结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16．3、Ag85B-ESAT6和分泌蛋白Hspl6．3体外对人肝癌细胞HepG-2的作用
摘要：目的：探讨结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hspl6．3、Ag85B-ESAT6及分泌蛋白Hspl6-3对人肝癌细胞HepG-2的作用。方法：将已构建的含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hspl6．3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hspl6．3，分别转入宿主菌EcoliDH5α中，诱导表达后分别获得Ag85B-Hspl6．3、Ag85B-ESAT6和Hspl6．3三种蛋白，采用Ni^2＋亲和层析柱进行纯化，并用透析方法进行目的蛋白的复性。复性的蛋白按照不同浓度和作用时间分别与肝癌细胞HepG-2反应，用MTT法检测细胞生长情况。结果：三种蛋白被成功纯化并复性。MTT数据统计分析显示，终浓度101xg／ml的三种蛋白对HepG-2细胞生长没有明显作用，当三种蛋白的终浓度分别为20、40、801μg／ml时均能够抑制HepG-2细胞的生长，并且抑制作用随着蛋白终浓度的增大以及作用时间的延长而增强。不同类别的蛋白抑制作用没有明显差别。结论：结核分枝杆菌的部分分泌蛋白能够抑制肝癌细胞HepG-2的生长。NaCl胁迫对甘草生长及抗氧化酶活性的影响
摘要：目的：通过分析不同浓度NaCl胁迫下甘草生长和抗氧化酶活性的变化探讨甘草对盐分胁迫的适应性机理；方法：采用不同浓度的NaCl溶液（配成Hoagland液）处理盆栽一年生甘草，分别于35d、70d和105d取样，测定甘草株高、地上部分鲜、干重、根鲜、干重及甘草叶片SOD、POD、CAT活性，分析各生长指标与抗氧化酶活性的相关性；结果：NaCl胁迫70d和105d，0．6％和0．9％处理组的株高、地上部分鲜、干重及根鲜、干重均显著低于CK，SOD、POD及CAT活性均显著高于CK，经相关性分析得知，SOD、POD及CAT活性与各生长指标均负相关，其中POD活性与各生长指标极显著负相关；结论：甘草对NaCl胁迫的响应有胁迫时间和浓度的依赖性，在遭遇胁迫时，通过改变自身的生长和提高抗氧化酶活性，来提高机体的抗盐能力。《分子影像学》第二版已正式出版发行
摘要：由哈尔滨医科大学附属第四医院申宝忠教授主编的《分子影像学》第二版（ISBN：978-7-117-13344-9／R·13345）一书已于2010年9月14日由人民卫生出版社出版发行。《分子影像学》是国内第一部分子影像学大型专著。对于分子影像学的基本概念、基本原理、基本方法和应用概况都有精彩而详细的论述，充分体现了国际分子影像学的最新进展。《分子影像学》第二版由著名医学影像学家、中国工程院院士刘玉清教授和美国分子影像学专家、美国医学科学院院士SanjivSam Gamhbir教授亲自作序。编委会包括美国哈佛大学、斯坦福大学等国外知名院校7名专家作为国外编委，国内多家知名大学、研究中心学术带头人13名作为国内编委，还包括国内外共40名专家参与编写。评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力
