携带OPCML基因的慢病毒表达质粒的构建

作者:姚德生; 李力; Kenneth; Garson; Barbara; C.; Vanderhyden

摘要:目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(1entiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI—GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI—OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白后,将pWPI—OPCML、pCMV—dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白OPCML进一步验证pWPI—OPCML在细胞中OPCML的表达。结果:(1)pWPI—OPCML中携有正确的OPCML基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI—OPCML共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Westernblotting能检测到OPCML和GFP蛋白在靶细胞中的表达。结论:pWPI—OPCML能在人细胞中表达OPCML蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性。

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关键词:
  • 基因
  • opcml
  • 卵巢肿瘤
  • 慢病毒载体
  • 基因转移

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期刊名称:现代妇产科进展

期刊级别:北大期刊

期刊人气:7766

杂志介绍:
主管单位:中华人民共和国教育部
主办单位:山东大学;现代妇产科进展编辑委员会
出版地方:山东
快捷分类:医学
国际刊号:1004-7379
国内刊号:37-1211/R
邮发代号:24-104
创刊时间:1989
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
复合影响因子:1.09
综合影响因子:1.98