氧化应激对Hsp90α、ARF1细胞内定位和相互作用的影响
摘要：目的：探讨氧化应激对热休克蛋白90α（Hsp90α）与ADP-核糖基化因子1（ARF1）细胞内定位、相互作用的影响。方法：应用500μM H2O2处理HepG2细胞,建立氧化应激模型,MTT比色法检测细胞活力,Western blotting检测Hsp90α和ARF1水平,细胞免疫荧光法、免疫共沉淀检测上述蛋白在氧化应激下的分布、共定位变化和相互作用。结果：MTT比色法结果提示,随氧化应激时间延长,细胞存活力降低;Western blotting结果显示,氧化应激可提高胞内Hsp90α和ARF1蛋白水平;免疫共沉淀结果显示,随氧化应激作用时间延长,Hsp90α与ARF1相互结合增多;细胞免疫荧光结果显示,随氧化应激作用时间延长,Hsp90α与ARF1荧光强度增强,并趋于沿胞膜分布。结论：提示氧化应激影响Hsp90α和ARF1的水平、胞内分布及相互作用。miR-30b的组织特异性研究
摘要：目的：研究miR-30b的组织特异性,检测其在心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中的表达情况。方法：选取C57BL/6J雄性小鼠6只,用real-time PCR方法检测小鼠心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中miR-30b的表达量。结果：miR-30b在小鼠肝脏中表达量最低,与肝相比,在心,脑,肾,脾和骨骼肌中的相对表达量分别为13.13±0.899,9.497±0.717,4.478±1.031,6.751±0.596,2.538±0.79。且与肝相比均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：miR-30b在各组织中的表达存在差异,在心脏中的表达量最高,提示miR-30b可能与心脏的发生发展密切相关,为深入探索miR-30b的功能奠定了基础。两种不同诱导液对人牙周膜干细胞膜片性能的影响
摘要：目的：对比分析发育期根端复合体（Dental Apical Complex,DAC）诱导液和成骨诱导液对人牙周膜干细胞（Periodontal ligam-ent Stem Cells,PDLSCs）膜片形成和分化能力的影响。方法：收集临床十名12-16岁的青少年因正畸需要拔除的健康、无龋的新鲜牙（前磨牙）,刮取根面残留牙周膜进行牙周膜干细胞的分离培养,制备成牙周膜干细胞膜片,分别采用DAC诱导液和成骨诱导液对膜片进行诱导,对比分析两种诱导液对牙周膜干细胞膜片的影响。结果：DAC诱导液处理过的PDLSCs细胞膜片,细胞形态接近牙源性间充质细胞,DAC诱导液提供了良好的成牙骨质-牙周样结构诱导环境,可促进PDLSCs膜片向功能性成牙骨质细胞谱系分化,而成骨诱导液提供了良好的成骨诱导环境,可促进PDLSCs膜片向功能性成骨细胞谱系分化。结论：DAC诱导液较之于成骨诱导液更利于PDLSCs细胞膜片的成牙周样分化,利于牙周缺损修复和局部再生。《分子影像学》第二版已正式出版发行
摘要：由哈尔滨医科大学附属第四医院申宝忠教授主编的《分子影像学》第二版（ISBN：978-7-117-13344-9/R.13345）一书已于2010年9月14日由人民卫生出版社出版发行。《分子影像学》是国内第一部分子影像学大型专著。对于分子影像学的基本概念、基本原理、基本方法和应用概况都有精彩而详细的论述,FLT4基因在斑马鱼早期发育过程中的表达
摘要：目的：研究FLT4（VEGFR3）基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。方法：提取斑马鱼胚胎的总RNA,制备地高辛标记的FLT4RNA反义探针,WISH（整胚胎原位杂交）研究FLT4在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果：成功合成FLT4基因探针,获得FLT4基因在斑马鱼早期发育过程中的表达情况：FlT4在2-cell、32-cell、oblong、shield期前普遍性表达（0.75h、1.7h、3.7h、6h）;24h在头部表达较多,特别是在ICM（intermediate cell mass,中间细胞群）区处有特异性表达;48h、72h在头部表达均较高表达。结论：FLT4在早期参与了血管的形成和造血的发生,在脑部和肾小管的发育中可能起到了重要作用。用于人工韧带的聚对苯二甲酸乙二醇酯支架材料的编织和力学性能分析
