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天然产物研究与开发 2018年第01期杂志 文档列表

基于LC-MS/MS和GC-MS/MS技术分析“川朴”与“温朴”的差异化学成分1-9

摘要：为了探讨厚朴不同商品规格药材化学成分的整体差异,本文采用液相色谱串联四极杆飞行时间高分辨质谱(LC-Triple TOF MS/MS)和气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)结合多元统计分析技术对“川朴”与“温朴”的化学成分进行比较分析。通过串联质谱分析,对其质谱数据进行峰匹配、峰对齐、滤噪处理等进行特征峰提取;用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)进行数据处理。非挥发性成分的LC-Triple TOF MS/MS分析,根据一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合软件数据库搜索、标准品比对及相关文献进行成分鉴定;挥发性成分的GC-MS/MS分析,质谱图与NIST05质谱数据库匹配及参照相关文献进行成分鉴定。结果显示,“川朴”与“温朴”样品间的化学组成得到明显区分;初步筛选并鉴定出21种非挥发性差异成分和9种挥发性差异成分。该结果从化学角度为建立“川朴”与“温朴”药材辨识的新方法以及厚朴商品药材质量的综合评价提供基础资料。

一株黑果枸杞内生真菌RML6的黄色素稳定性研究10-14

摘要：植物内生真菌具有产天然活性物质的潜能,亦是天然色素的来源之一,本研究从黑枸杞叶部分离筛选得到产黄色素的内生真菌RML6,经鉴定该菌为Coprinellus radians,该菌株所产黄色素在341 nm波长处有最大吸收峰。从温度、pH、光照、金属离子、氧化剂与还原剂等方面探究黑枸杞内生真菌RML6所产黄色素的稳定性。结果表明该色素在自然光下放置8 h黄色素光吸收值无显著变化,但对紫外较为敏感应尽量避光存放;在pH6~10,20~100℃下不受太大影响;金属离子中,Na+、K+、Mg2+、Cu2+、Fe3+对该色素有护色或增色作用,Zn2+、Mn2+、Ca2+对色素有明显的影响;H2O2、NaHSO3对该色素有较强的破坏力;常见几种添加剂对色素无太大影响,同时蔗糖对其还具有明显的增色效应。该色素可广泛用于多个用途。

恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探15-20

摘要：初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNFα(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNFα及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。

金线莲多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞体外增殖、分泌NO及细胞因子的影响21-26

沙棘黄酮制备及体外抑制人前列腺癌PC-3细胞作用研究27-32

光谱法和分子对接研究二氢杨梅素与人血清白蛋白相互作用33-40

摘要：运用光谱法和分子对接理论研究了二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)与人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)的相互作用。结果表明,DMY有规律的使HSA内源荧光猝灭,其猝灭机制为两者形成复合物而引起的的静态猝灭;两者结合常数KA均大于105 L/mol,结合位点数n接近于1。根据热力学参数判断,两者结合反应能自发进行,主要作用力类型为静电作用力。计算得到DMY与HSA的结合距离r为3.32 nm,表明两者结合过程发生了非辐射能量转移。同步荧光和三维光谱分析结果显示,DMY使HSA的构象发生了一定程度的改变。位点竞争实验和分子对接结果表明,DMY在HSA上的更倾向结合位于亚结构域IIA(Site I)。

紫甘薯花青素对肝癌的影响及其机制的研究41-44

摘要：为研究紫甘薯花青素对体外培养的人肝癌细胞SNU-387的影响及其可能的机制。在不同终浓度紫甘薯花青素处理下,利用MTT法和Hoechst 33258染色法,测定人肝癌细胞SNU-387增殖活力,通过测定细胞TNF-α含量来考察死亡受体TNFR1介导的外源性凋亡通路的作用,通过测定细胞内Caspase-8表达量变化来考察NF-κB和MAPK信号通路的作用。结果表明在细胞凋亡实验中,不同浓度紫甘薯花青素作用下,人肝癌细胞SNU-387增殖活力降低,出现核固缩等凋亡特征,细胞内TNF-α含量和Caspase-8表达量提高;在阻断剂PDTC作用下,Caspase-8表达量无差异;在阻断剂SB203580作用下,Caspase-8表达量下降。综上,紫甘薯花青素可以通过死亡受体TNFR1介导的外源性凋亡通路和MAPK信号通路参与介导肝癌细胞SNU-387的凋亡过程。

豆腐柴叶挥发油化学成分及其抗氧化和抑菌作用研究45-51

摘要：采用水蒸气蒸馏法提取豆腐柴叶的挥发油,通过气相色谱质谱联用(GC-MS)对挥发油进行化学成分分析,并以还原能力、对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力及抑制微生物生长为评价指标,研究其体外抗氧化和抑菌作用。结果表明,从豆腐柴叶挥发油中共分离鉴定出化合物有26种,占挥发油总量的98.10%,主要成分有丙酸乙酯(33.70%)、2,2′-亚甲基双(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(9.38%)、叶绿醇(7.91%)、α桉叶醇(3.75%)、角鲨烯(3.39%)和棕榈酸(3.34%)等。豆腐柴叶挥发油具有较强的抗氧化活性,其还原能力和对DPPH、ABTS自由基清除能力随其浓度的增加而增强;对DPPH、ABTS自由基清除作用的半数抑制浓度(IC50)分别为3.396mg/mL和0.761mg/mL。豆腐柴叶挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌均有显著抑制作用,挥发油的质量浓度与对4种受试菌的抑制作用呈量效关系,其最低抑制浓度(MIC)均为1.125 mg/mL。故豆腐柴叶挥发油具有较好的抗氧化和抑菌特性,为其在食品和药品方面的研究与应用提供了理论基础。

