肿瘤坏死因子拮抗剂在类风湿关节炎中的应用进展
摘要：类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种全身性自身免疫性疾病,具有很高的致残性。在临床中我们发现传统的慢作用药有时疗效不佳,并且一些患者虽然临床症状已经缓解,但滑膜炎症仍然存在,关节破坏仍在进展[1]。近年研制出针对特定细胞因子的生物制剂,使人们看到了治疗的新希望。小儿腹部包块伴腹痛1例
摘要：患儿女,7岁,因＂反复腹痛7d＂入院,入院后患儿无发热,无恶心呕吐,饮食二便好。入院查体：神清语利,营养中等,心肺未见异常,腹部平坦,腹软,脐部右侧腹部有压痛,未扪及明显包块,无局部反跳痛及肌紧张,肠鸣音正常,未闻及血管杂音,肝脾未扪及。入院血常规：WBC：7.38×109/L,NEU：重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP的构建与鉴定
摘要：目的：转录因子Olig1调控了少突胶质前体细胞的分化和成熟,并参与了脱髓鞘损伤后的修复,是治疗脱髓鞘疾病的候选基因,在缺血性脑血管病的治疗中具有极大的应用价值。本实验旨在构建携带Olig1基因的重组腺病毒载体。方法：pDC315-Olig1为模板,聚合酶链反应扩增酶切Olig1片段,连接到带有eGFP标记基因的载体质粒pDC315-eGFP上,构建穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP,经PCR,酶切及测序鉴定后,利用AdMax包装系统,通过脂质体2000的介导与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组后产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP,应用PCR对毒种进行鉴定,传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒。以50%组织培养感染剂量法（TCID50）测定病毒滴度。结果：经聚合酶链反应,酶切鉴定和测序分析,得到大小700bp（Olig1）目的片段,证实正确构建重组穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP和重组腺病毒Ad5-Olig1-eGFP,测得重组腺病毒颗粒数为2.3×1011v.p./mL。结论：成功构建携带Olig1的重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP,为缺血性脑血管病的基因治疗提供基因载体并奠定实验基础。NDV7793活化的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤及其机制研究
摘要：目的：研究NDV7793激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,并探讨可能的相关机制。方法：用免疫磁珠分离法分离人NK细胞,用乳酸脱氢酶释放法（LDH法）检测不同血凝单位（25.6Hu,51.2Hu,102.4Hu,204.8Hu,512.0Hu）的NDV7793刺激NK细胞后对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,分别用ELISA法和流式细胞术检测活化后的NK细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平及细胞膜表面的TRAIL蛋白表达水平。结果：人外周血NK细胞分离纯度达（90.6±1.15）%;NDV7793能提高NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,其杀伤效力（释放的LDH活力值）随着效靶细胞作用时间的增加及效靶细胞比的增大而增强;NDV7793能显著提高NK细胞TNF-α的分泌水平,其中204.8HuNDV7793刺激NK细胞12h后,TNF-α分泌水平达到高峰（0.184±0.01）;102.4HuNDV7793刺激NK细胞16h后,NK细胞膜表面TRAIL表达达到高峰（22.77±1.8）%。结论：NDV7793能增强NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,杀伤机制可能是和提高NK细胞分泌的TNF-α及上调细胞膜表面TRAIL蛋白有关。本刊优秀作者可提升为本刊审稿专家
