有髓轴突横断损伤后钠通道聚集状态研究
摘要：目的：研究有髓轴突横断损伤后郎飞结区钠通道聚集状态的变化。方法：用雪旺细胞-背根神经元髓鞘化共培养系统复制周围神经髓鞘形成和郎飞结发育,于髓鞘化培养基中共培养第14天用前房角切开刀造成有髓轴突横断损伤,在损伤后1、2、3、4、5、6、7、14天进行髓鞘碱性蛋白和钠通道免疫荧光染色,损伤前共培养作为对照。利用SPOT图像分析软件测量钠通道聚集簇的直径、长度和直径/长度比。结果：损伤前钠通道蛋白在有髓轴突郎飞结区形成直径/长度比略大于1的聚集簇;有髓轴突横断损伤后钠通道蛋白沿轴突纵向扩散,钠通道聚集簇的直径/长度比逐渐减小,损伤后第14天已无法检测到钠通道表达。损伤区出现节段性脱髓鞘。结论：轴突横断损伤可造成钠通道聚集簇扩散、消失,导致郎飞结结构破坏。对与小鼠胚胎发育相关的印记基因Mcts2的研究
摘要：目的：对与小鼠胚胎发育相关的印记基因Mcts2表达模式及生物学功能做初步的分析。方法：采用切片原位杂交,全胚胎原位杂交,Northern blot和real-time PCR对该基因进行了表达谱的分析。结果：切片原位杂交结果显示Mcts2基因在E13.5和E15.5胚胎中的脑、舌、心脏、肺脏、肝脏、肾脏等重要脏器中都有普遍表达。全胚胎原位杂交结果显示Mcts2基因在E10.5胚胎中的前脑、前肢、尾芽中出现较强的信号,其他部位信号较弱。Northern和Real-time PCR实验分析了Mcts2基因在E12.5,E15.5,E18.5胚胎和新生小鼠的脑、心脏、肺脏、肝脏和肾脏中的表达谱,发现Mcts2基因在这几个主要发育时期都有普遍表达,在E15.5胚胎中表达信号最为强烈。结论：Mcts2基因在小鼠胚胎的发育的各主要时期的重要脏器中都有普遍的表达,提示该基因在小鼠胚胎发育过程中起到了重要的作用。长循环紫杉醇纳米脂质体的合成及其活性评估
摘要：目的：研制甲氧基聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（mPEG2000-DSPE）修饰的长循环紫杉醇纳米脂质体（PEG-PTX-LP）,减少市售紫杉醇制剂的不良反应并增强疗效。方法：采用薄膜超声分散法制备PEG-PTX-LP,采用激光散射粒度分析仪和透射电镜观察其物理性状,超滤法检测药物包封率,透析法检测药物缓释能力,通过细胞摄取试验观察人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC）、A549肺癌细胞对PEG-PTX-LP的摄取能力。结果：透射电镜显示长循环紫杉醇纳米脂质体呈圆形囊泡样结构,粒径检测其平均粒径为99.1 nm,制备后第2、7、14、21、30天的紫杉醇包封率均大于99%,在血清中的缓释能力优于泰素溶液,HUVEC、A549细胞对PEG-PTX-LP中紫杉醇的摄取量明显高于泰素溶液（Taxol）。结论：采用mPEG2000-DSPE修饰的PEG-PTX-LP具有更高的稳定性和缓释能力,对肿瘤细胞和血管内皮细胞有一定的特异性,是一种更有效的紫杉醇新剂型。帕金森大鼠黑质和纹状体BMP4及其mRNA表达的时程变化
摘要：目的：探讨帕金森（PD）大鼠模型体内脑黑质和纹状体内骨形成蛋白4（BMP4）及其mRNA表达的变化规律。方法：用六羟基多巴胺（6-OHDA）建立PD模型后,第2、4、6、8和10周时处死大鼠,取左侧黑质、纹状体,用免疫组化、酶联免疫、荧光定量PCR技术从蛋白水平和基因水平检测BMP4及其mRNA表达。结果：BMP4及其mRNA表达基本一致,其BMP4及mRNA表达均呈双峰,其蛋白表达在纹状体内第2周和6周时达高峰、在黑质内第2周和8周时达高峰,其mRNA表达在纹状体内第2周和8周时达高峰、在黑质内第4周和8周达高峰,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：PD大鼠模型体内,BMP4及其mRNA不呈现稳定的低表达,而是有波动性,明确BMP4及其mRNA处于稳定低表达的时间后,为下一步的治疗实验时间点的选择上奠定了基础。复方浙贝母药物血清抑制L1210/CDDP细胞增殖与诱导凋亡研究
