端粒酶shRNA慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞
摘要：目的：构建端粒酶shRNA慢病毒载体及建立端粒酶稳定干扰的人类胚胎干细胞系。方法：将端粒酶基因特异性shRNA靶序列与慢病毒载体PLKO.1-puro连接、转化、挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定;利用包装细胞293T获得重组的慢病毒,感染人类胚胎干细胞,分为干扰组ShTert、载体组vector和野生型组wt;Realtime-PCR检测端粒酶mRNA的表达。结果：经PCR和DNA测序鉴定,成功构建端粒酶特异性shRNA慢病毒载体,并感染人类胚胎干细胞;经检测shTert组端粒酶mRNA表达较vector和wt组明显降低,vector组和wt组之间无明显差异。结论：通过成功构建的端粒酶特异性shRNA慢病毒载体对人类胚胎干细胞的转染实现了对其端粒酶mRNA的调控。一种基于三顺反子表达载体的生物素诱导表达系统的建立
摘要：目的：建立一种以无毒的生物素为诱导剂的哺乳动物细胞诱导表达系统。方法：通过基因组PCR或重叠延伸PCR获得该系统的三个基本构件：大肠杆菌生物素连接酶（BirA）、链亲和素-四环素依赖的抑制因子融合蛋白（SA-TetR）和生物素化信号-VP16转录激活结构域融合蛋白（Avitag-VP16）。将上述基因连入三顺反子表达载体,与响应载体一起共转染293f细胞,以EGFP为报告基因,检测EGFP荧光强度随培养体系中生物素浓度变化的情况。结果：随着生物素浓度的增加,目的基因表达出现OFF-ON-OFF的变化,诱导状态下的EGFP荧光强度约为抑制状态下的3倍。结论：可通过调节生物素浓度对目的基因的表达进行可逆的调节,该系统是一种有应用前景的诱导表达系统。单克隆抗体MGd1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响
摘要：目的：研究不同浓度的MGd1对体外培养胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响。方法：采用MTT法测定不同浓度MGd1对SGC-7901生长抑制作用;流式细胞术（FCM）进行细胞凋亡分析。激光共聚焦显微镜观察MGd1抗原（MGd1-Ag）的亚细胞定位。结果：MTT结果显示不同浓度的MGd1均对SGC-7901细胞产生明显的抑制效应（P=0.02）;流式细胞术分析发现MGd1可诱导SGC-7901发生凋亡并呈浓度和时间依赖性（P〈0.01）;共聚焦显微镜结果显示MGd1-Ag主要定位于细胞膜上。结论：以上结果证实胃癌特异性单抗MGd1可抑制SGC-7901的增殖并促进凋亡发生。它可能通过与细胞膜上抗原特异性结合,影响下游信号传导,从而发挥抑制效应。《分子影像学》第二版已正式出版发行
摘要：由哈尔滨医科大学附属第四医院申宝忠教授主编的《分子影像学》第二版（ISBN：978-7-117-13344-9/R.13345）一书已于2010年9月14日由人民卫生出版社出版发行。《分子影像学》是国内第一部分子影像学大型专著。对于分子影像学的基本概念、基本原理、基本方法和应用概况都有精彩而详细的论述,充分体现了国际分子影像学的最新进展。AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定
摘要：目的：构建丝/苏氨酸蛋白激酶2（AKT2）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体。方法：利用公用网站按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经MluI和ClaI进行酶切后的PLVTHM载体连接产生shRNA慢病毒载体。应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及U87细胞,测定病毒滴度,流式细胞仪测定U87细胞的转染效率,PCR及Western blot鉴定AKT2基因在U87细胞中的下调作用。结果：成功构建了shRNA-AKT2慢病毒载体,经测序与设计合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90%,病毒滴度为3.59×107TU/ml;流式细胞仪测定对AKT2细胞的转染效率为86.93%。PCR测定shRNA载体感染U87细胞后AKT2的干扰效率为68%。Western Blot结果显示该慢病毒载体对AKT2的表达有较为显著的敲减作用。结论：成功构建了人胶质瘤细胞株AKT2基因RNAi慢病毒载体,为后续的体内外功能学试验创造了条件。封面说明