高速逆流色谱分离真菌Aspergullus versicolor中二苯醚类化合物52-55

摘要：首次运用高速逆流色谱(HSCCC)技术从经表观遗传试剂诱导的曲霉属真菌Aspergullus versicolor的次级代谢产物中快速分离纯化得到二苯醚类化合物diorcinol,建立了快速分离制备杂色曲霉次级代谢产物中的二苯醚类化合物的方法。本研究首先对经过表观遗传试剂诱导的菌株DJ013的发酵液用乙酸乙酯浸提,萃取富集二苯醚类成分,然后以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶5∶4∶5,v/v)为两相溶剂系统进行高速逆流色谱分离纯化,上相为固定相,下相为流动相,流速5.0 mL/min,实验温度25℃,转速为800rpm,检测波长为220nm。对所得到的目标化合物经超高效液相色谱(UPLC)纯度分析,其纯度在97%以上。通过质谱、核磁等波谱技术鉴定所分离得到的目标化合物为二苯醚类化合物diorcinol。与前期研究中采用的柱色谱法、HPLC等多种方法相结合的长达48 h的制备周期相比,高速逆流色谱法仅需55min,效率大大提高。该结果表明,本研究建立的高速逆流色谱方法可高效高纯度获得具有抗菌活性的二苯醚类化合物,将为二苯醚化合物的进一步研究提供高效制备方法。

黄芩饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的HPLC指纹图谱相关性研究56-60

摘要：建立黄芩饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的HPLC指纹图谱,并对其相关性进行评价。采用HPLC法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);甲醇:0.05%磷酸水作为流动相;流速10mL/min;检测波长275 nm;柱温35℃;进样体积10μL。黄芩10批饮片、标准汤剂、中间体及配方颗粒指纹图谱均呈现9个共有特征峰,呈良好的相关性,在9个共有峰中指认出黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素3个成分。黄芩饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的主要化学成分组成基本相同,建立的HPLC指纹图谱方法可用于黄芩配方颗粒的生产全过程的质量控制。

超高效液相色谱法测定不同种质资源五味子藤茎中5种黄酮类成分的含量61-64

不同产地香茅挥发油抑菌及抗氧化活性研究65-72

摘要：研究湖南、广东、浙江、福建、海南香茅挥发油的抑菌作用及抗氧化活性,为香茅挥发油的进一步开发利用提供基础。采用牛津杯法和试管稀释法测定挥发油的抑菌作用,并从总抗氧化能力、羟基自由基(·OH)清除能力和1,1-二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)清除能力三个方面考察挥发油的抗氧化活性。结果表明:香茅挥发油对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、白色念珠菌、桔青霉、黑曲霉均有一定的抑制作用,且不同产地的香茅挥发油对供试菌的抑制作用有一定的差异;5个产地的香茅挥发油均具有总抗氧化作用及清除·OH、DPPH自由基的能力,且随其质量浓度的增加而增大,不同产地的香茅挥发油抗氧化活性有一定差异。

基于“碳源”研究参苓白术散中药多糖对二株肠道拟杆菌体外生长的影响73-78

摘要：为研究参苓白术散多糖成份基于碳源调节拟杆菌的体外机制,以不同碳源(1-40%中药多糖、葡萄糖、BHI)对二株拟杆菌进行体外培养(以厚壁菌为对照),通过连续取样法测定不同碳源对其体外生长的影响。结果表明,不同浓度中药多糖均可影响拟杆菌的体外生长,以20%为最佳浓度;不同碳源,对Bacteroides thetaiotaomicron的生长影响:BHI组>最佳中药多糖组>葡萄糖组;对于Bacteroides fragile的生长影响:最佳中药多糖组>BHI组>葡萄糖;中药多糖对不同菌的影响:拟杆菌>厚壁菌。综上,中药多糖可作为拟杆菌的优势碳源调节肠道菌群平衡,这很可能是参苓白术散临床取效的微生态机制之一。

