Vero细胞在不同微载体固定化培养中的生长和代谢
摘要：目的：比较Vero细胞在不同的商品化微载体中固定化培养的生长和代谢。方法：以Vero细胞在含1%新生牛血清的DMEM/F12中培养的细胞形态、活细胞密度和细胞活力为指标,考察Vero细胞在2D MicroHex、Biosilon、Cytodex1和Cytopore1微载体固定化培养的细胞生长;以葡萄糖比消耗速率（qglc）、乳酸比生产速率（qlac）、谷氨酰胺比消耗速率（qgln）和谷氨酸比生产速率（qglu）为指标,考察Vero细胞在不同微载体固定化培养的细胞代谢。结果：Vero细胞在2DMicroHex、Biosilon、Cytodex1和Cytopore1微载体固定化培养7d的活细胞密度分别为18.4×105cells/ml、21.9×105cells/ml、23.9×105cells/ml和16.2×105cells/ml,生长在Cytodex1表面的Vero细胞分布均匀、形态清晰;Vero细胞在不同微载体固定化培养的代谢指标基本相同。结论：Vero细胞在Cytodex1微载体固定化培养的效果优于其它商品化微载体,可作为目前用于病毒疫苗生产的Vero细胞固定化培养的首选微载体。丹参多酚酸盐对斑马鱼胚胎血管新生的影响及分子机制初步研究
摘要：目的：研究丹参多酚酸盐对斑马鱼发育过程中血管新生的影响,并初步探讨其机制。方法：取血管内皮具有绿色荧光蛋白标记的转基因斑马鱼卵后,胚胎分别给0.5%二甲基亚砜（DMSO,对照组）、丹参多酚酸盐（1mg/ml,实验组）处理24h,观察斑马鱼血管发育的变化并记录节间血管长度。定量RT-PCR检测前述药物处理后4、12和24h的斑马鱼胚胎中血管内皮生长因子（VEGF）的表达变化。结果：与对照组相比,使用丹参多酚酸盐药物处理后明显促进斑马鱼节间血管发育,其长度差别具有统计学意义（[79.67±2.96）umvs（61.11±2.56）um,n=10,P〈0.01）]。实验组较对照组VEGFmRNA表达量升高,在药物作用12h和24h时差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：丹参多酚酸盐可促进斑马鱼血管新生,可能与通过上调VEGF的表达有关。RA滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定
摘要：目的：改良体外分离、培养类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的方法,并进行鉴定。方法：取关节镜手术中获得RA患者滑膜组织进行机械分离、胶原酶消化后直接将所有消化产物置于细胞培养皿两次贴壁培养,差速消化法纯化成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态、流式细胞术及免疫细胞化学的方法鉴定细胞纯度。结果：胶原酶消化后直接贴壁结合差速消化纯化法分离获得的原代滑膜细胞中呈梭形的成纤维样细胞占98%以上,细胞核呈椭圆形位于细胞中央,偶见少量圆形的滑膜巨噬细胞。流式细胞术显示98%以上的滑膜细胞具有vimeintin＋CD68的成纤维细胞特征。免疫细胞化学提示滑膜细胞vimentin表达阳性、CD68不表达。结论：成功分离获得了纯度和活性很高的人滑膜成纤维样细胞,方法更简便,效率更高,为后续类风湿性关节炎滑膜侵袭机制的研究奠定了基础。HPV基因分型检测在宫颈癌筛查中的应用
摘要：目的：探讨人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）基因分型技术在宫颈癌筛查中的临床应用价值。方法：采用反向斑点杂交法对HPV基因型进行分析,包括低危型（如6、11、42、43、44型等）和高危型（如16、18、31、33、35、MM4型等）共23个型别。结果：98例样本中检出HPV阳性者38例,23种基因型中共检出15种HPV型别,HPV总感染率38.8%（38/98）。慢性宫颈炎患者中HPV感染率30.4%（14/46）,检测到的HPV亚型主要是HPV43,11,6,42,31和51（其中HPV6,42,31,51检出率一致）。