摘要：共同的画卷封面设计说明自1997年第一只克隆羊多利的诞生拉开了人造生命的序幕,2010年,可谓是人造生命科学发展的一个新的里程碑。本刊2011年封面设计的灵感来自于人造生命技术的蓬勃发展：①封面背景以第三代测序技术即基于纳米孔的单分子实时DNA测序技术的研制成功为契机（图中，偏下），miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响
摘要：目的：探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法：将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a＋miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物（hsa-miR-15a mimics）上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果：通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高（P〈0.05）;实验组的细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论：上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。双酚A对雄性大鼠抗氧化能力影响的初步研究
摘要：目的：探讨双酚A（BPA）对成年大鼠抗氧化能力的影响。方法：将健康成年雄性SD大鼠84只随机分为5个双酚A染毒剂量组（200、50、5、0.5、0.0005 mg/kg）和1个对照组,连续灌胃染毒8周,并监测体重变化,染毒结束后测定血浆超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）含量;此外,提取肝脏组织RNA,用荧光实时定量PCR测定肝脏硫氧还原蛋白过氧化物酶2（prdx2）mRNA的表达水平。结果：随着染毒时间的延长,50 mg/kg及200 mg/kg剂量组的动物体重增长速度逐渐减慢,自4周开始,与对照组相比有显著差异（P〈0.05）;染毒结束时,其体重分别为对照组的90.52%和91.61%（p〈0.05）,而其它低剂量组间则无明显差异;大鼠血浆GSH-Px含量总体上呈下降趋势,且5 mg/kg以上剂量组与对照组相比差别均有统计学意义（p〈0.01）;染毒组血浆SOD水平虽也低于对照组,但无统计显著性;此外,大鼠肝脏组织prdx2 mRNA水平随双酚A剂量增高呈剂量依赖性降低,与对照组相比,其在最低剂量组（0.0005 mg/kg）即有显著差异（p〈0.01）。结论：双酚A可造成大鼠抗氧化酶系统失衡,导致氧化损伤效应,prdx2可能是反映其氧化损伤敏感的生物学标志。升温诱发高血压大鼠脑梗塞发病的神经内分泌机制
摘要：目的：研究气温骤升导致高血压大鼠发生脑梗塞的神经内分泌机制。方法：采用易卒中型肾血管性高血压（RHRSP）模型,放置于人工模拟气温骤升的高温环境中诱发脑梗塞,检测高温刺激前后大鼠ACTH、CORT、TSH、T3、T4的变化。结果：突然升温使生理组大鼠ACTH和CORT水平表现升高的趋势。模型组高血压大鼠CORT、TSH、T3、T4水平在升温中均呈现升高趋势,但是ACTH水平却明显降低（P〈0.05）。升温后发生脑梗塞大鼠的ACTH和T4水平与升温前比明显下降（P〈0.01）,而TSH水平明显高于升温前水平（P〈0.05）,T3水平不变。结论：高血压机体应激反应系统紊乱,甲状腺刺激素和肾上腺皮质激素的异常波动,是突然高温促发高血压机体脑梗塞发病的重要神经内分泌机制。双亲灭活制备粘质沙雷氏菌和红曲霉的跨界产色素融合子
