应用基因芯片技术研究原发性腹膜后脂肪肉瘤组织特异性候选基因
摘要:目的:原发性腹膜后脂肪肉瘤是一种少见的恶性肿瘤,发病率大约占全部恶性肿瘤的1%,但其却是腹膜后最常见的软组织肿瘤。通过研究原发性腹膜后脂肪肉瘤和正常脂肪组织间的基因表达差异,可以寻找到与原发性腹膜后脂肪肉瘤发生、发展相关的候选基因并为其防治研究提供线索。方法:应用基因芯片技术检测2例原发性腹膜后脂肪肉瘤和相应的正常脂肪组织全基因组序列,分析其基因表达差异。结果:两组间的差异表达基因3828个,其中表达上调有1837个基因,表达下调有1991个基因。其中涉及细胞增殖、黏附、凋亡以及信号通路等多种生物学过程。结论:通过基因表达谱芯片筛选出与原发性腹膜后脂肪肉瘤发生和进展密切相关的基因为其基础研究及临床早期诊断、预防和治疗提供潜在的分子标记和靶基因。S-Equol对高糖培养HepG2细胞胰岛素敏感性及IRS-1表达的影响
摘要:目的:研究S型雌马酚(S-Equol,S-Eq)对高糖培养HepG2人肝癌细胞株胰岛素敏感性和胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)-1表达的影响并探讨其可能的分子机制。方法:高糖培养HepG2细胞,1、10、100μM S-Eq处理细胞后,MTT法检测细胞活力,硫酸蒽酮比色法检测胰岛素刺激细胞糖原合成量,Realtime PCR和Western blot法分别检测IRS-1 mRNA及蛋白表达变化。结果:S-Eq对HepG2细胞活力无明显影响,但显著改善高糖培养条件下HepG2细胞胰岛素敏感性,其中10μM S-Eq+H组胰岛素刺激后细胞糖原合成量上升最为显著(P〈0.01),同时发现,S-Eq能显著上调IRS-1 mRNA和蛋白表达量。结论:S-Eq可能通过调控IRS-1的表达,增强高糖培养HepG2细胞胰岛素敏感性,这可能是S-Eq发挥其抗糖尿病作用的重要理论依据。大鼠放射性脊髓损伤后神经元数量变化规律
摘要:目的:临床放射治疗中,中枢神经系统是主要的剂量限制器官之一。随着放射治疗学的发展,放射性脊髓损伤的发病率明显增高,其主要病理学变化是血管损伤,伴白质坏死及脱髓鞘。但是对于放射性脊髓损伤后神经元的变化情况未见报道。本文主要阐明大鼠放射性脊髓损伤后180天的时间内,神经元数量的变化情况。方法:将60只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为未照射组和照射组,照射组采用60Co放射治疗机行30 Gy大鼠颈髓C2-T2单次照射,剂量率为153 cGy/min,源皮距为80 cm,照射时长为1153秒,照射范围为2.0×1.0 cm。未照射组大鼠于照射前灌注取材,照射组大鼠于照射后1、3、7、14、21、30、60、90、120、150、180天进行灌注取材,标本经石蜡包埋,切片后采用尼氏染色法染色,采用Image Pro-Plus(IPP)图像分析软件计量直径大于20μm的神经元数量。结果:正常神经元胞膜完整,胞浆内有清晰蓝染的尼氏体颗粒。大鼠放射性脊髓损伤后,神经元数量在照射后7天即有明显下降。随着时间的延长,神经元数量继续降低,照射后90天达到最低值。照射后180天,神经元数量有所恢复,但无法恢复至正常水平。结论:阐明了大鼠放射性脊髓损伤后神经元数量的变化规律,放射性脊髓损伤后可减少脊髓神经元数量,导致脊髓神经元变性、凋亡、坏死,最终导致脊髓运动功能不可逆性损伤,为临床上放射性脊髓损伤的预防提供理论依据。线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用
摘要:目的:探讨Mdivi-1对缺血再灌注损伤后大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)的保护作用。方法:分离培养大鼠CMECs,建立缺血再灌注(SI/R)模型,随机分为对照组、SI/R组、和SI/R+Mdivi-1组。采用MTT法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测CMECs凋亡率;western blot法检测各组细胞Drp1,Fis1水平;活性氧检测试剂盒测细胞ROS水平。结果:与对照组比较,SI/R组和SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显降低,凋亡明显增加,Drp1,Fis1表达增高,ROS水平明显升高,结果具有统计学意义(P〈0.05);与SI/R组比较,SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显增加,凋亡明显降低,ROS水平明显降低,结果具有统计学意义(P〈0.05),而Drp1,Fis1表达则无明显改变。结论:Mdivi-1可减轻CMECs的缺血再灌注损伤,这种保护作用可能是通过抗氧化应激来实现的。活体荧光成像对裸鼠肝癌细胞系MHCC97-H原位移植模型的动态量化分析
