摘要:目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(1entiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI—GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI—OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白后,将pWPI—OPCML、pCMV—dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白OPCML进一步验证pWPI—OPCML在细胞中OPCML的表达。结果:(1)pWPI—OPCML中携有正确的OPCML基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI—OPCML共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Westernblotting能检测到OPCML和GFP蛋白在靶细胞中的表达。结论:pWPI—OPCML能在人细胞中表达OPCML蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性。
注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社