脑微血管内皮细胞条件培养液对MIP-1β诱导大鼠小胶质细胞迁移影响的机制
摘要：目的：研究经通络方药作用后的脑微血管内皮细胞条件培养液对MIP-1β诱导的大鼠小胶质细胞迁移的影响，以及由MIP-1β在小胶质细胞上的受体-CCR5介导细胞信号转导通路的调控作用。方法：将通络方药作用后的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液加入到由5nM MIP-1β刺激6h后的原代大鼠小胶质细胞中，利用Transwell细胞迁移系统来观察小胶质细胞迁移，用Western blot法检测小胶质细胞CCR5，p-p38，p—JNK表达情况。结果：脑微血管内皮细胞条件培养液能够显著减少小胶质细胞迁移到Transwell下层的细胞数量（P〈0．01），降低小胶质细胞上MIP-1β的受体CCR5表达，同时抑制了其下游信号蛋白p38和JNK的磷酸化。结论：通络方药作用后的脑微血管内皮细胞条件培养液可抑制由MIP-1β诱导的大鼠小胶质细胞迁移，其作用发挥可能是通过抑制MIP-1β的受体CCR5表达，降低了其下游通路上p38和JNK蛋白磷酸化程度实现。重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染骨髓间充质干细胞移植治疗心衰大鼠的实验研究
摘要：目的：重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）并植入心衰大鼠心肌，观察其心功能的变化。方法：采用部分缩窄腹主动脉法制备大鼠压力超负荷性慢性心力衰竭模型。分离和培养成年大鼠BMSCs，待细胞传代到第6代，用重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染BMSCs48h后将BMSCs移植入心衰大鼠心肌内。实验共分3组：心衰组、移植BMSCs组及移植转染Ad5ADRbeta2-EGFP的BMSCs组.移植BMSCs（1×104）^4周后，检测大鼠血流动力学各指标的变化。结果：荧光显微镜下可见转染BMSCs绿色荧光蛋白表达达到80％以上。移植BMSCs组和移植转染Ad5-ADRbeta2-EGFP的BMSCs组的左心室舒张末压力（LVEDP）低于心衰组，左心室内压变化最大速率（±dp／dt max）和心率均高于心衰组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。移植转染Ad5-ADRbeta2-EGFP的BMSCs组的左心室内压上升最大速率（＋dp／dt）高于移植BMSCs组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染BMSCs并移植入心衰大鼠后，能够改善心衰大鼠的心功能。低温空气等离子体对医用聚四氟乙烯灭菌效果及其机理的研究
摘要：目的：考察低温空气等离子体对医用聚四氟乙烯（PTFE）表面大肠杆菌的灭活效果以及灭菌机理。方法：采用Langmuir双电子探针和电子自旋共振（ESR）诊断技术分别定量测定了远程低温空气等离子体场中各活性物种的分布。并通过扫描电镜（SEM）对灭菌后细胞破碎情况进行观察，细胞泄漏物质检测，反映腔温度变化和紫外线对灭菌影响分析其灭菌机理。结果：本实验条件下，空气等离子灭菌的最适宜操作参数为，放电功率100W，空气流量40sccm，放电时间120s。通过细胞形态学的观察和蛋白质泄漏量检测，结果证实等离子体处理后的大肠杆菌细胞肿胀、疏松，因此可以得出空气等离子体对大肠杆菌的灭菌机理为，电子、离子、自由基等活性粒子作用于细胞壁和细胞膜，使之肿胀、疏松、断裂，通透性增加，内容物流出是导致大肠杆菌死亡的直接原因。结论：空气等离子体灭菌效果受等离子体处理参数的影响。共刺激分子对全身炎症反应综合征中细胞因子的影响
摘要：目的：探讨全身炎症反应综合征（SIRS）中相关共刺激分子的表达及其调控因素，并对共刺激分子在全身炎症反应综合征发展及治疗中的作用及机制进行初步探究。方法：腹腔注射脂多糖（LPS）建立全身炎症反应综合征的小鼠动物模型后，将BALB／c模型小鼠随机分为生理盐水（NS）、LPS、CD28＋LPS三组，进行脾淋巴细胞的分离，通过RT-PCR、ELISA等方法检测共刺激分子在不同组别中的表达。结果：经CD28活化型单克隆抗体（CD28mAb）刺激后的BALB／c小鼠组中共刺激分子CD40配体（CD40L）、杀伤性T细胞相关抗原-4（CTLA-4）的表达量较生理盐水组明显增高。结论：共刺激分子CD28对于全身炎症反应综合征有促进的作用。气温骤升诱发高血压大鼠脑梗塞血液流变学的机制研究