摘要:目的:利用生物自发光的裸鼠肝癌原位移植模型,以活体荧光成像技术对肝癌的生长和转移情况进行动态、量化分析。方法:将稳定转染了荧光素酶(luciferase)基因的人肝癌细胞株MHCC97-H-LUC细胞,移植至裸鼠肝脏包膜下,每周利用活体荧光成像系统对裸鼠体内移植瘤的生长部位和范围进行成像,测量肿瘤细胞生物发光量,动态观察肝癌细胞在裸鼠体内的肿瘤数量、生长速度和转移情况。结果:建立可稳定表达荧光素酶的人肝癌细胞株MHCC97-H-LUC并用于进行生物自发光的裸鼠原位移植模型;利用活体荧光成像系统对裸鼠体内的移植瘤成像,见发光部位由肝脏向腹腔扩散,发光量随时间呈指数级增长;病理学观察证实肿瘤细胞长。结论:利用活体荧光成像技术的动态量化分析可灵敏、准确地监测裸鼠肝癌原位移植模型中肿瘤细胞的生长及转移情况,为肿瘤发生、生长、转移机制及对抗肿瘤生长和转移的体内研究提供了科学的量化手段。TGF-β_1在应力介导的牙周膜成纤维细胞增殖中的作用及其机制
摘要:目的:探讨周期性张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)转化生长因子β(1TGF-β1)对其细胞增殖的作用,及对其I型胶原基因表达的作用和影响。方法:在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养力学刺激模型的基础上,利用多通道细胞牵张应力加载系统,对细胞分别施加2、6、12与24 h的周期性张应力,以不加力组为对照组,观察各组细胞形态变化,利用细胞计数试剂8检测细胞增殖活性,并利用ELISA试剂盒检测加力后各组TGF-β1的表达,并对加力12 h组加入TGF-β1抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测对I型胶原基因表达的影响。结果:与对照组比较,加力2 h细胞增殖稍降低,6 h增殖活性增强,12 h达到峰值,24 h增殖活性明显受到抑制;TGF-β1的表达与细胞增殖成正相关;TGF-β1受到抑制后细胞增殖受到影响,I型胶原的表达也受到影响。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖在一定时间的周期性张应力作用下先增加然后再抑制,其中TGF-β1参与细胞增殖,并且TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞I型胶原的表达起促进作用。利用ELISA与荧光定量PCR技术筛查新生儿巨细胞病毒感染水平及探讨与肝脏损害的相关性
摘要:目的:了解目前淄博地区新生儿感染巨细胞病毒(HCMV)的现状,找出最佳检测方法,提高诊断水平,并探讨巨细胞病毒对肝功能的损害。方法:采用抗体捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)及荧光定量PCR(qPCR)对2011年12月至2012年5月出生的2596例新生儿分别进行血清HCMV-IgM抗体和尿液HCMV-DNA定量检测,并对符合HCMV感染的阳性标本进行肝功能回顾性分析。结果:用ELISA检测血清CMV-IgM阳性29例(1.117%),用qPCR检测尿液HCMV-DNA阳性39例(1.502%),两种方法阳性符合率71.79%,差异有统计学意义(P〈0.01);共有40例阳性患儿回顾性分析肝功能指标血清总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)均高于正常值,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:淄博地区新生儿巨细胞病毒感染率较高,危害性大,对新生儿早期检测和诊断十分重要,定量荧光PCR法检测敏感性要高于ELISA法检测,具有良好的应用价值;检测出的HCMV感染患儿肝脏易受病毒侵害,造成肝功能损害。miRNA-125在肝癌中表达变化的研究