摘要：目的：通过对聚对苯二甲酸乙二醇酯（Polyethylene terephthalate,PET）材料的编织和力学性能的分析,初步探讨使用该材料构建组织工程韧带支架的可行性。方法：将不同强度的PET单纤维通过经编法编织成支架材料;然后使用电子拉力机对编织好的支架材料以及消毒处理后的支架材料进行力学性能测试并进行分析。结果：PET编织构建的支架材料结构稳定,其极限抗张强度已达到了前交叉韧带的力学要求。辐照消毒对支架材料的力学性能无短期影响。结论：该支架材料编织结构设计合理,具有优良的力学性能,消毒后对其力学性能无短期影响,有望通过改进生物学性能后成为一种较理想的组织工程前交叉韧带支架材料。铜绿假单胞菌家兔肺部感染模型的建立与评价
摘要：目的：建立铜绿假单胞菌（PA,又名绿脓杆菌）肺部感染动物模型,并从病理学及细菌学、影像学等方面进行评价,研究铜绿假单胞菌对肺组织的致病作用。方法：24只健康清洁级新西兰大白兔随机分成2组,实验组采用经皮气管穿刺法,隔日注入铜绿假单胞菌反复感染家兔,对照组施以生理盐水。接种后隔日一次行胸部CT扫描。比较二组家兔的体温、血象及肺组织匀浆菌落计数;观察病理组织改变及胸部CT影像学变化。结果：注菌组家兔白细胞总数显著升高,肺组织匀浆菌落计数显著高于对照组。CT表现为双侧多发斑片状模糊影,部分可见实变及脓肿灶。大体标本可见家兔肺部结节、脓肿及出血灶,病理学镜下观察发现注菌组家兔肺组织内多个脓肿灶形成,大量中性粒细胞浸润,肺泡腔内大量渗出,部分出血,肺泡壁充血及肺水肿。随着注菌次数增多及时间推移,逐渐出现如肺泡间隔增厚、肉芽肿形成、实变等慢性肺部炎症的病理表现。结论：使用经皮气道穿刺法接种铜绿假单胞菌至新西兰兔肺部,可成功建立兔铜绿假单胞菌肺部感染模型。苍白球电毁损对帕金森病大鼠HVSs振荡波的影响研究
摘要：目的：应用直流电核团毁损术毁损帕金森病（PD）大鼠模型的内侧苍白球（GPi）,记录其手术前后脑电生理活动的变化,以探讨内苍白球射频毁损术治疗PD的可能机制。方法：成年SD大鼠随机分为GP毁损组、假手术组及正常组。对PD毁损组和假手术组大鼠采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）右侧黑质致密部（SNc）、中脑腹侧被盖区（VTA）两点注射法建立PD大鼠模型,并经腹腔注射阿扑吗啡（APO）诱发旋转以对模型建立进行评价。通过多导联宏电极在体脑电生理记录技术对各组大鼠进行右侧（注射侧）大脑皮层M1、M2区脑电及纹状体场电位的连续24小时记录,同时进行视频录像。对GP毁损组大鼠行直流电GPi毁损术,术后4天对各组大鼠均行阿扑吗啡诱导旋转行为检验,继续记录脑电活动,记录数据经频率谱分析及相干分析以揭示各记录位点信号的频率成分以及不同位点神经元集群间的功能连接和同步性。结果：对GP毁损组大鼠毁损术前后在清醒静息状态下的皮层脑电和纹状体场电位有明显改变,术后HVSs（High Voltage Spindles）在持续时间上明显缩短发作次数明显减少;对各组大鼠术后在静息状态下的脑电信号进行对比,GP毁损组大鼠较假手术组的HVSs持续时间和发作频率均减少并接近正常组大鼠水平,相干性分析显示GP毁损组大鼠术后在HVSs频段（5-13Hz）上的相干程度显著小于假手术组。结论：在清醒静息状态下6-OHDA建立的PD大鼠皮层-基底节环路上HVSs持续时间延长发生频率增高,经GP毁损术后其时间缩短发作次数减少同步性降低并接近正常水平,从而改善PD症状,该现象可能解释临床采用苍白球射频毁损术治疗PD的治疗机制。RPAP3蛋白中TPR结构域的功能研究