摘要：为进一步加快网上审稿进度,本刊现正组建新一届审稿专家。新一届审稿专家主要通过以下几个主要渠道组建：1由本刊编辑部向有关医院科研管理部门发出公函,请医院科研管理部门按本刊限定名额推荐,最后由本刊核定相关资料。Stathmin特异性siRNA表达质粒抑制stathmin的表达
摘要：目的：构建微管解聚蛋白stathmin基因的特异性siRNA质粒表达载体,以便研究stathmin在鼻咽癌中的生物学作用。方法：合成stathmin特异性DN段,退火形成的双链DN段克隆于质粒表达载体pGenesil-1.3;载体经扩增后,进行酶切和测序鉴定;采用QIAGEN公司脂质体（effectenetransfectionreagent）将鉴定后的重组质粒转入鼻咽癌CNE2细胞;RT-PCR与Westernblot检测stathmin基因表达。结果：酶切和测序分析表明,插入siRNA质粒表达载体中的DN段,其碱基序列和插入方向正确。表达分析证实特异性siRNA质粒表达载体能有效抑制鼻咽癌CNE2细胞中stathmin的表达。结论：构建的siRNA质粒表达载体对stathmin的表达有很好的抑制作用。血卟啉单甲醚对人宫颈癌Hela细胞体外影响的研究
摘要：目的：初步探讨血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）介导的光动力疗法（HMME-PDT）对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的杀伤效应及影响宫颈癌细胞光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）杀伤效应的主要因素。方法：通过采用不同光敏剂浓度、光照能量密度及细胞孵育时间介导的光动力作用于人宫颈癌Hela细胞,MTT法检测24h后的细胞生长抑制率。结果：光敏剂浓度〈2.5μg/mL的不同组细胞生长抑制率有明显差异,光照能量密度≥1.5J/cm2及孵育时间≥4h的细胞之间生长抑制率差异无统计学意义。HMME 2.5μg/mL、光照能量密度1.5J/cm2和孵育时间≥4h可能是PDT对Hela细胞杀伤作用的最佳参数。结论：特定光源下,光敏剂的浓度、光照剂量及孵育时间是影响HMME-PDT效应的主要因素。人源肝细胞系CL-1、HepFMMU、HepG2、C3A生物学特性与功能的比较
摘要：目的：比较体外培养的四种人源肝细胞系CL-1、HepFMMU、HepG2、C3A生物学与功能特性的异同,初步评价其应用于生物人工肝的可行性,为其在组织工程学研究和临床医学中的应用奠定基础。方法：4种肝细胞在接种密度相同的条件下培养7d,观察4种细胞形态特征和功能状态,检测培养液中白蛋白、尿素及安定代谢量。结果：4种肝细胞系均具有较快的生长速度,功能学比较C3A具有良好的白蛋白合成和安定代谢功能;CL-1具有良好的尿素合成功能。结论：4种肝细胞具有良好的增殖能力,C3A具有良好的白蛋白合成及安定代谢能力,但其尿素合成能力较差,需进一步改进;CL-1具有较好的尿素合成能力,但其安定代谢和白蛋白合成功能较差;HepFMMU功能较差,不适宜用于生物人工肝。人参皂甙Rg3对K562细胞增殖及细胞周期的影响
摘要：目的：研究人参皂甙Rg3（ginsenoside,Rg3）对白血病K562细胞的作用及其相关机制。方法：将白血病K562细胞分为对照组和Rg3组,Rg3组包括10、20、40、80、100μg/mL组,培养24、48、72h,四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性（本文结果未列）。再将K562细胞分为对照组和实验组（80μg/mLRg3组）,培养24、48、72h,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine,BrdU）标记实验观察细胞的增殖情况,流式细胞仪分析细胞24h、48h、72h时细胞周期的变化情况。结果：BrdU标记测定显示,免疫细胞化学染色显示白血病K562细胞呈阳性反应,BrdU阳性细胞数分别为：对照组24h（28.4±3.0）、48h（31.4±3.3）、72h（38.1±4.0）,Rg3组24h（22.7±2.5）、48h（17.3±2.9）、72h（19.1±1.1）,均具有统计学意义（P〈0.01）;流式细胞仪检测显示：48hRg3组细胞周期的G2期增高了3.84倍。结论：人参皂甙Rg3可抑制K562细胞增殖,其机制可能与人参皂甙Rg3将K562细胞周期阻滞在G2期,使细胞不能进行正常的有丝分裂,从而抑制了细胞的增殖有关。人CCL19基因重组腺病毒载体的构建及其在A549细胞中的表达