摘要：目的：研究气温骤升诱发高血压大鼠发生脑梗塞血液流变学的相关机制。方法：采用改良的黄如训方法复制大鼠易卒中型肾血管性高血压（RHRS）模型，放置于人工模拟的气温骤升环境中诱发脑梗塞，检测气温骤升前后大鼠血液流变学中全血黏度、红细胞聚集和电泳指数。结果：气温骤升时，所有大鼠全血黏度、红细胞聚集和电泳指数指标均升高，模型组变化幅度最大；升温结束后，生理组、伪手术组全血黏度下降，而模型组仍呈上升趋势（P〈0．05或P〈0．01），而且模型组升温后的全血黏度、红细胞聚集和电泳指数均明显高于同时间点生理组和伪手术组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：气温骤升会导致机体血液流变学的波动，自我恢复能力下降，血液黏度变化幅度大和持续时间长是气温突升诱发存在高血压基础病变发生脑梗塞的重要机制。Mip1对大鼠心肌细胞凋亡基因Bid转录调控作用的初探
摘要：目的：研究转录因子Mip1对大鼠心肌细胞H9C2凋亡相关基因Bid的转录调控作用。方法：以H9C2细胞基因组DNA为模板，扩增Bid核心启动子片段，将其克隆入荧光素酶报告基因质粒PGL3-Basic中，构建重组载体，并采用双酶切法、PCR法及基因测序对其进行鉴定。用脂质体转染法将该载体转入Mip1不同程度过表达的H9C2细胞，检测该细胞Bid基因启动子区的转录活性。结果：成功克隆Bid基因启动子区，双酶切、PCR和基因测序均显示PGL3-Basic-Bid promoter重组裁体构建成功。荧光素酶相对活性检测显示在H9C2细胞中，随着Mip1转入的增多，Bid启动子区转录活性逐渐下降。结论：Mip1作为一个新的转录抑制因子，可以下调凋亡基因Bid的转录.皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激的作用
摘要：目的：观察内源性糖皮质激素皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激相关蛋白GRP78、XBP1-S及ATF6蛋白表达水平的影响，并探讨皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激的作用。方法：分离成年雄性C57／BL6小鼠腹腔巨噬细胞．随机分为四组，分别以终浓度为0、10、50及1000ng／ml皮质酮处理小鼠腹腔巨噬细胞，时间为1h，提取细胞总蛋白，应用Western blotting方法检测内质网分子伴侣GRP78蛋白及未折叠蛋白反应信号转导通路转录因子XBP1-S和ATF6蛋白质表达变化。结果：低浓度皮质酮（10、50ng／ml）处理小鼠腹腔巨噬细胞1h后，均可显著地增加内质网分子伴侣GRP78蛋白表达，以50ng／ml皮质酮组增加最明显，而当皮质酮浓度达1000ng/ml时，GRP78蛋白增加不显著。并且，低浓度皮质酮（10、50ng／ml）可显著增强未折叠蛋白反应两个重要转录因子XBP1-S和p50ATF6蛋白表达。结论：这些结果表明低浓度内源性糖皮质激素皮质酮可诱发小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激，激活未折叠蛋白质反应信号转导通路，其可能与巨噬细胞免疫功能增强有关。不同缺氧时间对神经细胞中外源性HSP70表达的影响
摘要：目的：探讨不同缺氧时间刺激对神经细胞中外源性HSP70基因表达的影响。方法：采用重组腺病毒vAd—HSP70感染体外原代培养的神经细胞，48h后给予感染细胞不同缺氧时间（缺氧0h，0．5h，1h，2h，3h，4h）刺激，再复氧处理后，用RT—PCR和Western blotting检测重组腺病毒介导的HSP70基因在神经元和胶质细胞中的转录表达。结果：重组腺病毒vAd-HSP70感染的神经细胞可检测到外源性HSP70基因的转录表达。经缺氧再复氧处理后，随着缺氧时间延长，HSP70转录水平和蛋白表达都增加，缺氧1h时最高（1．1539±0．0315，0．9699±0．0023），其次是缺氧2h时（1．0398±0．0723，0．9622±0．0026），随后依次降低，缺氧4h组（0．7477±0．0328，0．9335±0．0034）HSP70表达最低，与其他各组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：缺氧2h内给予神经细胞再复氧处理外源性HSP70表达水平较高，有利于神经细胞功能的恢复。低温环境下兔放火器复合伤早期血浆蛋白质及器官功能变化的研究
