摘要:目的:研究人卵巢癌HO8910细胞中肿瘤干细胞样细胞与血管生成拟态(VM)的关联。方法:(1)将亲代HO8910细胞置于无血清干细胞培养液中悬浮培养并连续传代。(2)流式细胞术检测第一、三、五、七代悬浮细胞中肿瘤干细胞标记物CD133表达情况,体外平板克隆实验、裸鼠体内成瘤实验验证第七代悬浮细胞的肿瘤干细胞样特性。(3)三维立体培养第七代悬浮细胞和亲代HO8910细胞,观察VM形成情况,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测二者中基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,MMP-9)表达情况。结果:(1)亲代HO8910细胞在无血清悬浮培养的条件下可连续传代,且传代过程中悬浮球逐渐增大。(2)流式细胞术检测第一、三、五、七代CD133阳性表达率(0.23%、31.74%、79.25%和88.18%)呈上升趋势。第七代悬浮细胞的克隆形成能力[(45.67±1.53)%]显著高于亲代细胞[(11.00±2.00)%](t=23.859,P=0.00)。裸鼠体内成瘤实验显示,第七代悬浮细胞的成瘤率(6/6)明显高于亲代细胞(0/6)。(3)三维立体培养中,第七代悬浮细胞较亲代HO8910细胞的VM形成时间更早,管状结构更密集。RT-PCR结果显示,第七代悬浮细胞中MMP-2、MMP-9表达高于亲代细胞(t=-4.544,P=0.045;t=-4.019,P=0.013)。结论:亲代HO8910细胞通过无血清悬浮培养可分选出肿瘤干细胞样细胞,其具有更强的VM形成能力,推测肿瘤干细胞样细胞可能通过影响VM的形成促进卵巢癌的生长和转移。
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