摘要：目的：构建人CCL19重组腺病毒,在肺癌细胞株A549中验证其表达情况。方法：通过pAdeasy-1系统,获得重组腺病毒Ad-CCL19颗粒,测定病毒滴度。RT-PCR和Western blot分别检测转染A549细胞内CCL19mRNA和蛋白质的表达。结果：经PCR、双酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒构建成功;效价为1.2×1011pfu/mL;感染后A549细胞中CCL19mRNA和蛋白质均有表达。结论：成功构建CCL19重组腺病毒载体,并可在A549细胞中有效表达,为进一步研究CCL19的功能奠定了基础。红皮病误诊误治1例
摘要：患者女,57岁,因＂躯干、四肢皮肤潮红、脱屑半月余＂由门诊拟诊＂急性药物疹＂入我院外科住院治疗。入院前3d,曾口服＂头孢克洛＂致躯干、四肢红斑、潮红、脱屑伴瘙痒疼痛,于外院治疗,诊断为＂剥脱性皮炎型药疹（头孢克洛可疑过敏）＂,予以＂甲强龙、氯雷他定、左氧＂等治疗,未见缓解,遂转诊至我院。入院当日,精神状态差、疲倦乏力,神志清楚,躯干、用ELISA法检测单肺通气不同时间后大鼠血管内皮生长因子及可溶性E选择素的水平
摘要：目的：探讨不同时间单肺通气后大鼠血管内皮生长因子（VEGF）及可溶性E选择素（sE选择素）表达的变化。方法：将30只SD大鼠随机分成5组各6只,对照组行双肺通气,01组、02组、03组、04组分别为将气管切开后将导管插入右侧主支气管行右侧肺单肺通气1/2、1、2、4h,听诊确定左侧肺萎陷。实验结束后检测肺组织中TNF-α和IL-8含量;用ELISA法检测血浆中sE-选择素、肺组织和血浆中VEGF的表达;电镜观察肺组织超微结构变化。结果：肺组织中TNF-α和IL-8含量随着单肺通气时间延长而逐步升高;sE-选择素在大鼠单肺通气1、2、4h血浆中的表达较正常组显著升高（P〈0.05）;VEGF在大鼠单肺通气4h组肺组织中的表达较正常组显著降低（P〈0.05）,而在该组血浆中的表达较正常组显著升高（P〈0.05）;实验组电镜下细胞的超微结构改变,板层小体排空,线粒体损伤等改变。结论：长时间单肺通气可以导致急性肺损伤（ALI）,sE-选择素及VEGF在大鼠ALI形成过程中起着一定的作用。彩色多普勒血流显像评价兔肾缺血再灌注损伤的可行性研究
摘要：目的：探讨彩色多普勒血流显像（CDFI）评价肾缺血再灌注损伤发生的可行性。方法：48只大白兔随机分为假手术对照（S）组、缺血再灌注（I/R）组。应用CDFI检测各级兔肾动脉的血流动力学变化,测定兔肾组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）的平均光密度（OD）并做相关性分析。结果：与S组比较,I/R2h组无明显血流动力学改变,I/R8h、24h组分别出现SRA、IRA的RI增大和MRA、SRA、IRA的Vmax、PI、RI增大（P〈0.05）。I/R8h,24h组TNF-α的OD高于S组（P〈0.05）。I/R各组MRA、SRA和IRA的Vmax,PI,RI与兔肾组织TNF-α的OD变化呈正相关（P〈0.05）。结论：CDFI是一种无创、及时的评价肾缺血再灌注损伤发生的可行方法。以带蒂筋膜瓣为膜引导骨再生屏障膜包裹接种自体骨髓间充质干细胞的非细胞型组织工程促进骨缺损修复的研究
摘要：目的：研究带蒂筋膜瓣为膜引导骨再生（MGBR）屏障膜的可行性及其在促进超临界骨缺损（ECSD）修复方面的实验疗效。方法：50只大白兔,尺骨造ECSD模型,A组单纯植入化骨（NTEB）（对照组）,B组制备带蒂筋膜瓣包裹NTEB（实验组）,术后对实验动物行一般情况观察、修复区X射线检查、大体观察和组织学检查、骨形态计量分析及生物力学测定分析。结果：各检查结果均显示B组优于A组。结论：以带蒂筋膜瓣为屏障膜具有MGBR作用,其包裹NTEB应用MGBR技术对促进ECSD修复疗效显著。感染骨灭活原位移植自体富血小板血浆复合骨髓治疗慢性骨髓炎