摘要：目的：采用双亲灭活原生质体技术制备粘质沙雷氏菌和红曲霉的跨界产色素融合子,并测定其抑菌活性。方法：经0.2%溶菌酶处理获得粘质沙雷氏菌的原生质体并热灭活;经混合酶（0.8%溶菌酶＋1.2%蜗牛酶＋1.6%纤维素酶）处理获得红曲霉的原生质体并紫外灭活;用含25%PEG的原生质体融合剂进行促融合与再生。观察融合子的菌落形态和色素合成能力,测定融合子色素提取物对金黄色葡萄球菌的抑制活性。结果：在优化条件下,粘质沙雷氏菌原生质体的形成率为92.58%,红曲霉原生质体形成数约为106个/mL,两菌原生质体灭活率均为100%。共获得13个融合子,9个能产红色素,融合率为1×10-5%。其中8个融合子的95%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌表现出不同程度的抑制。结论：采用双亲灭活原生质体技术,能够制备具有抑菌活性的粘质沙雷氏菌和红曲霉的跨界产色素融合子。脱细胞小肠黏膜下层与脱细胞心包修复大鼠腹壁缺损的对比研究
摘要：目的：观察小肠黏膜下层（small intestinal submucosa,SIS）和脱细胞心包（pericardium,PC）修复大鼠腹壁缺损的效果,比较两种生物材料相容性。方法：SD大鼠40只,体重200～250g,手术造成3 cm×2 cm全层腹壁缺损,随机分为二组（n=20）,分别采用相同面积的小肠黏膜下层（small intestinal submucosa,SIS）和脱细胞真皮基质（acellular dermal matr,ADM）补片进行修补。术后1、2、4和8周分批取出腹壁修复材料,行动物一般情况观察、腹腔内粘连情况评价、力学强度测定及组织学观察。结果：术后动物都成活,两种材料术后8周均无疝瘘发生,缺损得到完整修复。术后各期SIS组的腹腔粘连评分明显低于PC组。术后4、8周,SIS组力学强度强于PC组,有统计学意义;组织学观察两组未见明显免疫排斥反应,SIS组的组织再生和重塑、血管化优于PC组;术后炎症反应两组无明显差异。结论：SIS和PC均能修复大鼠腹壁全层缺损,SIS在生物相容性方面优于PC。视神经损伤后视网膜Müller细胞未折叠蛋白反应相关因子IRE-1与GLAST的表达
摘要：目的：研究视神经损伤后视网膜Müller细胞中是否有未折叠蛋白反应（UPR）及其与L一谷氨酸/L一天门冬氨酸转运体（GLAST）的关系。方法：视神经钳夹伤模型建立成功后,运用HE染色观察视网膜神经节细胞数目改变,免疫化学染色,免疫荧光双标记,western-blot观察UPR相关因子需肌醇酶1（IRE-1）与GLAST的表达及相关性。结果：视神经钳夹伤后IRE-1与GLAST在视网膜Muller细胞上共表达,,术后第一天前呈上升趋势,在第一天达到顶峰,后呈下降趋势,第七天下降明显。结论：视神经损伤后,IRE-1与GLAST的趋势变化有一定相关性,提示未折叠蛋白反应可能是调控GLAST变化的原因之一。人胚胎干细胞支原体感染的检测和控制
摘要：目的：优化检测人胚胎干细胞支原体感染的方法,寻找控制支原体感染的途径。方法：利用hoeshest33258染色检测感染支原体的人胚胎干细胞,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞,比较两种方法检测效果;利用RNApolymeraseⅡ作为新的鉴定指标,直接检测感染支原体的人胚胎干细胞;利用抗支原体药物对感染细胞进行处理,检测处理后细胞的感染状态。结果：hoechest33258染色后,受支原体感染人胚胎干细胞检测效果不明显,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞在培养7天后有拉丝状染色分布;RNApolymeraseⅡ染色则能直接检测出受感染的人胚胎干细胞表面粘附的支原体;利用抗支原体药物Plasmocin对感染细胞进行处理后hoechest33258拉丝状染色基本消失,但持续培养后重新出现。结论：间接法使用hoechest33258染色或者直接利用RNApolymeraseⅡ染色都能够很好地检测人胚胎干细胞培养过程中的支原体感染。抗支原体药物Plasmocin能够有效减轻支原体感染情况,但是不能完全杀灭支原体。椒目仁油的成分分析及对家兔高血脂模型的影响