CINI患者HPV感染率15.4%（4/26）,最常见的HPV亚型为HPV35,其次为HPV16,52,53和59（其中16,52,53,59检出率一致）。CINⅡ患者HPV感染率71.4%（10/14）,以HPV16,6,11,51等亚型最常见。CINⅢ患者HPV感染率75%（6/8）,HPV亚型以HPV16,18,31,53为主。SCC患者HPV阳性率为100%（4/4）,HPV16检测率最高,其次为HPV52,18,33,58,59和66。结论：持续的HPV感染与宫颈疾病有着密切的关系。HPV基因型的检测为临床进行宫颈疾病的筛查、诊断、治疗以及预后观察提供了较大的帮助。血管扩张刺激磷蛋白磷酸化157位点突变的慢病毒载体的构建与鉴定
摘要：目的：构建含血管扩张刺激磷蛋白（VASP）磷酸化位点157突变成丙氨酸的慢病毒载体（L-S157A）并转染SGC-7901细胞。方法：针对VASP157位点的引物,利用重叠PCR的方法定点突变该位点从丝氨酸至丙氨酸,重组入慢病毒载体,包装病毒后感染SGC7901细胞,并利用测序和westernblot方法对突变进行验证。结果：VASP磷酸化157位点突变成丙氨酸,并且转导入293T和SGC-7901细胞,L-S157A明显下调SGC-7901细胞中p-VASPS157的表达。结论：成功地构建了针对VASP蛋白丝氨酸157位点的突变的表达载体,并获得了稳定表达该突变体的SGC-7901细胞株。为进一步研究VASP及其磷酸化在胃癌中的功能奠定了基础。尼莫地平联合益脑脉胶囊在高血压性脑出血中的应用研究
摘要：目的：探讨尼莫地平联合益脑脉胶囊治疗高血压性脑出血的疗效。方法：选取2010年1月～2012年5月我院收治的高血压性脑出血患者共78例,随机分为实验组和对照组,每组各39例,其中对照组患者采用甘露醇、胞二磷胆碱与抗氧化剂等常规治疗及尼莫地平静注治疗,1次/天,连续14天,而实验组患者在此基础上加用益脑脉胶囊口服或胃管注入,3次/天,连续28天。分析和比较治疗前及治疗后30天两组患者卒中量表（NIHSS）评分、脑卒中专门生活质量评分表（QLI）评分及临床疗效。结果：治疗后实验组的NIHSS评分明显低于治疗后对照组（P〈0.05）,治疗后实验组的QLI评分明显高于治疗后对照组,治疗后实验组患者的总有效率明显优于对照组患者（89.74%VS69.23%）。结论：尼莫地平联合益脑脉胶囊治疗高血压性脑出血,可促进病人的神经功能恢复,增加临床疗效,提高生活质量,且安全可靠,值得临床上推广应用。CREG活化ILK/VEGF促进内皮细胞血管新生
摘要：目的：探讨E1A激活基因阻遏子（Cellular repressor of E1A-stimulated gene,CREG）对血管内皮细胞血管新生的影响及其机制。方法：将重组腺病毒CREG载体（Ad-GFP-CREG）和腺病毒GFP载体（Ad-GFP）转染人血管内皮细胞株（vascularendothelialcell,VE）,转染后细胞分别命名为ADCREG和ADGFP。内皮细胞基质胶血管形成实验观察其比较3组细胞血管发生情况。应用Western blotting测定细胞中CREG、整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）的表达。应用ILK激酶活性突变的质粒转染和不同浓度的VEGF中和抗体转染VE后进行细胞血管形成能力检测。结果：体内基质胶血管形成实验显示,腺病毒介导的CREG过表达显著促进VE的血管形成能力,血管密度、数量和交叉点均较对照组ADGFP和VE显著增多（P〈0.01）。同时,Westernblot分析证实CREG过表达显著增加了ILK与VEGF的表达;转染ILK激酶失活质粒导致ADCREG成血管能力显著减弱（P〈0.001）。应用VEGF中和抗体干预后,ADCREG细胞的成血管能力也呈现剂量依赖性下降。并且ILK激酶活性受到抑制的ADCREG细胞中VEGF表达降低。结论：CREG基因过表达通过活化ILK/VEGF信号通路促进了内皮细胞血管新生。阿托伐他汀对甲状旁腺素致心肌肥大的保护作用
