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摘要:本文旨在探讨突触功能障碍大鼠模型在额叶、颞叶和海马这些与认知功能有关的脑区EEG频域特征。先用海马CA1区Aβ1-40加微量注射法制备突触功能障碍模型,用Morris水迷宫行为学测试系统检测其学习记忆能力;然后记录上述脑区的EEG并做频谱分析。结果显示:(1)模型组在第3,4、5、6训练时间段的平均逃避潜伏期较正常组明显延长,和第2训练时间段的相比较,正常组第5训练时间段平均逃避潜伏期明显缩短,模型组到第7训练时间段平均逃避潜伏期开始明显缩短(P〈0.05);撤去平台后,模型组在原平台所在象限的时间百分比明显降低(P〈0.05)。(2)模型组的EEG表现为α节律慢化,功率下降,其主峰频率左移2Hz,并且额叶、颞叶和海马的δ波和θ波功率不同程度地增高。由此Aβ1-40微量注射法成功制备了突触功能障碍大鼠模型。该模型大鼠的学习记忆能力降低,其频谱特征表现为α节律慢化,功率下降或消失,慢波(δ波和θ波)活动增多,功率不同程度地增高。这些与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的EEG一致,可为以后对突触功能障碍时受累皮层进行深入的可塑性和神经再生的研究提供电生理基础。
摘要:目的:研究体外兔肝细胞分离及培养方法,比较不同培养基条件下兔肝细胞培养过程。方法:采用非灌注胶原酶消化法分离兔肝细胞,分别采用RPIM1640培养液(含10%新生牛血清),DMEM培养液(含10%新生牛血清),DMEM培养液(含10%胎牛血清)培养,计数法观察原代细胞增殖变化,MTF法观察传代细胞增殖情况。培养细膨采用PAS染色法鉴定,电镜观察细胞超微结构。结果:分离的肝细胞细胞活率大于85%;DMEM培养液(含10%胎牛血清)培养肝细胞生长状态较另两种培养液中的肝细胞强,DMEM培养液(含10%新生牛血清)中的细胞增殖能力较RPIM1640培养液(含10%新生牛血清)高,具有统计学意义。PAS染色和透射电镜观察培养细胞胞质中有大量糖原颗粒。结论:本实验采用的分离方法可获得较纯的肝细胞,而且操作简便实用。DMEM培养液较RPIM1640培养液更加适宜原代培养肝细胞生长,胎牛血清对培养肝细胞的生长促进作用明显高于新生牛血清。
摘要:目的:提取结核分枝杆菌菌体蛋白并建立一种利用双向电泳分离结核分枝杆菌蛋白质组的方法。方法:分离提取结核分枝杆菌菌体蛋白。样品采用不同pH梯度的鹏胶条进行第一向等电聚焦,12%SDS—PAGE凝胶进行二向电泳。银染后双向电泳图谱用Molecular Image Fx激光图像扫描仪扫描,PDQuest6.0软件完成配比分析。结果:优化了结核分枝杆菌菌体蛋白的提取方法,用裂解液8mol/L尿素结合2mol/L硫脲,140mmol/LDTT,0.5%biolyte,4%CHAPs,400mg/m1lOG处理,成功提取了蛋白,并通过结核分枝杆菌双向电泳技术体系的优化,建立了结核分枝杆菌菌体蛋白的分解图谱。pH4—7及pH7—10两胶面上共1387个点,占所检测到的蛋白总数的86%,绝大部分(1194个)蛋白位于pH4—7范围内。结论:为进一步开展结核分枝杆菌的比较蛋白质组学研究提供了方法学参考。
摘要:目的:构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)的真核表达载体pcDNA3.1/HA—myc-His(-)Z—CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法:以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PcR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3.1/HA—myc-His(-)Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3.1/HA—myc-His(-)Z—CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况.结果:阳性重组质粒pcDNA3.1/HA—myc-His(-)ZCD经Eco砌和BanHI双酶切后,获得约为5.5kb片段和1.3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank的序列一致.western blot检测到CD基因的表达。结论:成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。
