摘要：目的探索一种能获得具豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）活性、免疫原性且氨基酸序列与天然蛋白一致的CpTI蛋白表达纯化方法，为评价转CpTI水稻的安全性提供重要材料。方法将CpTI基因克隆到PET41EK表达载体中，构建该基因的非融合表达载体PET41EK-CpTI，将表达载体转入大肠杆菌BL21（DE3）和Rosetta（DE3）中进行表达，对诱导表达的时间、温度及IPTG浓度进行优化获得表达产物，对表达产物进行超滤和阴离子交换纯化从而获得纯化蛋白，对获得的纯化蛋白进行免疫原性、活性及N端测序鉴定等，并测定其浓度。结果在大肠杆菌Rosetta（DE3）、20-25℃、130r／min、0．5mmol／LIPTG、过夜诱导表达条件下，经过30kDa超滤和DAEEFF阴离子交换纯化，可以获得可溶表达量高、具有CpTI免疫原性和活性的纯化蛋白，其纯度达到95％。结论利用本研究建立的非融合表达方法可以得到在活性、免疫原性、分子量及氨基酸序列等方面与天然CpTI蛋白基本一致的CpTI蛋白，该法简单易行，能够满足大量生产表达的要求。