摘要：目的：观察阿托伐他汀对大鼠甲状旁腺素1-34（rPTH1-34）诱导的新生大鼠心室肌细胞肥大的抑制作用及丝裂素活化蛋白激酶激酶1/细胞外信号调节激酶1/2（MKK1/ERK1/2）表达的变化,分析阿托伐他汀抑制心肌肥大的可能机制。方法：以原代培养的新生Wsitar大鼠心室肌细胞为研究对象,3H-亮氨酸掺入率检测细胞蛋白合成速率,BCA法测定单个细胞蛋白含量,RT-PCR检测心房利钠尿肽mRNA（ANPmRNA）的表达,Western blot方法测定p-MKK1、p-ERK1/2蛋白的表达。结果：1.10-7mmol/LrPTH1-34孵育24h可增加体外培养的心肌细胞蛋白合成速率和ANPmRNA表达,使p-MKK1及p-ERK1/2蛋白表达升高（P〈0.05）。2.10-5mmol/L阿托伐他汀能抑制心肌细胞蛋白合成速率及单细胞蛋白含量的增加（P〈0.05）,且对正常心肌细胞没有影响（P〉0.05）。3.10-5mmol/L阿托伐他汀能抑制p-MKK1、p-ERK1/2的表达（P〈0.05）。结论：阿托伐他汀能抑制PTH诱导的心肌细胞肥大的发生,可能与抑制MKK1/ERK1/2的活性有关。胶体金免疫层析法视黄醇结合蛋白检测试剂对肾小管功能损伤的诊断价值评价
摘要：目的：对胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白（RBP）检测试剂诊断肾小管损伤的价值进行评价。方法：选择上海柏纳生物技术有限公司生产的视黄醇结合蛋白检测试剂盒（胶体金免疫层析法）与上海太阳生物技术有限公司生产的RBP含量测定试剂盒（酶联免疫法）进行对比试验,分别对临床选取的病例组和对照组的尿液样本进行检测。参考临床单位诊断标准,酶联免疫法结果浓度≥300ng/mL为阳性,〈300ng/mL为阴性;胶体金免疫层析法检测结果检测线显色为阳性,不显色为阴性。对两组检验结果进行Kappa一致性检验,分析两种检测方法诊断结果的一致性,同时以临床通用诊断方法为参考,计算胶体金免疫层析法诊断肾小管功能损伤的灵敏度和特异度。结果：两种检测方法的诊断结果一致性良好（市一医院：K=0.9070,95%CI：0.8277～0.9863,P〈0.01;市六医院：K=0.9391,95%CI：0.8714～1.000,P〈0.01）。胶体金方法诊断肾小管损伤的灵敏度和特异度,市一医院：灵敏度=100%,精确95%CI为：92.45%～100.00%;特异度=91.80%,精确95%CI为：81.90%～97.28%;市六医院：灵敏度=100%,精确95%CI为：91.40%～100.00%;特异度=95.00%,精确95%CI为：86.08%～98.96%。结论：胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白检测试剂与已批准上市的试剂等效,对肾小管功能损伤的诊断具有重大应用价值。EGCG经Wnt1-β-catenin通路抑制NP69-LMP1细胞的增殖
摘要：目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate,EGCG）体外抑制潜伏性膜蛋白1转化鼻咽上皮细胞NP69（NP69-LMP1）增殖的机制。方法：采用MTT法检测EGCG抑制NP69-LMP1细胞增殖的IC50值;选用细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察EGCG抑制NP69-LMP1细胞增殖的作用;采用Western-blot检测Wnt1、β-catenin的表达及磷酸化。结果：EGCG抑制NP69-LMP1细胞增殖的IC50值为47.7mg.L-1;EGCG对NP69-LMP1细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性（n=3,P〈0.05）。EGCG呈浓度依赖性抑制Wnt1和β-catenin蛋白的表达,促进β-catenin蛋白的磷酸化。结论：EGCG通过降低Wnt1和β-catenin蛋白表达,增加β-catenin蛋白磷酸化水平,发挥对NP69-LMP1细胞增殖的抑制作用。丙氨酸转氨酶对FibroScan诊断肝硬度准确性的影响
