复苏促进因子结合蛋白A的原核表达及对耻垢分枝杆菌的促生长作用
摘要：目的：在大肠埃希氏菌中表达结核分枝杆菌复苏促进因子结合蛋白A（resuscitation-promoting factor-interacting protein A,RipA）,观察该蛋白对耻垢分枝杆菌的促生长作用。方法：采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv的DNA中扩增出编码RipA蛋白的Rv1477基因,测序正确后克隆入原核表达载体pProEx HTa,构建重组表达质粒pProEx HTa-RipA。以重组质粒转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性重组菌株,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷（Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside IPTG）诱导RipA表达,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化。将纯化的RipA蛋白加入到耻垢分枝杆菌中,分光光度法测定细菌的A600,观察RipA蛋白的促生长作用。结果：成功扩增了Rv1477基因,并克隆于表达载体pProEx HTa中,经酶切鉴定获得阳性克隆。经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子量为52kDa的目的蛋白,Western-blot结果显示该蛋白与6×His单抗有特异性的反应条带。采用Ni＋-NTA柱可获得纯化的目的蛋白。100pM的RipA蛋白可显著促进耻垢分枝杆菌休眠菌的复苏和生长。结论：RipA蛋白在大肠杆菌中成功表达,并能有效促进耻垢分枝杆菌的生长。内皮祖细胞移植在慢性阻塞性肺疾病小鼠体内分布
摘要：目的：观察经气管移植内皮祖细胞（EPCs）在烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病模型小鼠中的分布及分化。方法：体外分离小鼠骨髓单个核细胞于EGM-2MV培养基中培养并鉴定。24只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、COPD＋PBS干预组及COPD＋EPCs干预组;香烟烟雾暴露90d建立慢性阻塞性肺疾病（COPD）小鼠模型;烟雾暴露结束后,COPD＋PBS干预组及COPD＋EPCs干预组分别经气管注入30μLPBS和30μL细胞悬液（含1×105个CM-DiI标记EPCs）。移植后观察30d处死小鼠,通过荧光显微镜观察移植细胞在肺内的分布及通过免疫荧光检测广谱细胞角蛋白的表达水平。结果：EPCs移植后30d可见EPCs分布于肺血管及气道,部分细胞表达上皮特异标志广谱细胞角蛋白。结论：EPCs移植后可定植COPD模型小鼠肺血管及气道,且可能转化为支气管及肺泡上皮细胞。宫颈病变脱落细胞中hTERC基因的扩增及其临床意义
摘要：目的：探讨不同宫颈病变和宫颈鳞癌脱落细胞中人端粒酶RNA（hTERC）基因的扩增水平及其临床意义。方法：采用荧光原位杂交技术（FISH）检测10例宫颈鳞癌、68例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）及18例宫颈炎患者的宫颈脱落细胞中hTERC基因的扩增情况,并以20例正常宫颈脱落细胞作对照。分析不同宫颈病变和宫颈鳞癌的脱落细胞中hTERC基因的扩增水平与临床特征的相关性。结果：正常宫颈、宫颈炎、CINⅠ-Ⅲ和宫颈鳞癌患者的宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增的异常细胞数分别为2.9、6.0、7.4、11.3、17.8和27.7。正常及宫颈炎、CIN与宫颈癌的hTERC基因扩增阳性率分别为10.53%（4/38）、64.23%（43/68）、100%（10/10）。细胞学诊断为意义不明的不典型鳞状细胞（ASCUS）的样本中,宫颈癌hTERC基因扩增阳性率明显高于CIN与正常宫颈及炎症（P〈0.05）,高级别CIN（CINⅡ、CINⅢ）明显高于低级别CIN（CINI）（P〈0.005）。宫颈鳞癌Ⅱ期以上的hTERC基因扩增率高于I期。结论：hTERC基因的异常扩增与CIN和宫颈癌的发生发展相关,hTERC基因的异常扩增可能成为预测宫颈病变恶性进展的有力工具之一。槲皮素对中国地鼠肺成纤维细胞、小鼠骨髓细胞和小鼠睾丸精母细胞染色体影响的初步研究