复方龙脉宁不同提取液对H2O2诱导H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用79-83

摘要：采用不同浓度H2O2处理H9c2心肌细胞,MTT法检测复方龙脉宁(Compound Longmaining,CLMN)水提液和醇提液含药血清(5%、10%、20%组)对氧化损伤的H9c2心肌细胞活性的影响,研究CLMN提取液对H2O2导致H9c2心肌细胞氧化损伤的修复作用。结果显示,当H2O2浓度为100μM,作用时间24 h,可建立稳定的H9c2心肌细胞氧化损伤模型;与对照组相比,经H2O2处理后的细胞活性明显下降,SOD活性显著降低,而LDH活性、MDA含量则显著增加,而用CLMN水提液和醇提液含药血清(10%、20%组)处理氧化损伤的H9c2心肌细胞,可显著提高细胞存活率及SOD活性,降低LDH活性和MDA含量。说明CLMN水提液和醇提液均对H2O2诱导H9c2心肌细胞氧化损伤具有很好的保护作用

不同厂家黄芩颗粒的红外光谱鉴别分析84-88

摘要：运用中红外光谱法鉴别黄芩配方颗粒的不同生产厂家。分析黄芩配方颗粒六个生产厂家的红外光谱图、导数光谱图。同一厂家的黄芩颗粒样品的红外光谱图相似度很大,原始红外光谱图和一阶导数光谱图的部分特征吸收峰其位置、强度、形状上均存在一定差异,但不能区分不同厂家。二阶导数在2914~2900、2887、1730、1565~1537、1500、1218~1206、994、763cm-1附近的特征吸收峰其位置、强度、形状上均存在的差异,可以把六个生产厂家同时给鉴别出来。该方法具备快速、简便、无损、准确、绿色的特点。

天麻素对Aβ1-42致痴呆大鼠模型的保护作用及机制探究89-96

摘要：为了探讨天麻素(Gastrodin)对Aβ1-42致痴呆大鼠的药理作用及其作用机制,本研究主要通过向SD大鼠海马区微注射Aβ1-42建立大鼠痴呆模型,并在此模型的基础上评价天麻素对阿尔茨海默病的药理作用。实验分为5组:正常组、模型组、低剂量天麻素治疗组(1mg/kg)、中剂量天麻素治疗组(5 mg/kg)和高剂量天麻素治疗组(25 mg/kg)。天麻素治疗组SD大鼠微注射Aβ1-42后,连续灌胃天麻素14d,模型组SD大鼠微注射Aβ1-42后,连续灌胃生理盐水14d。通过水迷宫实验检测各组大鼠行为学变化;用ELISA法检测脑组织中SOD活性、MDA含量和GSH-Px的含量。通过HE染色观察各组SD大鼠脑组织的病理学变化。通过TUNEL法检测各组大鼠脑组织的脑细胞凋亡情况。使用Western blot法检测脑组织中GSK-3β的磷酸化水平。结果发现,模型组大鼠的学习记忆能力明显下降,脑组织出现严重的损伤和凋亡现象,并且脑组织中SOD和GSH Px的活性明显降低,而MDA含量显著升高。通过天麻素的治疗干预后,我们发现,天麻素治疗可以显著逆转上述的损伤现象,并且天麻素的这种保护作用具有一定的剂量依赖性。与此同时,我们还发现,高剂量天麻素可显著升高脑组织中GSK-3β磷酸化水平。以上结果表明,天麻素对海马区微注射Aβ1-42致痴呆SD大鼠有一定的改善和保护作用,其作用机制可能是激活GSK-3β信号通路发挥抗氧化和抗凋亡作用。

当药黄素对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用97-101

摘要：研究当药黄素在H2O2诱导PC12细胞损伤中的作用。建立H2O2诱导的PC12细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,比色法测定细胞MDA和上清液LDH含量,以及SOD、CAT和GSH-Px酶活力,采用DCFH-DA荧光染色测定细胞ROS含量,JC-1染色测定细胞线粒体膜电位。当药黄素能够提高H2O2诱导损伤的PC12细胞的细胞活力,增加细胞内SOD、CAT和GSH-Px活力,降低MDA、LDH含量,抑制细胞内ROS增加,稳定细胞线粒体膜电位。当药黄素对H2O2诱导的PC12细胞损伤有保护作用。

长根静灰球活性物质提取及体外抗肿瘤作用研究102-108

摘要：以长根静灰球为原料,石油醚为溶媒,进行索氏提取,抽滤、干燥后得到石油醚提取物;滤渣干燥后,同样的方法依次加入乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、蒸馏水进行提取,分别得到乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、乙醇提取物和水提取物。采用MTT法检测不同溶剂提取物对MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)、Hela(子宫颈癌细胞)细胞的细胞活力的抑制作用,对正丁醇提取物处理过的MDA-MB-231细胞进行胞内活性氧(ROS)测定、线粒体膜电位检测和DAPI检测细胞凋亡,用倒置荧光显微镜观察。结果发现长根静灰球提取物可以诱导MDA-MB-231、Hela细胞活力降低,特别是正丁醇提取物,对MDA-MB-231和Hela细胞的细胞活力有明显的抑制作用,正丁醇提取物的浓度在200-μg/mL时,细胞活力被显著抑制。相比Hela,MDA-MB-21对于提取物的作用较为敏感。长根静灰球正丁醇提取物,能使MDA-MB-231细胞活力明显下降,线粒体膜电位显著下降,胞内活性氧显著增加,通过产生ROS调节线粒体途径引发细胞凋亡。