摘要：目的：探讨不同血清丙氨酸转氨酶（ALT）浓度对于Fibroscan诊断肝纤维化期和肝硬化期的肝硬度准确性的影响。方法：根据血清ALT浓度分为三组：A组ALT姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响
摘要：目的：观察姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法：采用不同浓度的姜黄素、顺铂和姜黄素联合顺铂处理人骨肉瘤细胞MG-63不同时间,通过MTT法检测其对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测其对MG-63细胞凋亡的影响。结果：单用姜黄素或顺铂均可以时间和浓度依赖性方式抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖。与空白对照组相比,单用10μmol/L姜黄素和2、4μmol/L顺铂可抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率（P〈0.05）;而与姜黄素和顺铂单用处理相比,10μmol/L姜黄素分别与2、4μmol/L顺铂联合应用,可更显著抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率（P〈0.01）。结论：姜黄素联合顺铂与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63细胞的增值,促进其凋亡,两药对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同性。甲泼尼龙对百草枯中毒大鼠肾脏损伤的保护作用
摘要：目的：探讨甲泼尼龙对百草枯（PQ）中毒大鼠肾脏损伤的保护作用。方法：30只健康SD大鼠随机分为对照组、PQ模型组及甲泼尼龙治疗组,每组10只。各组在第1、3、7d分别舌下静脉采血,检测血清肌酐（Cr）和血尿素氮（BUN）水平,第7天分离各组大鼠肾组织行HE染色后,比较各组大鼠肾脏的组织形态学差异,免疫组织化学SABC法染色观察和比较各组大鼠肾脏巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的表达情况。结果：（1）与对照组相比,模型组第1、3、7天血清中Cr和BUN的水平均显著升高（P〈0.05）;与模型组相比,治疗组第3和7d血清中Cr和BUN水平均显著降低（P〈0.05）;（2）与对照组相比,模型组大鼠肾脏病理改变有充血水肿、炎症细胞浸润、变性坏死及结构紊乱等;与模型组比较,治疗组的病变明显减轻;（3）与对照组相比,模型组肾组织中MIF的阳性表达细胞数显著增加（P〈0.05）;与模型组相比,治疗组肾组织中MIF的阳性表达细胞数显著减少（P〈0.05）。结论：甲泼尼龙可能通过减少MIF表达减轻百草枯对大鼠肾脏的损伤。低分子量肝素对慢性阻塞性肺疾病大鼠的肺功能及气道炎性细胞的影响
摘要：目的：观察低分子量肝素（low molecular weight heparin,LMWH）对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）大鼠肺功能及气道炎性细胞的影响。方法：将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组、LMWH干预组,每组10只。采用熏吸香烟法加气管内注入脂多糖的方法建立COPD模型,LMWH干预组于COPD模型开始建立时皮下注射150U/kg,每天一次,40天后检测各组大鼠肺功能及气道内炎性细胞的改变。结果：COPD模型组大鼠气道阻力及气道炎性细胞数均较正常组明显升高（P〈0.05）,以中性粒细胞为主;而皮下注射低分子量肝素治疗组气道阻力及气道炎性细胞数较COPD模型组均明显下降（P〈0.05）。结论：低分子肝素可以减少COPD大鼠气道内炎性细胞数,降低气道阻力,有助于COPD病情的控制和转归。金樱子提取液体外抗氧化作用研究