摘要：目的：研究槲皮素对中国地鼠肺成纤维细胞、小鼠骨髓细胞和小鼠睾丸精母细胞染色体的影响。方法：采用80、40、20、10、5μg/mL5个剂量组的槲皮素在有或无代谢活化条件下处理体外培养的中国地鼠肺成纤维细胞（CHL）3小时后更换新鲜培养液,恢复生长21小时后收获细胞制片。体内试验以10000、5000、2500mg/kg剂量的槲皮素给ICR小鼠灌胃后取股骨骨髓、两侧睾丸进行制片。观察槲皮素对三种哺乳动物细胞染色体的影响。结果：在有或无代谢活化条件下槲皮素在浓度〉10μg/mL均能够诱导CHL细胞染色体断裂和交换等,染色体细胞畸变率显著增加（P〈0.01）;而槲皮素各剂量组未引起小鼠骨髓细胞染色体断片、交换、畸变细胞率显著增加,亦未引起小鼠睾丸精母细胞染色体断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体显著增加。结论：在本试验条件下槲皮素对体外哺乳动物细胞显示出明显致突变性,存在潜在的遗传毒性,对体内哺乳动物体细胞及生殖细胞染色体无明显损伤作用。绿色荧光蛋白标记的人乳腺癌细胞株对化疗药物和DC/CIK治疗敏感性的研究
摘要：目的：研究绿色荧光蛋白AcGFP基因标记的人乳腺癌细胞株MCF7-pAcGFP对6种化疗药物的敏感性以及DC/CIK对其杀伤活性。方法：应用Fugene HD Transfection Reagent转染MCF-7细胞,经G418筛选获得稳定表达pAcGFP的乳腺癌细胞。采用MTT方法检测MCF7-pAcGFP细胞对6种化疗药物的敏感性以及DC/CIK对MCF7-pAcGFP细胞的杀伤活性。结果：稳定表达pAcGFP的乳腺癌细胞MCF7-pAcGFP对6种化疗药物的敏感性与未转染前相似（P〉0.05）,均对5-氟尿嘧啶、表柔比星和紫杉醇较为敏感;DC/CIK对MCF7细胞和MCF7-pAcGFP细胞的杀伤能力相同（P〉0.05）。结论：MCF7-pAcGFP细胞可代替MCF-7细胞用于抗乳腺癌药物筛选。会议征稿：2010年第十届全国脂质与脂蛋白学术会议征稿通知（第一轮）
摘要：由中国生物化学与分子生物学会脂质与脂蛋白分会主办,湖北省医学会、湖北省生物化学与分子生物学学会协办的＂第十届全国脂质与脂蛋白学术会议＂拟于2010年8-9月在湖北省宜昌市召开。本次会议主题为：＂脂质学创新与发展,服务于和谐社会”。Survivin反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞株凋亡增殖及survivin和cyclinD1表达的影响
摘要：目的：观察survivin反义寡核苷酸（Antisense Oligodeoxynuleotide,ASDON）对人胆管癌QBC939细胞株凋亡增殖及survivin和cyclin D1表达的影响。方法：合成特异性靶向survivin ASODN,并将其转染QBC939细胞,流式细胞术观察survivin ASODN对QBC939细胞凋亡和增殖的影响;同时,应用免疫组化检测survivin ASODN对QBC939细胞中survivin和细胞周期素D1（cyclin D1）蛋白表达的影响。结果：ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于对照组（P〈0.05）,ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组（P〈0.05）,ASODN组survivin和cyclin D1的蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）。结论：Survivin ASODN转染能诱导胆管癌细胞QBC939凋亡,抑制细胞增殖,并可下调survivin和cyclin D1蛋白表达。美国《化学文摘》2009年引文频次最高的1000种期刊表公布-〈现代生物医学进展〉名列第234位