摘要：目的：观察复方浙贝药物血清抑制耐顺铂的小鼠淋巴细胞系（L1210/CDDP）增殖和诱导凋亡效应,并在此基础上探讨复方浙贝颗粒逆转白血病细胞多药耐药机制。方法：MTT法测定不同浓度组复方浙贝颗粒含药血清抑制L1210/CDDP增殖;Annex-in-V/PI双染经流式细胞仪（FCM）定量检测其含药血清诱导L1210/CDDP细胞早期凋亡率。结果：不同剂量复方浙贝颗粒含药血清组均具有抑制L1210/CDDP细胞增殖效应,对其凋亡抑制率分别为：29.27%（高剂量组）、31.78%（中剂量组）、21.20%（低剂量组）、25.31%（阿霉素组）;实验各组的A570nm与空白对照组比较明显下降（P〈0.01）。经FCM双荧光法检测其能够诱导L1210/CDDP细胞早期凋亡,实验各组凋亡率分别为：55.12%（中剂量血清组）、34.23%（低剂量组）、25.69%（高剂量组）,24.65%（空白血清组）。结论：复方浙贝颗粒含药血清能够明显抑制L1210/CDDP细胞增殖,并能诱导其凋亡。关于2009年继续开展“生物医学”优秀论文评选活动的通知
摘要：为促进我国生物医学研究的进步与发展，本刊经研究决定于2009年继续开展“生物医学”优秀论文评选活动。为了确保优秀论文评比的公正与公平性，编辑部现将有关事项通知如下：1评奖类别①2009年度每期优秀论文（拟评选3-5篇）②2009年度年度优秀论文（拟评选4-6篇）⑧2001—2008年刊载的优秀论文（数量不限）BDNF RNA干扰在多巴胺能PC12细胞凋亡中的作用研究
摘要：目的：探讨脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）在PC12细胞凋亡中的作用。方法：设计并合成针对BDNF mRNA序列的小片段干扰RNA（siRNA）,利用lipofectamine 2000将siRNA转染入PC12细胞中或给与6-OHDA损伤,给与/不给予BDNF蛋白保护,采用定量PCR和免疫荧光法检测BDNF mRNA和蛋白表达水平;采用上清液乳酸脱氢酶（LDH）释放量测定和流式细胞仪法检测siRNA对细胞凋亡的影响。结果：转染siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达量比正常组细胞减少73%,而转染作为对照的scrambled siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达没有明显变化。BDNF RNA干扰与6-OHDA神经毒性一样可诱导PC12细胞的LDH释放和细胞凋亡。给予BDNF蛋白保护后细胞毒性减轻。结论：BDNF基因下调可以导致PC12细胞的凋亡,BDNF蛋白对PC12细胞有保护作用,为进一步进行动物体内研究奠定了基础。斑马鱼干扰素γ的克隆表达研究
摘要：目的：通过人工诱导斑马鱼干扰素的产生,证实两种斑马鱼干扰素γ基因ifng1-1和ifng1-2的存在,并克隆这两种干扰素基因,构建高效表达载体并做原核表达。方法：通过conA药浴,诱导斑马鱼干扰素γ的表达,即刻提取组织总RNA,并通过RT-PCR方法扩增两种干扰素γ基因。将目的基因连入表达载体pET24a,构建重组载体pET24a-ifng1-1和pET24a-ifng1-2。将载体转化BL21,并用IPTG诱导融合蛋白的表达。产物经SDS-PAGE检测,分析蛋白表达情况。结果：成功克隆了两种斑马鱼干扰素γ基因,构建了pET24a-ifng1-1和pET24a-ifng1-2重组载体,并实现了原核融合表达。结论：两种干扰素γ基因都能够被conA所诱生,且具有相似特性,表明两种干扰素γ都不是假基因,都有可能在免疫系统中发挥作用,本实验为进一步研究两种干扰素γ的功能奠定了基础。大鼠脑缺血再灌注后Smac、XIAP和caspase-9表达及活血通络方的干预作用
摘要：目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后线粒体通路第二种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物（Smac）、凋亡抑制蛋白（XIAP）和凋亡蛋白酶（caspase）-9的表达变化及活血通络方的干预作用机理。方法：将大鼠随机分成模型组、活血通络组,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注6、12、24和48 h不同时间点进行神经功能评分,用免疫组化法检测Smac、XIAP和caspase-9阳性细胞数。结果：缺血再灌注后6 h模型组神经功能症状积分升高,缺血半暗带皮质内神经元凋亡增多,Smac、XIAP和caspase-9蛋白的表达亦有明显上升,再灌注12 h达高峰（P〈0.05,P〈0.01）,随后出现下降。