摘要：目的：评价PEBl介导的屋尘螨抗原（Derp2）重纽BCG疫苗（PEBI-Derp2．rBCG）与人上皮细胞的结合能力。方法：采用体外细胞培养的方法，分别将普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEBl-Derp2-rBCG与HeLa细胞及人类肠粘膜上皮细胞（HIEC）进行共孵育，利用HE和抗酸染色法对各组细胞与疫苗的黏附结果进行染色，光学显微镜下计数各组的黏附率，并进行比较；对以上各组分别加入PEBl蛋白，进行黏附阻断，观察对结合能力的影响。结果：孵育24小时后，无论HeLa细胞还是H匝CPEBl-Derp2．rBCG组较普通BCG组和Derp2-rBCG组的黏附率明显提高，差异有显著性（P〈0．05）；PEBl蛋白的加入对PEBl．Derp2-rBCG的黏附功能有明显抑制作用（P〈O．05）；但是，Derp2-rBCG组与普通BCG组比较没有明显差异（P〉o．05），PEBl蛋白的加入对二者的黏附亦无影响（P〉0．05）。结论：PEBl具有介导增强PEBl-Derp2-rBCG与上皮细胞黏附的能力。6-OHDA帕金森病大鼠快动眼睡眠状态下皮层脑电及基底节场电位的异常变化
摘要：目的：了解帕金森病（PD）模型大鼠在快动眼睡眠状态下皮层脑电和基底节场电位的异常变化。方法：用6-羟基多巴胺（6-OHDA）脑内两点注射法建立PD大鼠模型，并经阿扑吗啡注射诱发旋转对模型进行评价。通过多导宏电极在体电生理记录技术结合视频录像，对正常大鼠和6-OHDA大鼠PD模型进行苍白球场电位和皮层M1、M2区脑电的多部位24小时同时记录。功率谱分析和相干分析用于揭示快动眼睡眠状态下各记录位点信号的频率成分以及不N记录位点神经元集群之间的变化。结果：与正常大鼠相比，6-OHDA帕金森病模型大鼠在REM期间的皮层脑电在臼和y频段上都有变化：初级运动皮质M1区的θ频段成分消失，辅助运动区M2的θ频段成分略有增加，患侧苍白球的θ频段成分增大显著；M1区的γ频段成分增大，而γ频段成分在苍白球基本没有变化。结论：6-OHDA对中脑多巴胺能神经元的损害可造成大鼠双侧皮层M1区θ节律的消失和γ节律的增强，以及对侧M1-M2区之间在γ节律上的同步被显著增强，而γ节律在苍白球没有变化。这些异常电活动可能是由于VTA受损引起从而与帕金森病的快动眼睡眠行为障碍有关。小胶质细胞的培养及鉴定
摘要：目的：获得高纯度培养原代小胶质细胞的方法并检测Notch信号通路相关分子在小胶质细胞的表达情况。方法：取胎鼠利用反复机械振摇纯化分离小胶质细胞；利用流式细胞仪，根据CDllb及MHCII的表达水平对分离的小胶质细胞纯度进行鉴定：利用qPCR及琼脂糖凝胶电泳检测小胶质细胞中Notch通路相关分子的表达情况。结果：利用5只胎鼠采取反复机械振摇的方法可较稳定的获得1．1x10‘个的小胶质细胞，流式细胞术结果显示细胞纯度高达97．77％，并在小胶质细胞中检测到Notch相关分子的表达。结论：利用胎鼠反复机械振摇法可以获得较高纯度及产量的小胶质细胞，小胶质细胞表达Notch信号通路。80％门静脉结扎后肝脏组织中MMP-9的表达与肝再生作用的相关性研究
摘要：目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在大鼠80％门静脉分支结扎模型中大鼠增生肝脏组织中的表达及其与肝再生作用的关系。方法：健康SD雄性大鼠48只，随机平均分成假手术对照组（Sham）和门静脉结扎实验组（PVL）。观察术后1、3、7和14d保留侧肝叶重量／体重比值；下腔静脉采血后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）值的变化；光镜下观察保留侧肝脏组织的病理形态变化；用免疫组化法检测增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达，用免疫印记法检测MMP-9的表达，并进行统计分析。结果：80％门静脉分支结扎后，结扎侧肝叶呈进行性萎缩，保留侧肝叶重量／体重比值逐渐增加，7d达“平台期”；与对照纽明显不同，PVL组的ALT、AST的值在1h达到高峰，7d后回到正常水平；保留侧肝脏组织中PCNA阳性细胞计数与对照组比较，3d开始表述增强（P〈0．05），7d以后逐渐恢复至正常水平（P〉0．05）；保留侧肝叶MMP-9蛋白的表达在术后3d开始增加，术后7d达到高峰。结论：MMP-9蛋白的表达在80％门静脉结扎后大鼠肝再生过程中发挥重要作用。rhBMP-2诱导异位软骨修复重建兔气管缺损的实验研究