摘要：目的：构建针对RPAP3 TPR区域的慢病毒载体,观察过表达对细胞周期的影响。方法：通过生物信息学软件比较RPAP3结构域组成,推测功能;分析RPAP3核定位信号,构建瞬时表达质粒pEGFP-N2-RPAP3,激光共聚焦显微镜观察RPAP3蛋白的亚细胞定位;通过酵母双杂交和GST-Pulldown实验研究RPAP3与HSP70的相互作用及作用靶点;构建慢病毒载体pLJM.1-RPAP3,转染293T细胞,收病毒感染MCF7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞系,流式细胞分析对细胞周期的影响。结果：RPAP3在多物种广泛存在,有高度保守性;蛋白存在典型核定位信号,激光共聚焦显微镜下,GFP标记的RPAP3蛋白主要分布在细胞核;酵母双杂交和GST-Pulldown实验证实RPAP3与HSP70间存在相互作用,且作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和HSP70的GPTIEEVD末端之间;流式细胞显示RPAP3 TPR区域的高表达阻滞细胞周期且凋亡增加。结论：RPAP3与HSP70间的相互作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和热休克蛋白70的GPTIEEVD末端之间;构建高表达细胞株发现其对细胞周期及凋亡有影响。JAK2V617F点突变与骨髓增殖性疾病的临床相关性研究
摘要：目的：研究JAK2V617F点突变与骨髓增殖性疾病（myeloproliferative disease,MPD）的临床相关性,为MPD的基因学诊断及靶向治疗提供理论依据。方法：应用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测JAK2V617F点突变。结果：102例的MPD患者中包括慢性粒细胞白血病（CML）患者9例、真性红细胞增多症（PV）患者21例、原发性血小板增多症（ET）患者37例、特发性骨髓纤维化（IMF）患者16例和分类不明的骨髓增殖性疾病（uMPD）患者19例,JAK2V617F突变阳性率依次为11%、71.4%、51.4%、75.0%、78.9%。结论：JAK2V617F点突变有助于不同类型MPD的诊断,在MPD疾病的诊断中起重要作用。微量元素锶对幼年自发性高血压大鼠血压升高的预防作用及其作用机制探讨
摘要：目的：研究微量元素锶对幼年自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertensive rats,SHR）血压升高的预防作用并探讨其作用机制。方法：107只自发性高血压大鼠适应性喂养1周后,随机分为A组纯水对照组22只、B组锶水浓度3mg/L组22只、C组锶水浓度9mg/L组19只、D组锶水浓度18mg/L组22只,E组锶水浓度36mg/L组22只,普通饲料喂养12周。实验开始时测定基础血压,至结束时共测十次血压。实验开始及结束采血两次,检测肝、肾功能,Elisa法检测血清内皮素-1（endothelin-1,ET-1）、肾素（renin）、血管紧张素I（Iangiotensin-II）及去甲肾上腺素（noradrenalin,NA）,免疫组化法检测主动脉核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）、细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）的表达。结果：（1）SHR成年后,E组与A组相比表现出血压下降趋势（P〈0.05）;第十、十一、十二周时D、E组血压均显著低于A组（P〈0.01）;B、C组较A组也有不同程度下降;随锶水浓度增高血压呈逐渐下降的大体趋势,B-E组血压值低于A组（P〈0.05,P〈0.01）;（2）锶水喂养后各组肝、肾功能指标及ET-1、renin、Ang-II、NA变化无明显差异（P〉0.05）;（3）锶水喂养后,B-E组主动脉NF-κB、VCAM-1;ICAM-1的积分光密度值（IOD）均显著低于A组（P〈0.01）,且随锶水浓度增高,NF-κB、VCAM-1、ICAM-1的表达呈递减趋势（P〈0.01）。结论：微量元素锶可延缓SHR血压升高,减小血压波动,其对高血压的预防作用机制可能是由于抑制NF-κB经典通路,减少VCAM-1、ICAM-1等炎症介质的产生而减轻血管壁损害。阿司匹林对去势大鼠腰椎骨密度及微观结构的影响