摘要：目的：分析椒目仁油的成分及探讨其对家兔高血脂模型的影响;方法：①采用GC-MS分析椒目仁油的成分;②建立家兔高血脂模型后,以CH、TG、HDL-C及血液粘度为检测指标,比较椒目仁油的量效与时效关系;结果：①椒目仁油的主要成分是α-亚麻酸酯与亚油酸等,总相对含量为71.34%;②每个椒目仁油组与模型组及对照组比较均能明显降低CH（P〈0.01）、TG（P〈0.01）、血液粘度（P〈0.01）以及明显升高HDL-C（P〈0.01）,其剂量效果是椒目仁油25mg/kg组〈50mg/kg组〈100mg/kg组,其时间效果是用药后第2周〈第4周〈第6周;结论：椒目仁油调节血脂的作用主要依赖其中不饱和脂肪酸即α-亚麻酸与亚油酸,其调节血脂的效果随着椒目仁油剂量的增加而加强,同时随着使用时间的延长而加强。脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ 1的表达和血清TGFβ 1水平的影响
摘要：目的：研究脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ1的表达和血清TGFβ1水平的影响,探讨脾切除在肝纤维化中的意义。方法：用CCL4建立50例肝纤维化大鼠模型。于建模第3周,6周,及8周分别取大鼠肝脏和脾脏标本。用免疫组化SP方法测定其TGFβ1的表达,HE和姬姆萨染色检测肝纤维化。应用双抗体夹心ELISA方法测定15例模型大鼠行脾脏切除前后的血清TGFβ1水平,以及15例对照组大鼠的血清TGFβ1水平,并于术后4周取两组大鼠的肝脏标本,用免疫组化SP方法测定其TGFβ1的表达。应用CMIAS8彩色图像系统对阳性目标进行分析和处理。结果：随着肝纤维化程度的进展,大鼠肝脏和脾脏TGFβ1的表达也随之增加（P〈0.01）。脾切除组大鼠其血清TGF-β1的水平显著低于对照组大鼠（P〈0.05）,且脾切除组大鼠肝脏TGFβ1的表达低于对照组大鼠（P〈0.05）。结论：脾切除术在一定程度上可延缓肝纤维化的发展。消融右肺动脉神经节丛对肾上腺素能刺激和胆碱能刺激诱发房颤的影响
摘要：目的：探讨右肺动脉神经节丛（RPVGP）消融对胆碱能及儿茶酚胺诱发房颤的影响。方法：20只犬麻醉开胸后,暴露RPVGP,分别在消融RPVGP前后,经股静脉静滴乙酰胆碱（ACh）及儿茶酚胺。测量房颤诱发率及两类递质诱发房颤的阈浓度。结果：RPVGP消融前,静滴Ach和异丙基肾上腺素（IPA）及肾上腺素（EPI）（1～100μmol/l）均可诱发AF,诱发率100%。Ach、IPA和EPI的诱发阈浓度分别为2.6±0.3μmol/l,3.3±0.2μmol/l,5.6±0.2μmol/l。RPVGP消融后,Ach及儿茶酚胺的AF诱发率分别降至10%及35%,且三种递质的诱发阈浓度分别提高至2.6±0.3μmol/l、22.5±2.4μmol/l和26.±2.6μmol/（lP〈0.05）。结论：消融RPVGP使乙酰胆碱和儿茶酚胺诱发房颤的阈浓度增高,并降低此二类介质的房颤诱发率。外源性Apelin-13对心力衰竭大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和肾上腺髓质素的影响
摘要：目的：研究给予外源性Apelin-13治疗对血流动力学、血浆血管紧张素Ⅱ（Angiotensin-Ⅱ,AngⅡ）和肾上腺髓质素（Adrenomedulin,ADM）水平的影响。方法：将50只大鼠随机分为3组：心衰组（n=20）、治疗组（n=20）和正常对照组（n=10）,阿霉素（ADR）腹腔注射建立大鼠心衰模型,治疗组给药外源性Apelin-13治疗,检测大鼠血浆AngⅡ和ADM水平（ELISA法）以及血流动力学的水平。结果：心衰组和治疗组血浆AngⅡ和ADM水平比正常对照组增高,但治疗组血浆AngⅡ和ADM水平比心衰组明显降低,治疗组左心室内压最大升降速度（LV±dp/dtmax）、左室最大收缩压（LVESP）比心衰组增高,左室舒张末期压（LVEDP）比心衰组低（P均〈0.05）。结论：外源性apelin-13抑制体内的AngⅡ和ADM水平可能对ADR诱导的大鼠心衰有保护作用。新型战伤急救止血剂体内抗菌活性的实验研究
摘要：目的：探讨新型战伤急救止血剂对家兔急性感染伤口的抗菌作用。方法：选用兔感染创面模型,分新型战伤止血剂、5A沸石、Quiclot和空白对照组对创面进行治疗,通过组织学观察、组织内细菌计数等方法对各组抗菌性能进行研究。结果：肉眼和组织学观察新型战伤急救止血剂治疗组动物模型伤口,炎症反应均小于其他各组;新型战伤急救止血剂治疗组织内细菌计数为104,比其他3组显著减少（P〈0.01）。结论：新型战伤急救止血剂具有良好的体内抗菌性能。