摘要：据中国高等学校自然科学学报研究会与中国科学技术期刊编辑学会最近的信息显示： 在美国《化学文摘》2009年引文频次最高的1000种期刊表中,收录中国（含港台）期刊236种;中国期刊独占23．6％。可见中国期刊在CA中地位明显提高。人咽鳞癌Fadu细胞RNA负载人树突状细胞后体外诱导特异性CTL的研究
摘要：目的：探讨咽鳞癌细胞总RNA转染的树突状细胞（DC）疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力。方法：分离人脐血单个核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人IL-4（rhlL-4）诱导不成熟DC（iDC）,提取人咽鳞癌细胞FaDu总RNA后,转染入人iDC,成为FaDuRNA/DC疫苗,用流式细胞仪检测DC表面分子CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达,混合淋巴细胞反应测定DCs刺激同种异基因T细胞增殖能力,用LDH法评估转染肿瘤总RNA的DC瘤苗的细胞毒性T淋巴细胞反应。结果：与转染前比较,人咽鳞癌细胞FaDu总RNA转染后脐血单核细胞来源DCs表面CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR分子水平明显升高（P均〈0.05）;可显著促进T细胞增殖,在体外能诱导高效而特异的抗下咽癌免疫效应（P〈0.05）。结论：人咽鳞癌细胞的总RNA转染的DC肿瘤疫苗能诱导CD8＋、CD4＋T细胞免疫,是较有临床应用前景的下咽癌免疫治疗方法。关于2010年继续开展“生物医学”优秀论文评选活动的通知
摘要：为促进我国生物医学研究的进步与发展,本刊经研究决定于2010年继续开展＂生物医学＂优秀论文评选活动。为了确保优秀论文评比的公证与公平性,编辑部现将有关事项通知如下：半夏多糖对希罗达干预下小鼠腺癌细胞MHC-Ⅱ分子表达的增效作用
摘要：目的：探讨半夏多糖对希罗达干预下抑制小鼠结肠腺癌的作用机制。方法：观察半夏多糖对希罗达干预下小鼠结肠腺癌的生长状态,应用流式细胞术分析瘤细胞表面MHC-Ⅱ的表达。结果：流式细胞仪检测半夏多糖对希罗达干预下可提高CD4/CD8的比值,并能增强小鼠结肠腺癌细胞表面MHC-Ⅱ表达。结论：半夏多糖可提高希罗达的抑瘤作用,其机理可能与半夏多糖提高小鼠结肠腺癌细胞表面MHC-Ⅱ表达,增强荷瘤小鼠细胞免疫的作用有关。HLA-I表达与维吾尔族妇女宫颈癌前病变及HPV16感染的关系研究
摘要：目的：观察人白细胞相关抗原I（human leukocyte antigen class I,HLA-I）表达与维吾尔族妇女宫颈癌前病变进程及高危型HPV16的关系。方法：收集维吾尔族妇女宫颈炎、宫颈内上皮瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）和宫颈鳞癌患者的石蜡包埋组织标本共148例,提取组织DNA,应用PCR的方法检测HPV阳性及HPV16型别;同时采用免疫组织化学SP法检测HLA-I蛋白表达水平。结果：（1）在维吾尔族妇女中HLA-I抗原在宫颈炎、CINI-II、CINIII、SCC组中阳性表达逐渐减少,差异有统计学意义（P〈0.001）。（2）HLA-I的阳性表达下降趋势与宫颈癌临床分期、组织分化程度和淋巴结转移密切相关。（3）HPV在宫颈炎、CINI-II、CINIII、宫颈癌中的感染率分别为13%、46%、82%、95%,差异有统计学（P〈0.001）。（4）HPV16在宫颈炎、CINI-II、CINIII、宫颈癌中的感染率分别为4%、30%、68%、85%,差异有统计学（P〈0.001）。（5）在HPV16阳性标本中,存在HLA-I表达缺失的占71%（58/82）,HPV16感染与HLA-I表达呈负相关（r=-0.625,P〈0.001）。结论：（1）HLA-I表达缺陷可能是宫颈病变进展的重要标志,对宫颈癌的预测预警提供依据。（2）HPV16感染在宫颈病变的发展过程中起到了极大的促进作用,是一个很强的致癌因素。（3）HPV16感染与HLA-I表达之间的关系对揭示宫颈癌发病机制提供了客观依据。miR-221对于前列腺癌细胞的增殖及侵袭能力作用的研究
