摘要：目的：研究大鼠阴道黏膜上皮细胞（RVECs）体外培养的影响因素,探索建立RVECs稳定的体外分离培养方法。方法：比较大鼠动情周期、DispaseⅡ配制方法、Dis-paseⅡ浓度、胰酶消化法及培养基对RVECs体外培养的影响。结果：动情前期的大鼠阴道上皮层更厚,消化后可获得更多RVECs;上皮层用D-KSFM配制的DispaseⅡ消化后能很好的贴壁,用PBS配制的DispaseⅡ消化后细胞贴壁欠佳;1.2U/ml DispaseⅡ的分离效果优于0.6U/ml DispaseⅡ;三步胰酶消化法比一步胰酶消化法可获得更多的贴壁细胞;RVECs在含血清培养基中生长快,但易受成纤维细胞污染。结论：动情前期的大鼠阴道组织依次经D-KSFM配制的1.2U/ml DispaseⅡ及三步胰酶消化后,在不含血清的D-KS-FM中培养,可获得更多的RVECs,细胞显示上皮细胞特征。