摘要：目的：探讨重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）作为激活物诱导异位软骨修复并重建免气管缺损的可行性。方法：取24只新西兰大白兔，制备气管前壁软骨1／3缺损模型。随机分为A、B组，每组12只，A组为实验组，在气管缺损处前壁颈前肌肉修补，多点注射rhBMP-2；B组于气管软骨缺损部位直接颈前肌群修补。术后观察动物一般情况，于4、8、12周取材进行大体观察、HE染色观察重建区域情况。结果：术后A组动物均存活至实验完成，B组因气道感染及气道分泌物堵管潴留致使实验兔死亡，其余动物出现皮下气肿，呼吸不畅等情况。组织学观察A组有明显的新生软骨细胞及少量软骨样组织，可见结缔组织包绕，周围肌肉组织完整，排列整齐，未见明显坏死组织，有少量淋巴细胞浸润。B组未见软骨组织生成，可见大量肉芽组织增生，结缔组织排列紊乱，伴少量坏死组织，大量淋巴浸润。结论：rhBMP-2可通过注射到颈前肌肉修补肌群中诱导软骨细胞和软骨样组织生成，减轻炎症反应，联合颈前肌瓣修复重建气管缺损能充分维持修复重建后的气道形态，具有减少术后皮下气肿、气管狭窄的作用，有望用于临床修复重建气管纽织缺损。消痰散结方对人胃癌MNK-45荷瘤鼠机体HK-Ⅱ表达的影响
摘要：目的：观察消痰散结方对人胃癌MNK-45荷瘤鼠糖酵解相关蛋白己糖激酶-Ⅱ（HK-Ⅱ）表达的影响，探讨该方抗肿瘤机理。方法：30只小鼠随机分为生理盐水组、消痰散结方组和希罗达组，每组10只。建立人胃癌MNK-45皮下移植瘤模型。灌胃治疗六周后，称取各组瘤质量，计算抑瘤率和瘤体积。酶联免疫吸附测定法检测荷瘤鼠血清中HK-Ⅱ的水平；免疫组化方法检测瘤组织中HK-Ⅱ蛋白的表达；结果：消痰散结方可明显抑制裸鼠人胃癌MNK-45皮下移植瘤生长，下调荷瘤鼠血清及瘤组织中HK-Ⅱ表达水平。结论：降低荷瘤鼠血清和组织中HK-Ⅱ的表达，抑制荷瘤鼠机体糖代谢过程可能是该方抗肿瘤作用的机制之一。骨髓问充质干细胞移植对VCD所致卵巢损伤的修复研究
摘要：目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对去氧乙烯基环己烯（VCD）所致卵巢早衰治疗的可行性。方法：采用VCD（160mgkg^-l,day^-1）连续腹腔注射来诱导小鼠卵巢早衰。每侧卵巢注射转染了绿色荧光基因小鼠骨髓来源的MSCs，于移植后14、28天及45天，取各组血液标本及卵巢组织，同时观察小鼠动情周期的变化；酶联免疫法检测血清FSH、LH水平，显微镜下观察MSC在卵巢的分布。结果：MSCs移植后各组均可见绿色荧光，并且主要分布于卵巢间质区，卵巢泡膜细胞区也可见绿色荧光细胞。MSCs组动情周期较实验对照组缩短，FSH与LH水平较实验对照组低，差异具有显著性。结论：骨髓间充质干细胞可改善卵巢早衰小鼠的卵巢内分泌功能，并且长时间存在于卵巢组织。骨髓间充质干细胞可能成为卵巢早衰治疗的新方法。大鼠脑缺血再灌注后血清中血管内皮生长因子与神经元凋亡的研究
摘要：目的：通过检测SD大鼠脑缺血再灌注模型血清中血管内皮生长因子（VEGF）与神经元凋亡动态表迭变化的关系，以探讨两者之间的相关性。方法：将40只大鼠随机分为8组：对照组、假手术组和脑缺血30min再灌注12h组、1d组、3d组、5d组、7d组、及14d组，每组5只。采用ELISA双抗夹心法检测大鼠血清中血管内皮生长因子、原位细胞凋亡TUNEL法检测脑组织中的凋亡神经细胞数。结果：再灌注12h、1d、3d、5d、7d及14d大鼠血清VEGF表达和凋亡神经元百分比的变化均为负相关性（均为P〈0．05）。结论：在脑缺血再灌注大鼠模型中，缺血诱导使VEGF的表达发生变化，VEGF通过直接或间接的途径抑制神经元凋亡。封闭负压引流联合局部给氧治疗兔耳缺血性创面的实验研究