摘要:目的:建立山茱萸的组织培养及植株再生体系。方法:分别以山茱萸的叶片、花柄和花托为材料,进行山茱萸不同外植体的离体培养研究,筛选最佳培养基组成。结果:适宜山茱萸叶片愈伤组织诱导的培养基组合为1/2MS,附加BA2.0mg/L、IBA0,5—1.0mg/L;适宜山茱萸花柄、花托愈伤组织诱导的培养基组合为1/2MS,附加BA1.0mg/L、2,4-D0.5mg/L;在1/2MS附加BA2.0mg/L、IBA0.05mg/L的培养基上,可诱导不定芽的产生;1/2MS附加IBA2.0mg/L的培养基有利于山茱萸试管苗生根。讨论:山茱萸的花托是进行组织培养的最适外植体,白色或翠绿色、结构致密的愈伤组织较易分化产生不定芽。
摘要:目的:研究原癌基因c—met及其相关基因在大鼠胰腺发育及细胞功能完善过程中的表达。方法:采用高密度寡核苷酸芯片(Affymetrix芯片)对孕12.5(E12.5)、E15.5和E18.5、新生、成年胰腺进行基因转录水平分析,并用RT—PCR验证基因在大鼠胰腺不同发育时期的表达。结果:c—met基因在E15.5、E18.5较成年特异高表达。芯片中c—met转录调控基因和信号传导通路相关基因的表达趋势与c—met高度相似。RT—PCR(所用引物设计区域与芯片相同)验证,c—met表达趋势与芯片结果相符;与芯片c—met探针所用引物不同RT—PCR,结果却在各发育阶段呈现与芯片不同的表达趋势。结论:提示c—met可能在胰腺发育细胞功能完善的关键阶段起调控作用,参与胚胎胰腺发育中晚期细胞功能完善的信号传导过程。并且c—met在胰腺发育中发挥作用有可能存在不同转录本。
摘要:目的:检测雌激素受体β(ERβ)在胃组织的存在状况并研究其在人胃腺癌中的作用。方法:使用免疫组化方法,在蛋白水平对配对的原发性胃腺癌患者的癌组织及其癌旁非癌组织的ERB亚型进行检测,采用20例正常胃粘膜作为对照。结果:ERβ蛋白在部分胃腺癌及其癌旁非癌组织表达,但ERβ阳性率及表达模式不同。与配对的非癌组织相比,部分癌组织发生了ERβ表达减少或丢失,而且ERβ表达减少与低分化程度相关(P=0.041),丢失的ERβ仅见于低分化癌。结论:ERβ可作为识别某些进展期胃腺癌发生发展的标志物,ERβ表达改变在低分化癌中更常见,也提示ERβ阳性胃腺癌可能比ERp表达丢失者预后更好;另外,在非癌组织腺上皮存在E邢的表达提示在正常胃组织中ERB很可能具有一种保护性作用。
摘要:目的:研究碘化钾对染铅肾小管上皮细胞XIAP的表达及凋亡的影响,探讨其对抵抗铅导致的近曲肾小管上皮细胞损伤的可能机制。方法:应用流式细胞术检测染铅HK-2细胞及对照组细胞中XIAP的表达及凋亡情况。结果:染铅HK-2细胞中XIAP的表达明显低于对照组,且虽然铅浓度的增高而降低(P〈0.05/P〈0.01),碘化钾能够减弱上述变化(P〈0.05/P〈0.01);染铅HK-2细胞的凋亡率明显高于对照组,且虽然铅浓度的增高而升高(P〈0.05/P〈0.01),碘化钾能够降低染铅细胞的凋亡率(P〈0.05/P〈0.01)。结论:碘化钾能够上调染铅HK-2细胞中抗凋亡蛋白XIAP的表达,降低凋亡率,在一定程度上降低铅对细胞的损伤。
摘要:目的:研究在构建的去卵巢骨质疏松山羊动物模型中,骨髓基质细胞(MSCs)的生物学特性以及其成骨能力。方法:建立去卵巢骨质疏松山羊动物模型,使用全骨髓法获取去卵巢骨质疏松山羊(实验组)和正常山羊(对照组)MSCs,流式细胞仪检测实验组和对照组细胞周期及增殖指数(PI);地塞米松诱导21d时油红O染色,观察成脂分化比例;成骨诱导液诱导14d,碱性磷酸酶(ALP)染色、检测ALP表达量。结果:对照组PI高于实验组;地塞米松诱导后实验组脂肪细胞比例明显高于对照组;成骨诱导第7d,对照组ALP的表达量明显高于实验组。结论:去卵巢骨质疏松山羊的MSCs增殖和成骨分化能力都降低,可能与骨质疏松症的发病机理有关。
摘要:目的:建立具有高分辨率和稳定性的乳腺增生组织蛋白质组的双向电泳图谱,并对其进行差异蛋白质组分析。方法:取乳腺增生病患者增生部位及正常部位乳腺组织,匀浆提取乳腺组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCyder软件进行分析。结果:在乳腺增生病增生的组织中,有12个蛋白质表达水平显著增加,另外3个蛋白质表达水平显著下降。结论:利用DIGE技术可以作胶内时比分析,也可以根据内标消除胶与胶之间的差异,提高统计的可信度;分析所得的15个差异蛋白质可能与乳腺增生疾病的发生与发展有关。