摘要：目的：研究阿司匹林对去势（卵巢切除）大鼠腰椎骨密度及微观结构的影响。方法：取48只3月龄SD雌性大鼠随机分为6组：去势组（OVX组）、对照组（Sham组）及4个阿司匹林治疗组（Aspirin组）,每组8只。OVX组及Aspirin组采用卵巢切除法建立骨质疏松模型。去势后1周,阿司匹林治疗组剂量分别为2.25、4.46、8.92及26.75 mg/kg（A1、A2、A3及A4组）,每天灌胃一次,OVX组及Sham组予同等量生理盐水灌胃。灌胃3个月后处死,剖取腰椎椎体,以双能X线吸收骨密度测量仪（DXA）和Micro-CT进行测量分析。结果：DXA分析结果显示：阿司匹林各剂量组BMD值较OVX组有统计学差异（P〈0.01）。Micro-CT分析表明：与OVX组比较,阿司匹林各剂量组BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BMD均显著性提高（P〈0.01）,BS/BV、Tb.Sp显著性降低（P〈0.01）,阿司匹林各剂量组BV/TV、BS/BV、Tb.Th、Tb.N、Tb.Sp、BMD与Sham组相比有统计学差异（P〈0.01）。结论：阿司匹林可以改善去势大鼠骨小梁结构,增加骨质密度,对去势大鼠骨质疏松具有防治作用,其作用途径可能包括抑制骨吸收和刺激骨形成两方面。三七总皂苷对脊髓损伤后BDNF的表达及运动功能的影响
摘要：目的：探讨三七总皂苷（total panax notoginseng saponins,tPNS）对脊髓半横断损伤后对脑源性神经营养因子（Brain-derivedneurotrophic factor,BDNF）表达以及运动功能恢复的作用的影响。方法：大鼠随机分为正常组和实验组,实验组大鼠脊髓T10右侧半横断模型,损伤后15min,腹腔注射三七总皂苷,剂量为20mg.kg^-1,以后每天给药一次,溶媒对照组注射等量生理盐水。术后进行BBB评分和斜板实验检测;动物分别存活1d、3d、7d、14d、28d后,采用免疫荧光化学方法检测脊髓损伤远侧端BDNF表达的变化。结果：BBB评分及斜板实验结果显示,三七总皂苷能明显促进脊髓损伤后运动功能的恢复,尤其是损伤后7d和14d,三七总皂苷组评分明显高于溶媒对照组。免疫组化结果显示：脊髓半横断损伤后,损伤远侧端损伤侧BDNF的表达强于对侧,损伤侧BDNF的表达呈现出1d,3d逐渐增强,7d达高峰的趋势,14dBDNF的表达逐渐下降,至28d仍略高于正常组。三七总皂苷组和溶媒对照组相比,BDNF表达的时间趋势相同,但相同时间点BDNF的表达强于对照组,尤其是3d、7d。结论：三七总皂苷能增强脊髓半横断损伤后BDNF的表达,这可能是其改善脊髓再生的微环境,促进脊髓损伤后运动功能恢复的机制之一。白藜芦醇对紫外线照射后人角质形成细胞AQP3表达的影响
摘要：目的：探讨白藜芦醇对紫外线照射后人皮肤角质形成细胞水通道蛋白3（AQP3）表达的影响及意义。方法：原代培养人皮肤角质形成细胞,采用UVB（20mJ/cm^2,40mJ/cm^2）照射角质形成细胞后,立即加入0.1mmol/L的白藜芦醇进行干预。RT-PCR检测照射前后角质形成细胞中AQP3 mRNA的表达量,并用羟胺法、比色法、TBA法检测照射前后细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量。结果：1.UVB照射后角质形成细胞AQP3 mRNA的表达量下降（P〈0.05）,且UVB照射剂量越大,AQP3 mRNA下降越显著（P〈0.05）。2.白藜芦醇能显著增加UVB照射后角质形成细胞SOD和GSH-Px活性,并降低细胞MDA含量（P〈0.05）。3.白藜芦醇能显著抑制UVB导致的角质形成细胞AQP3 mRNA下降（P〈0.05）。结论：白藜芦醇可能通过抑制UVB导致的AQP3 mRNA下降,及提高氧化酶活性、清除自由基的功能,从而延缓皮肤衰老。口服卡介菌诱导免疫耐受的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞机制研究