摘要:目的:探讨微小RNA(miRNA)-125在正常人和肝癌患者血清,以及肝癌患者正常肝脏组织和肝癌组织中的表达。方法:应用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-125,包括miRNA-125a、miRNA-125b在正常人和肝癌患者血清中的含量。同时收集并检测肝细胞癌患者术中取得的正常肝脏组织和癌症组织miRNA-125含量。结果:1)与正常人血清相比,miRNA-125在癌症患者血清中的含量没有明显变化。2)与正常肝脏组织相比,肝癌组织中miRNA-125含量明显下调,有统计学差异(P〈0.001)。结论:MiRNA-125,包括miRNA-125a和miRNA-125b在肝癌组织中表达显著减少,但是在肝癌患者血清并没有明显变化。低氧对大鼠右心室肥厚及心肌中缝隙连接蛋白43表达的影响
摘要:目的:研究低氧对大鼠右心室肥厚及心肌中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为正常组(control)、低氧3周组、低氧4周组和低氧5周组。除正常组外,其余3组大鼠分别在低氧环境中饲养3周、4周和5周。测定和比较各组大鼠的平均肺动脉压力(mPAP)、右心室收缩压(RVSP)、右心室肥厚度[RV/(LV+S)%],并通过免疫组化染色法观察各组大鼠左心室心肌细胞中cx43的表达。结果:与正常组相比,低氧3周、4周、5周组大鼠的mPAP、RVSP、右心室肥厚度均显著升高(P均〈0.05),与低氧3周组比较,低氧4周、5周组大鼠的mPAP、RVSP、右心室肥厚度均显著升高(P均〈0.05),而低氧5周组大鼠的mPAP、RVSP、右心室肥厚度均显著高于低氧4周(P均〈0.05)。免疫组织化学结果显示:低氧组大鼠Cx43排列紊乱,端-端连接减少,侧面连接增多;随着低氧时间的延长,大鼠心肌细胞中Cx43的表达逐渐减少,差异具有统计学意义(P均〈0.05)。结论:低氧可导致右心室肥厚,并随着诱导时间的延长而逐渐加重,这可能与心肌中Cx43的分布紊乱及表达减少有关。雌激素受体α基因多态性及其表达与子宫内膜增生的关系
摘要:目的:探讨子宫内膜增生症雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)基因多态性及其与表达的关系。方法:选择江西地区150例子宫内膜增生症患者为实验组,100例子宫内膜正常妇女为对照组。应用分子生物学的方法分析ERα基因XbaⅠ和PvuⅡ限制性片段长度多态性,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分析ERα表达。结果:(1)X等位基因频率的变化与子宫内膜增生程度具有相关性P〈0.01,不典型增生组中XX型频率是正常组的4倍。随着子宫内膜增生程度的增加,P等位基因频率减少,人群中PP基因型频率逐渐减少;(2)单纯性增生、复杂性增生ERαmRNA和蛋白表达均比正常组高(P〈0.01),而不典型增生ERαmRNA和蛋白质表达均比单纯增生、复杂增生低(P〈0.01)。结论:ERα基因多态性与子宫内膜增生发生及增生程度存在相关性。ERα表达的下调与子宫内膜不典型增生的发生有关。丁酸氯维地平静脉脂肪乳剂的质量评价
摘要:目的:通过对丁酸氯维地平静脉脂肪乳各指标进行检测,对所制备的丁酸氯维地平静脉脂肪乳的质量进行评价,确保制剂的稳定、安全、有效。方法:制备静脉脂肪乳剂,通过测定制剂含量、粒径、电位、pH值、过氧化值、游离脂肪酸值、甲氧基苯胺值等指标对制剂进行质量评价。结果:丁酸氯维地平的峰面积(Y)与浓度(X)在0.1~100μg.mL-1范围内具有良好线性关系,Y=51801X+17659,R2=0.9999(n=3),检测限为0.8ng,所制备的丁酸氯维地平静脉脂肪乳剂的平均含量为97.06%,平均粒径243.2±2.08nm,zeta电位-36.2±0.25,pH 7.03±0.11,过氧化值0.01 mL,游离脂肪酸值0.20±0.01,甲氧基苯胺值2.08±0.07,渗透压306±8.96 mOsmol.Kg-1。结论:所制备丁酸氯维地平脂肪乳的含量符合要求,标示含量在90.0%-110.0%的限度范围,渗透压及pH均与人体血液环境相接近,平均粒径小且分布集中,过氧化值、游离脂肪酸值及甲氧基苯胺值均较低,制备的乳剂性质稳定、重复性好,能够达到国外进口同种制剂的标准。二十二碳六烯酸增强MDA-MB-231细胞对5-FU敏感性的研究
