少TNF-α的释放。黄芪皂苷IV的干预可剂量依赖性的增加由LPS刺激而引起的乳鼠心肌细胞Sirt1蛋白的表达。结论：结果表明,黄芪皂苷IV可通过调控氧化应激和Sirt1-TNF-α途径有效发挥对LPS诱导大鼠心肌损伤的保护作用。非诺贝特对衰老大鼠肝脏组织肉毒碱棕榈酰转运酶Ⅰ水平的影响
摘要：目的：观察非诺贝特对衰老大鼠肝脏组织肉毒碱棕榈酰转运酶Ⅰ水平的影响,从而探讨衰老过程中出现脂质代谢异常的可能机制及非诺贝特对脂质代谢的调节作用。方法：雄性SD年轻大鼠（4～6周龄）16只和老年大鼠（24个月龄）16只,分别随机分为对照组和非诺贝特组（非诺贝特喂养2周）,测定大鼠血清中三酰甘油和总胆固醇水平,采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测大鼠肝脏组织肉毒碱棕榈酰转运酶Ⅰ水平。结果：年轻对照组比较,老年对照组的三酰甘油和总胆固醇水平升高,大鼠肝脏组织肉毒碱棕榈酰转运酶Ⅰ水平表达降低。非诺贝特组与老年对照组比较三酰甘油和总胆固醇水平均下降,非诺贝特升高不同年龄组大鼠肝脏组织肉毒碱棕榈酰转运酶Ⅰ水平。结论：衰老过程中大鼠肝脏组织肉毒碱棕榈酰转运酶Ⅰ水平表达减少可能与老年脂质代谢异常有关。电针预处理促进缺血再灌注后GSK-3β磷酸化诱导脑缺血耐受效应
摘要：目的：探索糖原合成激酶3β（GSK-3β）在电针预处理诱导的脑缺血再灌损伤保护中的作用。方法：60只雄性SD大鼠随机分成5组（n=12）：假手术（Sham）、大脑中动脉栓塞组（MCAO）、电针预处理组（EA）、电针预处理加LY294002组（EA＋LY）、电针预处理加溶剂组（vehicle）;通过梗死面积及Garcia评分评价脑损伤程度,通过Western Blot检测GSK-3β活性。结果：与MCAO组相比,EA组梗死容积减少,Garcia评分改善（P〈0.05）;与vehicle组相比,EA＋LY组梗死容积增加,Garcia评分降低（P〈0.05）;与MCAO组相比再灌注后2小时EA组GSK-3β磷酸化水平升高（P〈0.05）;与EA组相比EA＋LY组GSK-3β磷酸化水平降低（P〈0.05）。结论：电针预处理通过促进缺血再灌注后GSK-3β的磷酸化发挥脑保护作用。房间隔缺损闭合器组织相容性研究
摘要：目的：采用GB/T16175-1997和ISO10993-6：2007标准中植入后局部反应试验的结果判定方法,评价房间隔缺损闭合器植入体内后的组织相容性,探讨两种方法在组织相容性评价中的作用。方法：采用试验动物家兔皮下植入试验,将试验样品植入家兔背部皮下组织,分别于植入后1周、4周和12周后处死动物,取材,常规制片,HE染色,组织学观察采用炎症和纤维囊腔分级法及半定量记分法。结果：样品皮下植入后随着时间的延长,其周围组织的反应程度呈加重趋势。植入后12周,组织学反应未达到稳态。两种方法的组织学观察结果是一致的。结论：两种方法在组织学评价中均有其局限性,实际中可将两种方法结合来评价医疗器械的组织相容性,建议继续观察该样品植入后26周的局部反应,以减少临床使用的风险。PNH行allo-HSCT后并发毛细血管渗漏综合征和可逆性后部白质脑病综合征一例并文献复习
摘要：目的：探讨移植后并发毛细血管渗漏综合症（capillary leak syndrome,CLS）和可逆性后部白质脑病综合征（Posterior reversibleencephalopathy syndrome,PRES）的相关发病因素及治疗措施,并探索其与阵发性睡眠性血红蛋白尿（Paroxysmal NocturnalHemoglobinuria,PNH）的相关性及其防治措施。方法：本文报道一例PNH患者行非血缘供者外周血造血干细胞移植（allo-HSCT）后先后并发CLS和PRES患者的病历资料,并进行相关的文献复习。结果：患者确诊PNH,于我院行allo-HSCT后先后并发CLS和PRES,经积极治疗后好转。复习相关文献发现CLS和PRES均与内皮细胞损害相关,而PNH同样存在内皮损伤的基础病变,去纤苷、抗凝血酶Ⅲ和Eculizumab在类似疾病中有内皮细胞保护作用。结论：HSCT后先后并发CLS和PRES的病例临床非常少见,两者均与内皮细胞损伤相关。PNH本身存在内皮细胞损伤,是移植后易并发内皮细胞损伤相关并发症的原因之一。PNH行allo-HSCT预处理方案应避免选用高内皮细胞毒性方案,去纤苷、抗凝血酶Ⅲ和Eculizumab是行HSCT值得考虑内皮细胞保护剂。参训新战士胫骨疲劳骨折早期X线阴性诊断原因分析
摘要：目的：分析新训战士疲劳骨折早期X光片阴性诊断原因。方法：回顾分析近12年31例确诊前首次X光片报告阴性的胫骨疲劳骨折临床表现、影像学资料。结果：31例35张光片中6例X光片质量欠佳;19例局部有单纯软组织肿胀增厚影;4例侧位重叠不能识别胫骨被腓骨遮挡骨皮质;1例骨小梁显示局限性密度稍高;1例局部骨皮质稍变薄、边缘稍模糊、呈灰色骨皮质征;2例外骨皮质侧见轻微光滑均匀丘状隆起;6例行MR检查明确诊断为疲劳骨折。结论：在提高阅片水平前提下要注意X光片质量及体位重叠影响。当X光片只见局部软组织改变时,应重视并结合临床表现,有可能处于＂疲劳骨折前期＂,而诊断疑难或需鉴别时,MR是有用手段。胃大部切除后不同吻合术式对胃癌合并2型糖尿病患者血糖的影响
摘要：目的：探讨胃大部切除后不同吻合术式对胃癌合并2型糖尿病患者血糖的影响。方法：选择66例在本院行手术治疗的胃癌合并2型糖尿病的患者为研究对象,随机分为毕Ⅰ式组26例,毕Ⅱ式组24例,Roux-en-y组16例。检测和比较三组患者术前和术后随访3月时患者的OGTT空腹及负荷后血糖值、糖化血红蛋白等水平。结果：术前三组OGTT空腹血糖、2 h血糖、糖化血红蛋白水平、空腹胰岛素水平、稳态模型评估胰岛素抵抗（HOMA-IR）的比较均无统计学差异（P均〉0.05）。术后3月,与毕Ⅰ式组比较,毕Ⅱ式组与Roux-en-y组未达2型糖尿病诊断标准的患者百分率显著升高（X2=7.866,P=0.020）,OGTT空腹血糖（F=6.472,P=0.005）水平、OGTT 2 h血糖水平（F=3.431,P=0.041）、糖化血红蛋白水平（F=5.456,P=0.009）、空腹胰岛素水平（F=6.120,P=0.008）、HOMA-IR（F=8.091,P〈0.001）均显著降低。毕Ⅱ式组与Roux-en-y组之间以上指标比较均无统计学差异（P〉0.05）。结论：胃癌合并2型糖尿病的患者在消化道重建术后部分可得缓解,采用毕Ⅱ式或Roux-en-y吻合术可能更适宜胃癌合并2型糖尿病的患者。