摘要：目的：观察封闭负压引流联合局部给氧促进兔耳缺血性创面愈合的效果。方法：28只大耳白兔，双耳背各造成直径2．5cm全层皮肤缺损，结扎中央血管神经束及后边缘动静脉，形成缺血创面。56个创面随机分为七组：A组（-50mmHg负压同时给氧，浓度为40％±5％，每日4小时）、B组（持续-50mmHg负压4小时继之局部给氧l小时）、c组（负压治疗4min，停止1min，每日4小时，之后给氧1小时），D组（．50mrnHg负压治疗每日4小时）、E组（-125rnmHg负压治疗每日4小时）、F组（单纯给40％±5％氧l小时）和G组（空白对照）。在创面形成第0、1、3、5、7、10、14、18天拍照，测量创面面积，计算创面愈合率及创面愈合时间；在各时相点切取创面标本，组织学观察创面肉芽、上皮生长、水肿和炎细胞，Ki67免疫组化标记增殖细胞并计算增殖指数，TUNEL法计算凋亡指数。结果：负压给氧组在相同时相点创面愈合率高于单纯负压、氧疗或空白组（P〈0．05），创面肉芽生长快，水肿和炎症轻，细胞增殖指数高于对照组（P〈0．05），而细胞凋亡指数显著低于对照组（P〈0．05）。结论：负压联合局部给氧能显著促进兔耳缺血创面的愈合。EDU免疫荧光法检测整合素连接激酶（ILK）高表达对新生大鼠心肌细胞DNA合成的影响
摘要：目的：通过EDU免疫荧光法观察整合素连接激酶（Integrin-Linked Kinase，mK）在新生大鼠心肌细胞内高表达后对心肌细胞DNA合成的影响。方法：取新生（1-3天内）大鼠原代心肌细胞，培养72小时后随机分为正常对照组、ILK转染组。对照组转染重组腺病毒载体（adeno-GFP），ILK纽转染重组腺病毒载体＋ILK基因（adeno-ILK）。转然成功后48小时将两组心肌细胞分别通过5-乙基-2-脱氧尿嘧啶核苷（EDU）免疫荧光法测定心肌细胞DNA合成。结果：ILK转染组心肌细胞内DNA合成较对照组明显增加（P〈O．05）。结论：ILK高袁达具有促进新生大鼠心肌细胞的DNA合成的能力。生半夏、南星水提物对人胃癌BGC823细胞的侵袭力及HIF-lαmRNA蛋白表达的影响
摘要：摘要目的：观察生半夏、南星中药水提物对缺氧环境中人胃癌细胞株BGC823细胞HIF-lα蛋白表达和侵袭力的影响。方法：运用CoCl2（氯化钴）诱导BCG823细胞缺氧，使得细胞中HIF-1α蛋白表达升高．实验组加入生半夏、南星水提物对细胞进行预处理，然后在进行缺氧诱导。通过甲基噻唑基四唑法（MTT）检测细胞活性，使用Transwell检测细胞侵袭能力变化，RT-PCR、Weste-rn blotting分别检测HIF-lαmRNA及蛋白含量及变化。结果：生半夏、南星水提物能抑制人胃癌BGC823细胞的增殖；生半夏、南星水提物均能抑制缺氧诱导胃癌细胞的侵袭力，并且能降低HIF-1αmRNA及蛋白表达。结论：生半夏、南星水提物可抑制人胃癌BGC823细胞的增殖，抑制人胃癌BGC823细胞侵袭力，可能通过降低HIF-1α蛋白表达有关。PP2R1A逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响