摘要:目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对5-FU诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与凋亡的作用及对Wnt/β-Catenin信号传导通路的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT),测定DHA对5-FU诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;RT-PCR检测MDA-MB-231细胞β-catenin、GSK-3β基因的表达情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞β-catenin、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白的表达情况;细胞免疫组化染色观察DHA及DHA联合Licl对β-Catenin蛋白细胞内表达及定位的影响。结果:20μg/ml、40μg/ml的DHA分别与5-FU联合应用,可增强5-FU对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用。DHA(20μg/ml)能促进5-FU增强MDA-MB-231细胞G0/G1期阻滞作用、降低细胞增殖指数及诱导细胞的凋亡。DHA作用于MDA-MB-231细胞后,β-catenin基因及蛋白表达水平下降(P〈0.05)、GSK-3β的基因及蛋白表达水平无明显变化(P〉0.05),磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白表达水平下降(P〈0.05)。结论:DHA能增强5-FU对MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其通过抑制GSK-3β磷酸化来阻断Wnt/β-Catenin信号通路有关。人表皮细胞生长因子脂质体制备及促大鼠烫伤修复研究
摘要:目的:制备重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)脂质体,并考察其促大鼠烫伤创面愈合的作用。方法:采用pH梯度法制备rhEGF脂质体;超滤-离心法分离rhEGF脂质体混悬液中的游离rhEGF,ELISA法测定rhEGF含量,计算脂质体包封率;采用透射电镜观察脂质体的外观形态;采用纳米粒度及Zeta电位分析仪分别测定脂质体的粒径和Zeta电位;以大鼠烫伤模型观察给药后各试验组创面愈合过程中的形态、愈合时间和愈合率的变化。结果:制备的rhEGF脂质体包封率为57.7±1.1%;脂质体形状较为规则,呈完整圆球形或椭圆形的单室囊泡;脂质体粒度分布均匀,呈正态分布,平均粒径为63.7 nm;脂质体的Zeta电位为+9.2mV,带正电荷;rhEGF脂质体高、中剂量组能显著性促进大鼠烫伤创面愈合,使创面愈合时间明显提前,低剂量组促烫伤修复效应不明显。结论:pH梯度法制备的rhEGF脂质体包封率较高,rhEGF脂质体对大鼠烫伤创面的愈合有明显促进作用。活化星形胶质细胞NGF、IL-6表达的时间特性
摘要:目的:研究星形胶质细胞活化后神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的时间规律性,探讨星形胶质细胞活化后启动保护性机制与损伤性机制的时间特性。方法:体外分离培养星形胶质细胞,分为对照组、活化组、抑制组。通过光学显微镜及免疫荧光化学观察各组细胞的形态变化;应用半定量RT-PCR方法分析各组细胞间胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA及NGF mRNA、IL-6 mRNA表达变化;用ELISA法检测各组细胞上清液中不同时间点(6h,24h,48h,72h)NGF、IL-6的含量。结果:活化组与对照组比较,细胞胞体变大,GFAP荧光增强;RT-PCR示GFAP mRNA、NGF mRNA、IL-6 mRNA表达均明显增高,与对照组比较差异有显著性(P〈0.01);ELISA法检测示星形胶质细胞活化后NGF分泌量在活化后24小时达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P〈0.01);活化后48小时IL-6的含量达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P〈0.01);应用抑制剂Genistein干预后,与活化组相比,抑制组细胞胞体变小,星形胶质细胞活化被抑制,GFAP mRNA表达下降,NGF mRNA、IL-6 mMRA表达亦下降,与活化组比较差异有显著性(P〈0.01)。