摘要：目的：探讨金樱子（Rosa Laevigata Mickx.,RLM）提取液的体外抗氧化活性,以更好的评估金樱子的作用。方法：通过体外实验研究金樱子提取液对羟自由基（-OH）、超氧阴离子（O2-）的清除作用;研究金樱子水提取液对正常大鼠肝、肾组织匀浆脂质过氧化产物丙二醛（Malondialdehyde,MDA）生成的影响以及金樱子水提取液对过氧化氢（H2O2）诱导的红细胞氧化溶血的保护作用。结果：金樱子提取液清除-OH及O2-作用呈现出明显的剂量依赖性,可显著抑制大鼠离体肝、肾组织中MDA的生成,还可以明显抑制H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血。结论：金樱子提取液体外具有明显的抗氧化活性。NM-23、COX-2在胃腺癌FOLFOX新辅助化疗前后表达变化及其临床意义
摘要：目的：研究NM-23,COX-2在胃癌FOLFOX方案新辅助化疗前后的变化,探讨其作为新辅助化疗预测因子的可能性。方法：对95例局限进展期胃癌患者行FOLFOX-4方案新辅助化疗。新辅助化疗应用4个周期,共有85例患者完成新辅助化疗并接受了根治性或姑息性手术。免疫组织化学染色检测NM-23、COX-2的表达情况,并对比术前活检组织与术后切除标本中两种蛋白表达变化。结果：本组病例观察临床缓解率58.2%,疾病控制率90.1%。术前活检组织中NM-23阳性表达及COX-2阴性表达与化疗显效有关。新辅助化疗及术后,NM-23表达上升,COX-2表达下降。临床缓解组病例NM-23上升及COX-2下降均较临床未缓解病例显著（P〈0.05）。结论：对FOLFOX新辅助化疗方案敏感的胃癌病例具有NM-23高表达、COX-2低表达的特点。此外,NM-23表达上调及COX-2表达降低可能与化疗显效有关。NM-23、COX-2可能作为新辅助化疗敏感人群的筛选指标和疗效判定指标。阿托伐他汀对冠心病患者内皮祖细胞中microRNA-221/222水平的影响
摘要：目的：观察冠心病患者内皮祖细胞中microRNA-221/222表达情况,探讨阿托伐他汀对其表达的影响。方法：本研究入选20例稳定型冠心病患者作为治疗组以及20例条件齐同的非冠心病患者作为对照组,治疗组予阿托伐他汀（20mg/d）治疗6个月,实验前及阿托伐他汀治疗6个月后分别采集外周血提取内皮祖细胞行体外培养,应用RT-PCR检测内皮祖细胞中microRNA-221/222水平。结果：冠心病组患者microRNA-221/222表达水平明显高于非冠心组病患者,冠心病组患者microRNA-221/222表达水平与内皮祖细胞的数量呈负相关,经阿托伐他汀干预6个月后,冠心病组患者内皮祖细胞的数量较基线时明显增加,而microRNA-221/222水平显著降低。结论：阿托伐他汀可增加冠心病患者内皮祖细胞的数量以及降低冠心病患者内皮祖细胞中microRNA-221/222水平。促红细胞生成素和受体在前列腺癌组织中共同过表达的研究
摘要：目的：探讨促红细胞生成素（EPO）和受体（EPOR）在前列腺癌（PCa）组织中的表达,并进一步阐述EPO和EPOR在前列腺癌发生发展中所起的作用。方法：应用免疫组化SP法检测30例前列腺癌根治术组织标本中癌与增生（BPH）组织的EPO和EPOR表达及30例正常前列腺组织（NP）中的EPO和EPOR表达。前列腺癌分级采用Gleason评分。半定量EPO和EPOR评分分析免疫组化结果。同时根据细胞染色强度区分为过表达和正常表达。统计学分析采用配对样本比较Wilcoxon的秩和检验及线形回归分析。结果：大部分前列腺癌均可见EPO和EPOR同时过表达,但是前列腺增生组织只有EPO过表达;正常前列腺组织没有EPO和EPOR过表达。前列腺癌和良性前列腺增生的EPO免疫组化评分中位数为2.38和0.93（P〈0.01）;前列腺癌和良性前列腺增生的EPOR免疫组化评分中位数为2.50和0.68（P〈0.01）。前列腺增生和前列腺癌的EPO和EPOR表达密切相关,但是前列腺癌的Gleason评分和EPO以及EPOR评分没有相关性（P值均〉0.05）。结论：EPO和EPOR同时过表达促进前列腺癌发生发展,但是相对于EPO的过表达,EPOR过表达是前列腺癌发生更为重要的早期事件;前列腺癌组织中EPO和EPOR表达差异,提示除了缺氧外,可能还有其它机制参与EPOR的过表达。