摘要:本研究通过调查中国南方SLE人群和健康对照人群中TNFR2基因两个位点(nt587,nt694)的多态性频率,探讨TNFR2基因多态性是否与中国汉族SLE人群的易感性相关。结果发现128例SLE中,nt587G的等位基因频率为54个(21.1%);而135例健康人群中nt587G的频率为35个(13.0%);SLE组明显高于健康对照人群(P〈0.05),携带nt587G的个体SLE发病危险性大。同时128例SLE中,舶94A的等位基因频率为41个(16.0%);而健康人群中舶94A的频率为32个(11.9%);两组比较无显著差异(P=0.149)。提示TNFR2基因nt587的多态性与中国南方SLE人群相关,可能通过影响TNFR2的表达而参与SLE的发病,而nt694(G—A)的多态性与中国南方SLE人群不相关。
摘要:背景与目的:中药中的砷含量及其形态学研究已成为当前中医药领域的研究热点。本文旨在建立科学和可行的砷含量检测方法,并对部分中药中的砷含量进行了测定。方法:中药材样品湿法消化后,采用原子荧光光谱法检测其中的砷含量,并对消化液的种类以及干扰的消除进行了探讨。结果:本法检出限为0.05μg·L^-1,样品加标回收率在96.6%~101,6%范围内,相对标准偏差小于2.36%。检测结果显示,大部分中药材中均含有一定量的砷,部分中药材中砷含量较高。结论:本法灵敏度高,操作简便,重现性好,能够应用于中药材中不同含量砷的分析,具有一定的实用价值。
摘要:目的:观察外源性甲状旁腺激素相关蛋白(1—40)(PTHrp(1-40))对原代培养新生Wistar鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响。方法:分离、培养Wistar乳鼠心肌成纤维细胞,加入不同浓度的PTHrp(1-40)共培养,用四氮唑盐比色法(MTT法)和^3H—TdR掺入法检测细胞增殖;^3H—Proline掺入法测定胶原合成。结果随着一定浓度PTHrp(1-40)的升高,CFs MTT法A490值及^3H—TdR的掺入量,^3H-脯氨酸掺入率呈明显的递减趋势。结论:PTHrp在一定程度上可抑制成纤维细胞增殖及细胞外基质的沉积。
摘要:目的:研究替沙坦薄膜衣片的处方筛选与包衣工艺控制参数。方法:利用正交试验设计,筛选替米沙坦片的优化处方与包衣过程中控制参数。结果:优选后的替米沙坦处方为为每1000片加入替米沙坦40g,填充剂山梨醇95g,表面活性剂葡甲胺12g,崩解剂羧甲基淀粉钠15g和润滑剂硬脂酸镁2.0g;包衣过程中16%欧巴代Y-1—7000浆以160g/min的流量在片床温度60℃下包薄膜衣,片增重控制在1.5%。3,0%。结论:替米沙坦片生产工艺合理、重现性好,产品稳定性强。
摘要:目的:确定辣蓼中有效成分芦丁的定性鉴别和总黄酮含量的测定方法。方法:采用薄层层析(TLC)、紫外分光光度法(UV)对辣蓼分别进行理化鉴别和含量测定。结果:芦丁确系辣蓼中主要有效成分;同时建立UV检测中浓度在0.00808—0.04848mg/ml范围内与吸收度间的具有良好线性关系,其回归方程为A:11.4716C-0.0003(r=0.9928,n=6),平均回收率为97.95%(11SD=1.88%);辣蓼样品中总黄酮的平均含量为1.939%。结论:本方法简便、快速、准确;为辣蓼开发新药及其相关质量标准的研究提供了依据。
摘要:目的:建立稳定可靠的肝硬化门脉高压大鼠动物模型。材料与方法:50只雄性sD大鼠,随机分为3组。正常对照组10只,行假手术,给予正常饮食。肝硬化A组20只,先行左肾上腺静脉结扎,然后给予初始浓度为0.03%的硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)溶液作为饮用水并根据大鼠体重变化调节给药浓度。肝硬化B组20只,行假手术,给予固定浓度为0.03%TAA溶液。给药时间为14周。结果:肝硬化A组大鼠死亡率为0,肝硬化形成率达到100%。肝硬化B组大鼠死亡率15%,肝硬化形成率75%。肝硬化A组大鼠的门静脉压力明显高于肝硬化B组和对照组。结论:采用左肾上腺静脉结扎并根据体重变化调节TAA给药浓度可建立稳定可靠的肝硬化门脉高压大鼠动物模型。
摘要:目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)在体外对胃癌SGC-7901细胞VEGF表达的影响。方法:体外培养胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测白藜芦醇对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,RT—PCR方法检测VEGFmRNA表达,免疫细胞化学检测VEGF蛋白的表达。结果:白藜芦醇呈时间剂量性抑制胃癌细胞SGC7901的增殖;胃癌SGC-7901细胞高水平表达VEGF,白藜芦醇能显著降低胃癌SGC-7901细胞VEGFmRNA和蛋白表达。结论:白藜芦醇可以下调胃癌SGC-7901细胞VEGF的表达,抑制胃癌细胞的增殖。