摘要：目的：探讨低温环境下放火器复合伤后血清蛋白质含量及器官功能的变化规律。方法：制备低温环境下兔肢体放火器复合伤动物模型，分别于致伤前及致伤后4、8、16、24、48、72h测定血浆中蛋白质含量及Cr、BUN、ALT、AST、GGT、ALP、CK、LDH、ACP含量，并同时观察生命体征的变化。结果：低温环境下兔放火器复合伤后，4、8、16、24、48、72h血浆TP、ALB和GLB含量较致伤前均显著下降；血浆Cr、ALT、AST、CK和LDH含量于致伤后4、8、16、24、48、72h显著升高。致伤后16h时血浆BUN含量显著升高，随后24、48、72h显著下降：血浆GGT含量于致伤后4h显著升高，8、16、24、48、72h显著下降。血浆ALP和ACP含量于致伤后4、8、16、24、48、72h显著下降：结论：低温环境下放火器复合伤对免重要器官功能具有损伤早、损害严重的特点，并具有明显进行性加重的趋势。外源性雌、孕激素对裸鼠人子宫内膜异位症病灶中MMP-2、TIMP-2及VEGF蛋白表达的影响
摘要：目的：探讨雌、孕激素对异位内膜及MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白表达的影响。方法：将育龄妇女正常分泌晚期子宫内膜注入裸鼠盆腹腔，建立EMS裸鼠模型，随机分为四组，分别予雌激素（E）、孕激素（P）、雌激素＋孕激素（E＋P）及对照（C）组生理盐水肌肉注射。术后18天处死裸鼠，取异位组织，采用免疫组化方法（PV6001／6002法）检测各组异位内膜MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白表达水平，与种植前子宫内膜比较。结果：异位内膜较正常内膜MMP-2、VEGF蛋白表达增强，TIMP-2蛋白表达减弱（P均〈0．01）；E组、P组、E＋P组MMP-2／TIMP-2比值及VEGF蛋白表达均高于C组（P均〈0．01），E＋P组同E组相比MMP-2／TIMP-2比值及VEGF蛋白表达无差别（P均〉0．05）。结论：异位内膜的侵袭性和血管新生能力增强，且对激素的反应不同于正常内膜。抗人肌糖蛋白C单克隆抗体的制备及鉴定
摘要：目的：制备抗人肌糖蛋白C（tenescin—C，TN—C）单克隆抗体并鉴定。方法：根据人TN—C蛋白序列，用软件预测B细胞表位；化学合成优势表位蛋白肽，分别与钥孔戚血蓝素（KLH）和免血清白蛋白（RSA）交联；取KLH-TN—C常规免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合，用分别预包被KLH—TN—C或者RSA—TN—C融合蛋白的ELISA板筛选高亲和力单克隆抗体；取骨肉瘤组织进行免疫组化染色。结果：获得蛋白优势表位数据；成功将TN—C肽交联至KLH和RSA；获得3株抗人TN—C单克隆抗体，分别为IgG1和IgG2a亚型，腹水效价为10．6左右，免疫组化有阳性着染：结论：成功获得抗人TN—C单克隆抗体。他克莫司对HaCaT细胞NF-κB表达的影响
摘要：目的：探讨他克莫司对HaCaT细胞中NF-κB分子表达的影响。方法：培养人HaCaT细胞，分别与10μmol·1^-1和50μmol·1^-1他克莫司溶液共孵育后，通过RT-PCR和Western-blot方法，分别从基因和蛋白水平，观察NF-κB分子表达的变化。结果：经10μmol·1^-1和50μmol·1^-1的他克莫司（FK506）溶液孵育后，HaCaT细胞中NF-κB分子表达明显低于对照组，同时体现一定的剂量效应，50μmol·1^-1组的表达水平更低。结论：他克莫司可以剂量依赖性地抑制HaCaT细胞中NF-κB的分子表达。葛根素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用
摘要：目的：观察葛根素预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法：雄性SD大鼠，建立肝脏缺血再灌注模型（HIR）。随机分为假手术组、HIR组和HIR-葛根素预处理组。分析各组动物血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及乳酸脱氢酶（LDH）含量的变化，观察肝组织病理学的改变。结果：肝脏缺血再灌注损伤后，与假手术组比较，血清中AST、ALT、LDH含量均显著增加，同时肝脏门静脉周围瘀血明显，可见少量散在的肝细胞片状坏死灶，有少量炎性细胞和单核细胞浸润，肝细胞肿胀、脂肪空泡变性、核浓缩；经40mg/kg剂量的葛根素预处理7天后，与模型组相比，血清中AST、ALT、LDH均显著降低，肝脏的瘀血明显较模型组轻，肝小叶结构基本正常，微血管未见明显损伤，窦间隙稍宽，细胞变性坏死不明显，偶见少量肝细胞坏死。结论：葛根素预处理对大鼠缺血再灌注肝脏损伤有一定的保护作用．PPARγ激动剂罗格列酮诱导人前列腺癌细胞系LNCAP凋亡的作用