摘要：目的：评价感染骨灭活原位移植自体富血小板血浆复合骨髓治疗慢性骨髓炎的疗效。方法：40只新西兰大白兔,随机分成两组,制成慢性骨髓炎模型。以感染灶最严重处为中心,线锯截取出死骨及感染骨2.0cm煮沸灭活15min,原位移植并闭合伤口。实验组术后局部注射制备好的自体富血小板血浆复合骨髓悬液,隔周1次,连续注射3周。对照组注射生理盐水。分别于术后第4、8、12、16周处死5只动物,行X线观察、组织学观察。结果：实验组成骨修复X线评分、组织学评分均高于对照组,两组之间差异有显著性（P〈0.05）。结论：感染骨灭活原位移植可作为骨支架,自体富血小板血浆复合骨髓,具有抗感染及促进成骨的双重作用,治疗慢性骨髓炎效果良好。长时间单肺通气对兔两侧肺灌洗液中TNF-α、IL-8的影响
摘要：目的：通过兔单肺通气模型,观察长时间单肺通气后肺灌洗液中TNF-α、IL-8浓度的变化。方法：选择新西兰大白兔35只,分为对照组（C组）、双肺通气组（TLV组）和单肺通气组（OLV组）,每组5只兔。TLV组和OLV组按通气时间1、3、5h分为3亚组,随后恢复双肺通气30min。对照组只行实验操作而不通气。观察通气时的心率（HR）、平均血压（MAP）、血气分析值、支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-8浓度。结果：与通气开始相比,OLV组在通气5hHR增高、MAP降低（P〈0.01）,pH、PaO2、SaO2在单肺通气后降低,PaCO2在OLV5h后升高（P〈0.01）;TLV组HR、MAP、pH、PaCO2在各观察时点无统计学差异（P〉0.05）。OLV组左右肺的TNF-α和IL-8值在通气5h增高（P〈0.01）;TLV组的左肺的TNF-α和IL-8值在通气5h增高（P〈0.01）;OLV组通气5h左肺TNF-α、IL-8值与TLV组左肺比较有显著差异（P〈0.01）。结论：单肺通气时肺损伤程度与单肺通气时间成正比,单肺通气肺损伤比双肺通气肺损伤严重。FMR1基因敲除对雄性小鼠生殖功能的影响
摘要：目的：利用脆性X智力低下1号基因（fragile xmental retardation-1,FMR1）敲除鼠,研究FMR1基因对雄性小鼠精子生成的调节及生殖功能的影响。方法：将雄性FMR1基因敲除鼠（KO）和野生型FVB小鼠（WT）分别与野生型FVB成年母鼠合笼,观察母鼠怀孕率,母鼠产仔数及能生育的雄鼠数量;测定雄鼠血清TTFSH及LH浓度;收集睾丸、附睾组织,对左附睾尾部精子进行计数、活率、形态等分析;右侧常规石蜡包埋,切片、HE染色。结果：KO组母鼠受孕率41.7%低于WT组87.5%（P〈0.05）,能够生育的KO雄鼠比率41.7%也低于WT组91.7%（P〈0.05）,与KO组和WT组小鼠交配的雌鼠平均产仔数分别为6.50±2.27和8.22±3.03（P〉0.05）,两组小鼠血清T,FSH,LH浓度无统计学差异。KO组的睾丸附睾病理切片与WT组比较未见明显异常,其精子活率及各种畸形率与WT小鼠比较均没有统计学差异（P〉0.05）。结论：可以推测FMR1基因对雄性生殖系统发育有一定的影响,Fmr1基因的缺失降低了雄性小鼠生育率,但对精子生成、畸形率等未见明显影响,其对雄性生殖系统影响机制还有待进一步的实验研究。槲皮素对高糖诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
摘要：目的：研究槲皮素（quercetin）对高糖（HG）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制作用,从而探讨其对糖尿病血管并发症的治疗作用及机制。方法：利用组织贴块法体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为正常糖组、高糖组、高糖＋槲皮素不同浓度组。MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术分析各组细胞周期变化;Western-blot法检测细胞细胞周期调控蛋白CyclinD1、CyclinE的表达。结果：槲皮素呈浓度依赖性抑制高糖诱导的大鼠VSMC的增殖;明显降低细胞的S期数目百分比（P〈0.05）,增加G0/G1期数目百分比（P〈0.05）;同时,槲皮素治疗组大鼠CyclinD1、CyclinE蛋白质水平下调（P〈0.05）。结论：从细胞分子水平说明槲皮素可能通过降低CyclinD1、CyclinE的表达,阻止细胞进入S期,减少有丝分裂来发挥对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。