摘要：目的：构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞，观察其定位，验证表达，研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法：逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcll0A1瞬时共转染293T细胞，收集病毒感染HEKTER细胞，在荧光显微镜下观察定位，标记荧光单克隆。挑取不同表达强度单克隆做western验证PP2R1A蛋白表达。运用流式细胞分析、体外创伤试验及生长曲线试验研究单克隆细胞的增殖及周期。结果：获得了过表达PP2R1A的单克隆细胞株，PP2R1A在细胞内广泛表达，结合western及细胞试验证实PP2R1A高表达阻滞细胞周期并减慢细胞生长。结论：PP2R1A是丝苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的结构A亚基的a亚型，在细胞内广泛表达。本文成功构建了表达PP2R1A的细胞株，研究发现PP2R1A高表达会影响细胞生长及细胞周期，减缓了细胞增殖。为进一步深入研究PP2R1A对PP2A全酶活性及功能、细胞转化的影响奠定了重要的实验基础。乙肝治疗耐药基因突变的焦磷酸测序技术诊断
摘要：目的：建立焦磷酸测序技术检测拉米夫定和阿德福韦酯治疗乙肝所致乙肝病毒基因耐药突变的定量检测方法，为临床乙肝耐药诊断和治疗提供依据。方法：针对乙肝病毒DNA聚合酶基因序列上4个常见基因突变位点的6种突变形式，分别克隆构建野生型和突变型质粒作为标准品，应用生物信息学手段设计目标基因通用PCR引物和各突变点的焦磷酸测序引物，建立焦磷酸测序的突变检测方法。对接受拉米夫定、阿德福韦酯治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本进行检测。结果：构建了乙肝病毒四种常见耐药性突变的标准株和变异株克隆，建立了分别或同时检测拉米夫定、阿德福韦酯耐药突变的焦磷酸测序方法，对68例临床耐药或疑似耐药的患者血清标本进行检测，双脱氧测序验证，检出拉米夫定耐药突变32例，阿德福韦酯耐药突变5例，其中焦磷酸测序检出20例为混合突变，而双脱氧测序显示为6例。结论：成功建立了焦磷酸测序定量检测拉米夫定、阿德福韦酯耐药基因突变的方法，构建了乙肝病毒耐药基因突变的标准质粒，为临床动态监测乙肝病毒变异病毒株、指导合理用药奠定了基础。PIK3CA基因突变的MassARRAY分子量阵列分析
摘要：目的：利用MassARRAY分子量阵列分析系统检测胃癌组织PIK3CA基因突变。方法：从胃癌石蜡包埋组织中提取基因组，PCR反应扩增目的基因片段，MassARRAY分子量阵列分析系统检测PIK3CA基因突变；焦磷酸测序验证检测结果。结果：中国西部地区144例胃癌组织样本中PIK3CA_E542K（1624G〉A）突变携带率为77．6％，PIK3C_LIE545K（1633G〉A）突变携带率为84％。MassARRAY分子量阵列分析系统检测结果与焦磷酸测序结果达到100％吻合。结论：建立了MassARRAY分子量阵列分析系统检测基因突变的方法，初步建立了中国西北地区汉族人群胃癌组织PIK3CA基因PIK3CA_E542K（1624G〉A）PIK3CA_E545K（1633G〉A）位点突变频数。癫痫持续状态的发病危险因素分析
摘要：目的：探讨癫痫持续状态的发病危险因素。方法：对西京医院神经内科2000年1月至2009年11月连续登记住院的癫痫持续状态患者的临床资料进行回顾性分析，采用条件logistic回归方法筛选癫痫持续状态的危险因素。结果：共收集98例癫痫持续状态患者，一般情况显示：男性发病率明显高于女性，成人发病率明显高于儿童，CSE发生率明显高于NCSE；logistic回归结果显示：中枢神经系统感染（OR值为4．74）为SE的主要危险因素，其次为脑血管病（OR值为3．93）和颅脑外伤（OR值为1．84）。SE发作的有明显诱因的占19例，其中上呼吸道感染伴发热者比例较高。结论：中枢神经系统感染、脑血管病、脑外伤是癫痫持续状态最主要的危险因素，急性上呼吸道感染伴发热者最常见的诱因。预防感染、防治脑血管病、避免外伤，减少各种诱因是预防本病的关键。