摘要：目的：研究miR-221不同时期前列腺癌细胞系中表达差异,探讨miR-221在雄激素非依赖前列腺癌的生长及侵袭能力中发挥的作用。方法：Northern检测雄激素依赖性与雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中差异表达的miRNA。在不同前列腺癌细胞系中,通过CCK-8及流式细胞学检测基因转染前后miR-221对于前列腺癌细胞系的生长影响,以及通过侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果：①Northern显示LNCaP-AI细胞中miR-221水平明显高于LNCaP细胞;②miR-221促进LNCaP及LNCaP-AI细胞的增殖能力③下调miR-221会减弱LNCaP-AI细胞的侵袭能力。结论：miR-221促进不同时期前列腺癌细胞系的增殖,并增强LNCaP-AI的侵袭能力。曾凡一副主编荣获中国青年女科学家奖
摘要：本刊讯：第六届＂中国青年女科学家奖＂于2010年1月26日在北京揭晓,5名青年女科学家成为这一奖项得主。其中,〈现代生物医学进展〉副主编曾凡一博士,（上海交通大学医学遗传研究所副所长、研究员、国家重大科学研究计划项目首席科学家）荣列其中。《现代生物医学进展》被英国Global Health数据库收录
摘要：Global Health是英国国际农业与生物科学研究中心主办的、国际上权威的公共健康研究数据库。读者范围主要针对专业学术机构、研究人员、非政府组织、政策制定者、从业医师、健康机构专业人士及学生。卵泡刺激素受体短肽的表达及纯化
摘要：目的：表达人卵泡刺激素受体（follicle-stimulating hormone receptor,FSHR）N端第18-34氨基酸片段。方法：将FSHRN端第18-34氨基酸片段克隆至pGEX4T-1中,构建成重组质粒pGEX4T-1-FSHRN（18-34位氨基酸）。将该重组质粒转化E.coliBL21后,IPTG诱导其表达,经亲和层析进行分离纯化,western blot鉴定。结果：克隆成功,并表达FSHRN端第18-34氨基酸片段,所表达的融合蛋白中60%为可溶性蛋白。结论：成功克隆、表达、纯化了人FSHRN端第18-34氨基酸片段,为后续动物免疫试验提供抗原。多巴胺D4受体基因启动子区功能多态性与海洛因依赖的相关性研究
摘要：目的：探讨多巴胺D4受体（DRD4）基因启动子区的3个功能多态性位点与海洛因依赖的相关性。方法：严格按照诊断标准,选取无亲缘关系的海洛因依赖患者212例及健康对照组200例提取基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因启动子区-521C/T、-616C/G、及-1240L/S3个功能多态性位点的基因型,采用HaploView及SPSS11.5软件分析各位点基因型、等位基因频率及组间差异。结果：DRD4基因-521C/T的基因型及等位基因频率分布在海洛因依赖组与正常对照组存在显著性差异（p〈0.05）。结论：多巴胺D4受体（DRD4）基因-521C/T多态性与海洛因依赖相关联,T等位基因可能是海洛因依赖的风险因子。钙激活性氯离子通道的电生理研究
摘要：目的：研究大鼠肺动脉平滑肌细胞上钙激活性氯离子通道的电流、电压电流关系等电生理特性。方法：采用急性酶分离法（胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶）分离出单个肺动脉平滑肌细胞,应用膜片钳技术,测定各组大鼠肺动脉平滑肌细胞上钙激活性氯离子通道电流和电压电流。结果：急性酶分离法能成功分离出适用于膜片钳记录的单个大鼠肺动脉平滑肌细胞,并测到稳定的钙激活性氯离子通道电流,该电流表现出时间、电压及钙离子依赖性,并呈外向整流特征。结论：大鼠肺动脉平滑肌细胞的钙激活氯离子通道具有时间依赖性、钙离子依赖性和电压依赖性,并具有外向整流特征。