活血通络方能显著降低神经功能症状积分,减少神经元凋亡,促进XIAP表达,下调Smac和caspase-9表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论：脑缺血再灌注后脑组织Smac、XIAP和caspase-9蛋白的表达均明显增加,提示它们可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,活血通络方可能通过促进XIAP并抑制Smac、caspase-9表达保护神经元及神经功能。小鼠mP24基因的原核表达及多抗制备
摘要：目的：本研究是为后续实验中深入研究小鼠mP24基因的功能及活性提供mP24多克隆抗体。方法：mP24是小鼠中新发现的新基因,通过构建了pET-28a（＋）/mP24原核表达质粒,转化入大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导宿主细菌表达融合蛋白。经过SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白能以可溶性蛋白形式存在。利用镍柱纯化融合蛋白,免疫新西兰兔,制备mP24多抗。结果：Western Blot结果显示,制备的抗小鼠mP24多克隆抗体具有较高的特异性。ELISA实验检测,该多抗对免疫抗原的效价高达1：9000,具有较高的效价。结论：本实验成功制备了mP24的多克隆抗体,为进一步开展mP24基因功能的研究奠定了基础。仪器信息网论坛升级为全新社区,由五个模块组成
摘要：经过一年时间的准备,仪器信息网论坛升级为全新社区,由＂仪器论坛＂、＂圈子＂、＂iLog博客＂、＂积分商城＂和＂积分加油站＂五个模块组成。 仪器论坛（http：／／www．instrument．com．cn／bbs）是仪器社区中上线时间最长的一个栏目，仪器论坛按照不同的行业和应用等分成120多个版面，截至10月底已有617098个帖子，每天都会有超过五万的用户在这个交流平台上和业内的朋友们沟通、学习。小鼠Rdh13基因的组织表达谱及其亚细胞定位的初步观察
摘要：目的：研究视黄醇脱氢酶13（Rdh13）基因在小鼠组织中的表达谱及其亚细胞定位,为其功能研究提供线索。方法：利用生物信息学方法模拟Rdh13的三维结构,采用半定量RT-PCR和Western blot的方法检测小鼠14种组织中Rdh13的表达水平;采用Western blot的方法检测其亚细胞分布;进一步应用免疫荧光共定位的方法观察Rdh13的亚细胞定位。结果：Rdh13具有SDR家族保守的辅酶结合位点（TGX3GXG）和催化活性位点（YX3K）;RT-PCR和Western blot实验证实Rdh13在小鼠多种组织中广泛表达,但其表达水平存在一定差异;不同于其它RDHs家族成员,Western blot和免疫荧光共定位提示Rdh13蛋白在细胞中定位于线粒体。结论：Rdh13是一个与Rdh12结构相似的SDR家族成员,在小鼠多个组织中广泛表达;Rdh13蛋白定位于线粒体,有可能作为保护线粒体不受视黄醛毒性作用的屏障。白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌T-47D细胞株生长的抑制作用
摘要：目的：观察白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌细胞T-47D生长的影响。方法：采用平皿克隆形成实验、软琼脂集落形成实验和BrdUrd（溴脱氧尿苷）掺入实验,观察不同浓度的白花蛇舌草醇提取物（1.0μg/mL,3.0μg/mL,10μg/mL,30μg/mL,100μg/mL）对T-47D细胞锚定依赖性生长和软琼脂集落形成能力及核酸合成的抑制作用。结果：①随着白花蛇舌草醇提取物浓度的升高,对T-47D细胞的生长呈现明显抑制作用;②白花蛇舌草醇提取物可呈浓度依赖性抑制对数生长期T-47D细胞核酸合成。结论：白花蛇舌草醇提取物可能通过影响肿瘤细胞核酸合成而抑制T-47D细胞生长。红藻氨酸诱导原代培养皮质神经元兴奋毒中p21变化及机制的研究