摘要：目的：研究口服卡介菌诱导免疫耐受对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响。方法：采用口服MPB制备EAE大鼠模型,随机分为BCG组（0.5mg/kg）和EAE模型组（PBS）,每组各15只,连续经口灌服给药14d,同时选取15只健康大鼠作为对照组。分别于免疫后15d、27d流式细胞术检测外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率,ELISA检测血清IL-6、TGF-β、IgE、IgG含量。结果：与EAE模型组相比,免疫后BCG组大鼠外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率增加,血清IL-6、TGF-β含量上升,血清IgE、IgG抗体水平下降。结论：口服BCG通过上调淋巴器官中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞比例,抑制效应性T细胞活性,发挥免疫耐受作用。血清miR-21及AFP在大鼠肝癌发生过程中的动态表达比较分析
摘要：目的：分析血清miR-21在肝癌发生过程中的表达水平并将其与传统肝癌血清标志物甲胎蛋白（AFP）比较,探索其成为肝癌早期诊断血清标志物的可能性。方法：二乙基亚硝胺（DENA）腹腔注射诱导建立大鼠肝癌模型,建模过程中收集造癌各个阶段的血清。Realtime-PCR检测血清miR-21的表达情况,ELISA法检测血清AFP水平。结果：与正常组及纤维化期大鼠相比,miR-21在肝硬化期、肝癌早期、肝癌晚期的大鼠血清均有不同程度上调（P〈0.05）,AFP在肝癌早、晚期的大鼠血清明显上调（P〈0.05）;与肝硬化期大鼠比较,肝癌早、晚期大鼠体内的miR-21表达显著上调（P〈0.05）,AFP在肝癌早期、肝癌晚期均显著上调（P〈0.05）。结论：血清miR-21参与了肝癌发生的过程,对于肝癌发生的各个阶段均有很大的指示作用,可能作为肝癌预防和早期诊断的一个潜在标志物。ω-3多不饱和脂肪酸对PTSD-SPS大鼠行为学影响的研究
摘要：目的：观察饲料中添加ω-3PUFAs对PTSD-SPS大鼠焦虑/抑郁行为的防护作用。方法：将40只健康成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、PTSD-SPS模型组、60%ω-3PUFAs＋PTSD-SPS模型组1、60%ω-3PUFAs＋PTSD-SPS模型组2。采用高架十字迷宫实验和旷场实验评价实验组大鼠的焦虑/抑郁行为变化。结果：与对照组相比,SPS模型组大鼠进入开放臂的次数比例和时间比例明显减少;中央格停留时间明显缩短（5.56±0.21）s,穿格次数明显减少（30.23±5.96）次,差异均显著（P〈0.05）。与SPS模型组相比,60%ω-3PUFAs的SPS组大鼠进入开放臂的次数比例和时间比例明显增加;中央格停留时间明显延长（9.88±1.14）s,穿格次数明显增加（43.22±4.35）次,差异均显著（P〈0.05）;与对照组相比没有显著差异。结论：膳食补充ω-3多不饱和脂肪酸可以降低PTSD-SPS大鼠焦虑/抑郁程度。不同消毒方法对生物化PET人工韧带的生物力学影响
摘要：目的：探讨环氧乙烷、高压蒸汽、60Co照射三种消毒方法,对生物化PET人工韧带的生物力学影响,为选取合适的消毒灭菌方法提供实验依据。方法：以表面改性的聚对苯二甲酸乙二醇酯纤维为材料,制备生物化PET人工韧带,分别给予环氧乙烷熏蒸、高压蒸汽、60Co照射消毒处理,并设未作消毒处理的空白对照组,分别进行生物力学测试,对测量结果行统计学比较分析。结果：高压蒸汽消毒后,韧带所能承受的最大拉力及第一次破裂力降低,且与对照组间的差异均有统计学意义（P〈0.05）;60Co照射消毒后,韧带所能承受的最大拉力降低,与对照组间的差异有统计学意义（P〈0.05）,但第一次破裂力的差异不明显（P〉0.05）;环氧乙烷消毒处理后,最大拉力、第一次破裂力与对照组之间无明显差异（P〉0.05）;各组间断裂伸长率无明显差异（P〉0.05）。结论：高压蒸汽消毒后韧带样品的生物力学性能降低比较明显;采用60Co射线消毒方法对产品的力学性能影响较小,但进一步的消毒方法改进可能更为理想;环氧乙烷消毒法可作为生物化PET人工韧带的有效消毒方法。