摘要：目的：探讨罗格列酮（ROZ）对体外培养细胞系LNCAP增殖及凋亡的作用。方法：20、50、100μmol／LROZ作用LNCAP细胞24h、48h、72h后．MTT法检测ROZ对LNCAP细胞生长的影响。采用末端脱氧核苷酸转移酶原位标记（TUNEL法）和流式细胞术检测细胞凋亡情况。Westem Blot检测LNCAP细胞中Casepase-3表达水平的变化。结果：ROZ（20μmol／L至100μmol／L）对前列腺癌细胞有显著的增殖抑制作用，以100μmol／L浓度最为明显。ROZ（1001μmol／L）作用72h后最高增殖抑制率达78．58％。流式细胞仪检测结果显示，LNCAP细胞凋亡数目随药物浓度的增加呈递增趋势；100μmol／LROZ作用72h后凋亡细胞数达48．11％。与此一致．TUNEL染色阳性细胞数目在ROZ处理组显著增多，Western Blot检测显示，ROZ显著增加LNCAP细胞中Caspase-3蛋白表达水平。结论：ROZ在体外对前列腺癌细胞系LNCAP有明显的增殖抑制及促进凋亡作用，有望成为前列腺癌患者新的治疗方法。药用真菌子实体多糖SEC—HPLC图谱的相似度定量评价研究
摘要：目的：对灵芝属Ganoderma下4个种共7个菌株及灰树花Grifola ffondosa和云芝Trametes versicolor共9种子实体粗多糖进行了体积排阻HPLC色谱（SEC—HPLC），并分析了相似度。方法：各样品水提物的HPLC图谱用平方欧氏距离法计算了相似度，用离差平方和法进行聚类分析。结果：灵芝属内各样品聚类距离为8，灰树花与云芝的聚类距离为16，它们与灵芝属的距离为25，说明同一灵芝属内的不同种及同种不同菌株所产生的多糖分子量分布近似度远高于来自树花菌属的灰树花或栓菌属的云芝。结论：此方法可量化描述不同多糖间SEC—HPLC的相似关系，有作为真菌多糖样品质量控制手段的潜在能力。新型PEI衍生物对基因沉默作用的研究
摘要：目的：构建出一种新型的高效的非病毒基因输送材料。方法：利用1，4-丁二醇二氯甲酸酯连接小分子PEI，合成新型的PEI衍生物（dPEI），通过体外COS-7和HSC细胞实验检测其对质粒和siRNA的输送情况。结果：COS-7细胞实验显示，dPEI具有高效输送质粒的能力，其转染效率是对照组PEI25 kDa的10倍以上；同时，HSC细胞实验进一步证实dPEI包裹siRNA转染具有一定的基因沉默作用。结论：本研究合成的新型PEI衍生物既可以用于质粒基因的转染，也可用于siRNA的转染，是一种新型的高效的非毒基因输送材料。山楂醇提取物对大鼠离体胃、肠平滑肌条收缩性的影响
摘要：目的：考察山楂醇提取液对大鼠离体胃、肠平滑肌的影响。方法：本研究以大鼠的离体胃、肠平滑肌条为模型，考察在正常克氏液条件下加入山楂提取液大鼠胃、肠平滑肌条收缩状况。同时观察乙酰胆碱、阿托品作用下加入山楂提取液大鼠肠平滑肌条收缩状况。结果：山楂醇提取液在5-20mg生药／ml浓度范围内可显著抑制大鼠胃、肠平滑肌条的运动，且具有明显剂量依赖性。山楂醇提取液（20mg生药／ml）可拮抗乙酰胆碱引起的胃肠平滑肌的强烈收缩，山楂醇提取液（20mg生药／ml）可对抗阿托品引起的肠平滑肌的舒张作用。结论：山楂醇提取液对大鼠胃、肠平滑肌条的收缩具有明显的抑制作用。FXR1基因与增强型绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达
摘要：目的：构建携带人脆性X相关基因1（Fragile X related gene 1，FXR1）与增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein，EGFP）的融合表达载体并进行表达，为研究FXR1基因在脆性X综合征中的作用机制奠定基础。方法：以重组质粒pYESTrp3／FXR1为模板，PCR扩增FXR1基因，将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP—N1中，形成重组表达载体pEGFP—N1／FXR1，并用脂质体法转染人胚肾细胞，荧光显微镜下观察GFP在细胞内的表达及Western Blotting检测FXR1的表达情况。结果：成功构建融合表达载体pEGFP-N1／FXR1，在人胚肾细胞实现表达，检测到融合蛋白EGFP／FXR1。结论：本实验成功构建EFGP和FXR1重组共表达载体并可在真核细胞中表达，为进一步研究FXR1在脆性X综合征中的作用机理奠定基础。