摘要：目的：探讨p21在红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元兴奋毒中的变化及可能机制。方法：原代培养大鼠皮质神经元经红藻氨酸（KA）处理24h后,激光共聚焦显微镜透射光下观察细胞损伤,应用Western blotting方法检测p21与p53蛋白表达的变化,用染色质免疫共沉淀（ChIP）-聚合酶链反应（PCR）方法检测p53与p21基因启动子上p53反应元件1结合情况。结果：KA处理后神经元明显损伤,部分细胞胞体缩小、变圆,突起变短、减少或消失,p21与p53蛋白表达上调,并且p53与p21基因启动子上的p53反应元件1结合增加。结论：在KA诱导的原代培养皮质神经元兴奋毒作用中p21蛋白表达上调,而p53直接参与了p21的激活。小干扰RNA靶向EGFR基因逆转卵巢癌细胞顺铂耐药的研究
摘要：目的：探讨载体表达的小干扰RNA（siRNA）影响卵巢癌耐药细胞株EGFR基因的表达并逆转其顺铂耐药的可行性。方法：体外构建EGFR小发卡状RNA（shRNA）的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/DDP细胞。实验分为正常对照组、空质粒转染组、非特异性转染组和特异性转染组。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测EGFR mRNA的表达;使用免疫细胞化学法（ICC）检测EGFR蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）。结果：EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱（P〈0.01）,EGFR蛋白表达明显下调（P〈0.01）;顺铂敏感性比正常对照组提高了约2.5倍。结论：针对EGFR合成的siRNA能够有效地抑制EGFR mRNA和蛋白的表达,并能恢复其对顺铂的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。骨化三醇对系膜增生性肾炎大鼠TGF-β1的影响
摘要：目的：探讨骨化三醇对系膜增生性肾小球肾炎模型大鼠TGF-β1的作用。方法：应用抗大鼠胸腺细胞免疫血清（Anti-thy-mocyte serum,A TS）抗体一次性尾静脉注射复制大鼠MsPGN模型,将实验大鼠分为三组对照组（A组）、模型组（B组）、骨化三醇治疗组（c组）,分别与1、3、7、14天每组各处死6只大鼠,进行PAS染色,分析肾皮质损伤程度,采用ELISA法检测TGF-β1在血清中的变化,Envision免疫组化法检测TGF-β1在肾小球中的表达情况。结果：肾炎组大鼠血清及肾小球中TGF-β1表达明显高于对照组（p〈0.01）;骨化三醇治疗组大鼠血清及肾小球中TGF-β1的表达明显显著减轻（p〈0.01）。结论：骨化三醇可以抑制MsPGN模型大鼠中TGF-β1的表达,从而早期延缓肾小球疾病纤维化的发展。藤茶总黄酮对四氯化碳所致大鼠肾损伤保护作用的初步研究
摘要：目的：初步探讨藤茶总黄酮（TCF）对四氯化碳所致肾损伤的保护作用。方法：30只雄性SD大鼠被随机分为正常组、模型组和TCF治疗组,第12周处死动物,肾组织石蜡切片,HE染色,光镜下观察肾组织形态结构变化。结果：正常组肾小球及肾小管形态结构无异常;四氯化碳模型组肾的近端小管管腔狭小,上皮细胞萎缩,细胞核浓缩,部分细胞出现空泡变性及少量肾小球毛细血管内皮细胞细胞核出现核浓缩,通透性增加;TCF治疗组肾小球及肾小管形态结构基本恢复正常。结论：藤茶总黄酮对四氯化碳所致大鼠肾损伤有较好的防治作用。纳米结构Ti/TiN涂层对NiTi合金生物相容性的影响
摘要：目的：评价纳米结构Ti/TiN涂层对镍钛形状记忆合金（含镍50.6at%）生物相容性的影响,为生物医用纳米结构Ti/TiN涂层表面改性的NiTi合金材料生物安全性提供依据。方法：不影响基体的形状记忆性或超弹性效应的前提下,采用真空过滤电弧离子镀技术,在NiTi合金表面沉积一层纳米结构Ti/TiN涂层,分别对表面改性前和改性后的NiTi合金样品进行体外细胞毒性实验、溶血实验和血小板粘附实验,探索纳米结构Ti/TiN涂层对NiTi合金生物相容性的影响。结果：表面具有纳米结构Ti/TiN涂层的NiTi合金无细胞毒性,H9C2（2-1）细胞相容性优于涂层前,细胞形态典型,粘附数量明显大于涂层前。纳米结构Ti/TiN涂层有改善NiTi合金的血液相容性作用,其溶血率从2.1%降至涂层改性后的1.2%,同时,血小板黏附量和聚集程度小于处理前的NiTi合金。结论：纳米Ti/TiN涂层能够显著改善NiTi合金的生物相容性。