结论:星形胶质细胞活化后NGF、IL-6表达均上调,但NGF表达时间早于IL-6表达时间,表明在星形胶质细胞活化的早期,可能其神经保护作用占主导,而后期其神经毒性作用逐渐明显;Genistein能抑制星形胶质细胞活化,使NGF、IL-6表达下调。慢性髓性白血病患者非血缘供者骨髓移植术后并发甲状腺功能亢进1例并文献复习
摘要:目的:分析骨髓移植后引起甲状腺功能亢进的病因、临床特点、治疗及预后。方法:报道1例慢性髓性白血病患者非血缘供者骨髓移植术后并发甲状腺功能亢进随访9年的结果,并复习相关文献。结果:患者男性,21岁,确诊慢性髓性白血病后行非血缘供者骨髓移植,术后+44天,出现持续低热,抗细菌、抗病毒及抗真菌治疗均无效,排除疾病复发,查甲状腺功能提示患者从亚临床甲状腺功能亢进进展为甲状腺功能亢进,给予口服甲巯咪唑治疗2周,患者体温降至正常,血T4、fT4恢复正常,随访9年,慢性髓性白血病无复发,甲状腺功能持续正常。检索文献发现类似报道5例,对其进行归纳分析。结论:骨髓移植术后早期并发甲状腺功能亢进,可能与放化疗预处理及免疫损伤引起的破坏性甲状腺炎相关,有其独特的临床表现,极易被忽视,治疗方面可以尝试应用糖皮质激素及抗甲状腺药物。对于非血缘供者骨髓移植后不明原因发热者,应考虑到甲亢可能。血管内栓塞治疗已破裂后交通动脉瘤的临床研究
摘要:目的:探讨已破裂后交通动脉瘤的血管内栓塞介入治疗的临床疗效。方法:对73例血管内介入栓塞治疗已破裂后交通动脉瘤患者资料回顾分析,观察临床治疗效果。结果:所有患者均成功栓塞,获100%栓塞35个(47.9%),95%栓塞24个(32.9%),90%栓塞13个(17.8%),80%栓塞1个(1.4%),发生并发症6例(8.2%),术后随访未见复发病例(0.0%)。结论:已破裂后交通动脉的血管内介入栓塞治疗是一种微创、安全、有效的方法。异丙酚麻醉对肝叶切除术患者肝功能与炎症细胞因子的影响
摘要:目的:探讨异丙酚对肝叶切除术患者肝功能与炎症因子水平的影响。方法:选择79例在我院接受肝叶切除的患者为研究对象并随机分为对照组和实验组,对照组予常规麻醉,实验组在对照组基础上加用异丙酚,比较两组患者肝功能与炎症因子的变化。结果:肝门阻断末,两组患者的血清ALT、AST、IL-1、IL-10、TNF-α水平均较肝门阻断前明显增加,实验组患者ALT、AST、IL-1及TNF-α水平均较对照组显著降低(P〈0.05),IL-10水平较对照组显著升高(P〈0.05)。术后第4天,两组患者的血清ALT、AST、IL-1、IL-10、TNF-α水平比较均无显著差异(P〉0.05),与肝门阻断前比较亦无显著差异(P〉0.05)。结论:异丙酚应用于肝叶切除术可有效减轻肝功能的损害,抑制促炎细胞因子的释放,促进抗炎细胞因子的生成,这可能是其保护肝功能的机制之一。甲状腺激素水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病的回顾性研究
摘要:目的:观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,coronary heart disease,CHD)患者甲状腺激素水平的变化规律。方法:选取2010年至2011年在我院住院患者共299例,入选标准:年龄30岁~80岁之间;心功能I-II级;入选前未接受甲状腺激素及胺碘酮治疗。根据冠状动脉造影结果分为:对照组91例,实验组208例,实验组根据血管病变数量再分为单支血管病变组72例,双支血管病变组87例,及三支血管病变组49例,用放射免疫方法于造影前检测甲状腺激素水平,比较各组间FT3、FT4、TT3、TT4及TSH水平。结果:与对照组相比,实验组血清FT3水平下降,差异有显著统计学意义(P〈0.05);其中三支血管病变组患者血浆FT3水平显著低于双支血管病变组,双支血管病变组患者血浆FT3水平显著低于单支血管病变组,差异均有统计学意义(P〈0.05);各组间血清TT4、TT3、FT4、TSH水平比较无统计学差异(P〉0.05)。结论:冠心病患者FT3呈低水平状态,且随着血管病变加重FT3下降越明显,检查甲状腺激素水平具有重要临床意义。